MEBT/MEBO对慢性难愈合创面组织中CK10表达水平的影响

目的通过对比观察不同治疗方案对大鼠创面组织内CK10表达水平的影响,进一步揭示皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment, MEBT/MEBO)治疗慢性难愈合创面的部分作用机制。方法将90只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组(18只)、急创组(18只)、慢创组(18只)、rb-bFGF组(18只)及MEBO组(18只),其中空白组大鼠仅做备皮处理,急创组大鼠建立急性创面模型,慢创组、 rb-bFGF组及MEBO组大鼠建立慢性难愈合创面模型,且空白组大鼠局部皮肤予以生理盐水纱布湿敷,急创组及慢创组大鼠创面予以生理盐水治疗, rb-bFGF组大鼠创面予以重组牛碱性成纤维细胞生长因子(recombinant bovine basic fibroblast growth factor, rb-bFGF)凝胶治疗, MEBO组大鼠创面予以湿润烧伤膏(moist exposed burn ointment, MEBO)治疗,分别于治疗第3、 7、 14天对比观察5组大鼠皮肤或创面组织的形态学变化及CK10的表达水平。结果 (1)治疗第3天,空白组大鼠皮肤组织形态与正常皮肤组织形态无明显差异,其他各组大鼠创面组织水肿明显,可见大量炎性细胞浸润及少量成纤维细胞与新生毛细血管分布;治疗第14天,空白组大鼠皮肤组织形态与正常皮肤组织形态无明显差异,慢创组大鼠创面组织内仍有少量炎性细胞浸润,且有大量排列不规则的成纤维细胞分布,而急创组、 rb-bFGF组及MEBO组大鼠创面组织内可见排列整齐的新生毛细血管及完整的毛囊和皮脂腺等皮肤附属器,组织结构接近于正常皮肤组织。(2)治疗第3、 7、 14天,空白组大鼠皮肤组织内CK10表达水平无明显变化,P 0.05,差异无统计学意义;而急创组、慢创组、 rb-bFGF组及MEBO组大鼠创面组织内CK10表达水平呈现逐渐升高的趋势,P均0.05,差异具有统计学意义。(3)治疗第7、 14天,急创组、rb-bFGF组和MEBO组大鼠创面组织内CK10表达水平均明显高于慢创组,P均0.05,差异具有统计学意义;治疗第3、 7、 14天, rb-bFGF组和MEBO组大鼠创面组织内CK10表达水平均无明显差异,P均 0.05,差异无统计学意义。结论 MEBT/MEBO治疗慢性难愈合创面的疗效不亚于rb-bFGF凝胶,且改变表皮干细胞的外界生存环境,促进表皮干细胞向正常表皮细胞增殖、分化,可能是其促进慢性难愈合创面修复的作用机制。     

湿润暴露疗法/湿润烧伤膏对慢性创面组织中MMP-2和MMP-9表达的影响

目的探讨湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(MEBT/MEBO)作用MMP-2和MMP-9促进慢性创面愈合的机制。方法90只Wistar大鼠随机分为5组:MEBO组、贝复新组、慢性组、急性组和空白组,每组18只,构建慢性难愈合创面模型。采用ELISA、Western blot和qRT-PCR技术,检测d 3、14创面组织中MMP-2和MMP-9表达变化。结果(1)与慢性组相比,MEBO组和贝复新组创面愈合时间明显缩短且愈合率升高(P<0.05);且生长情况及病理形态学改变更好;(2)与慢性组相比,d 3标本匀浆中,MEBO组和贝复新组MMP-2和MMP-9表达均增高(均P<0.05);而d 14,MEBO组和贝复新组MMP-2和MMP-9均降低(P<0.05);(3)与慢性组相比,d 3标本,MEBO组和贝复新组MMP-2和MMP-9表达量均增高(P<0.05);而d 14,MEBO组和贝复新组MMP-2和MMP-9表达均降低(P<0.05)。结论MEBT/MEBO促进慢性创面愈合可能与调控MMP-2和MMP-9,来参与ECM的降解与重塑相关。     

皮肤再生医疗技术对大鼠慢性难愈合创面组织中VEGFR-2表达的动态调控作用

目的动态观察皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed bum ointment,MEBT/MEBO)对大鼠慢性难愈合创面组织中VEGFR-2表达水平的影响,探讨MEBT/MEBO促进创面愈合的分子学机制。方法按照随机数表法将90只健康成年SPF级SD雄性大鼠随机分为空白组(18只)、对照组(18只)、模型组(18只)、MEBO组(18只)和贝复济组(18只),其中空白组仅做备皮处理,对照组做全层皮肤缺损创面模型,模型组、MEBO组和贝复济组做慢性难愈合创面模型;模型建立后,空白组大鼠备皮后皮肤予以生理盐水纱布湿敷,对照组及模型组大鼠创面予以生理盐水纱布覆盖治疗,MEBO组大鼠创面予以湿润烧伤膏(moist exposed burn ointment,MEBO)药纱覆盖治疗,贝复济组大鼠创面予以贝复济药纱覆盖治疗,并分别于治疗后第3、7、14天检测、对比各组大鼠创面组织中VEGFR-2蛋白及VEGFR-2 mRNA的表达水平。结果创面处理后第3、7、14天,空白组大鼠皮肤组织中VEGFR-2蛋白及VEGFR-2 mRNA表达水平均无明显变化,P均0.05,差异无统计学意义;而对照组、模型组、MEBO组及贝复济组大鼠创面组织中VEGFR-2蛋白及VEGFR-2 mRNA表达水平变化均较明显,P均0.05,差异具有统计学意义,其中对照组、MEBO组及贝复济组大鼠创面组织中VEGFR-2蛋白及VEGFR-2 mRNA表达水平均呈先升高后降低的趋势,而模型组则呈递增趋势。治疗第3、7、14天,MEBO组大鼠创面组织中VEGFR-2蛋白和VEGFR-2 mRNA表达水平均高于模型组,P均0.05.差异具有统计学意义。结论 MEBT/MEBO可通过上调创面组织中VEGFR-2的表达水平,促进创面愈合。     

