非克隆cDNA文库与RACE技术克隆小剂量辐射诱导新基因RIG1

目的：在获得了低剂量辐射诱导新基因RIG1EST片段的基础上,简便、有效地获得其全长cDNA,进行下一步的基因功能研究。方法：结合应用非克隆cDNA文库技术及7增强RACE技术,设计了巢式RACE PCR、生物素磁性分离、生物素标记探针杂交,再次磁性分离的纯化流程,结果：成功地克隆到RIG1EST片段3′端约1kb的序列,该序列3′端具有明显的polyA加尾信号,有编码区的终止密码子。进一步的分析明确了RIG1EST的正、负链及其蛋白编码方法。为RIG1 5′端的克隆提供了大量可靠的信息,目前RIG1 5′端的克隆已得到很好的进展。结论：所得结果与我们的设计完全一致,说明这一技术路线是简单可行的,为下一步研究RIG1基因在细胞辐射应激反应中的功能及被辐射诱导表达的调控模式奠定了基础。