MEBT/MEBO通过PTEN/AKT通路对慢性难愈合创面中基质金属蛋白酶表达的影响

目的通过观察湿润暴露疗法/湿润烧伤膏(MEBT/MEBO)是否通过同源性磷酸酶张力蛋白(PTEN)/磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)通路影响慢性难愈合创面中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达,探讨MEBT/MEBO的作用机制。方法 150只Wistar雄性大鼠被随机分为5组,美宝组(30只)、贝复新组(30只)、模型组(30只)、急性组(30只)和空白组(30只),并构建创面模型。于造模的第3、7、14天观察创面愈合情况,并采取创面标本组织,进行HE染色及Masson染色观察各组创面组织形态学变化和Western Blot检测各组PTEN、p-AKT、MMP-2及MMP-9蛋白表达情况。结果(1)贝复新组及美宝组创面愈合时间显著短于模型组(P0.05),创面愈合率高于模型组(P0.05),且创面组织染色结果更好;(2)在造模第3天,贝复新组及美宝组中PTEN蛋白表达量明显低于模型组(P0.05),p-AKT、MMP-2、MMP-9蛋白表达高于模型组(P0.05);第14天,与模型组比较,贝复新组及美宝组中PTEN蛋白表达增高(P0.05),p-AKT、MMP-2、MMP-9蛋白表达降低(P0.05)。结论MEBT/MEBO可促进慢性难愈合创面的愈合,其可能作用机制是通过激活PTEN/AKT信号通路影响创面组织中MMP-2、MMP-9表达,及基底膜(BM)的降解与重塑。     

细胞角蛋白在慢性难愈合创面修复中的作用研究进展

细胞角蛋白(cytokeratin,CK)是角质细胞中的骨架蛋白,对细胞形态结构的维持以及损伤组织的修复具有重要作用。随着细胞角蛋白在创面修复中的作用被不断证实,以调节细胞角蛋白表达为作用机理的创面修复新理论、新方法、新技术也应运而生,但相对成熟的技术却较少,遂笔者在本文中综述了细胞角蛋白在慢性难愈合创面修复中的作用研究进展,旨在为细胞角蛋白在慢性难愈合创面修复中的进一步研究提供思路与线索。     

MEBT/MEBO对慢性难愈合创面组织中EGFR表达的影响

目的研究探讨皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对大鼠慢性难愈合创面组织中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)表达的影响。方法将60只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白组(12只)、对照组(12只)、模型组(12只)、贝复新组(12只)及MEBO组(12只),其中,空白组大鼠做背部备皮处理后采用生理盐水纱布湿敷;对照组大鼠做深达筋膜层的全层皮肤缺损创面模型后采用生理盐水纱布覆盖治疗;模型组大鼠做慢性难愈合创面模型后采用生理盐水纱布覆盖治疗;贝复新组大鼠做慢性难愈合创面模型后采用贝复新治疗;MEBO组大鼠做慢性难愈合创面模型后采用MEBO治疗。分别于治疗第3、7、14天取各组大鼠相同部位皮肤或创面组织进行HE染色,并用Western blot法检测组织中EGFR的含量,对比观察各组大鼠皮肤或创面组织中EGFR的表达水平及组织病理变化。结果局部处理后第3、7天,除空白组外,其余各组大鼠创面组织HE染色病理切片均显示炎症细胞增多,有新生血管生成;局部处理后第14天,对照组、贝复新组、MEBO组大鼠创面组织中炎症细胞消失,创面再上皮化。局部处理后第3、7、14天,空白组大鼠背部皮肤组织中EGFR表达水平无明显变化,F=0.667,P0.05,差异无统计学意义;对照组、模型组、贝复新组及MEBO组大鼠创面组织中EGFR表达水平变化均较明显,F值分别为79.546、89.600、63.036、56.628,P均0.01,差异具有统计学意义,其中对照组、贝复新组及MEBO组大鼠创面组织中EGFR表达水平均呈先升高后降低的趋势,而模型组则呈递增趋势;局部处理后第3、7、14天,各组大鼠皮肤或创面组织中EGFR表达水平组间两两对比,除贝复新组与MEBO组对比,P0.05,差异无统计学意义外,其余各组组间两两对比,P均0.05,差异具有统计学意义;局部处理后第3、7、14天,各组大鼠皮肤或创面组织中EGFR表达水平多个样本均数对比,F值分别为57.036、134.368、92.829,P均0.01,差异具有统计学意义。结论 MEBT/MEBO可通过上调大鼠慢性难愈合创面组织中EGFR的表达水平,促进慢性难愈合创面的愈合,能够为MEBT/MEBO治疗慢性难愈合创面的临床应用提供理论基础。     

从细胞外微环境探讨MEBT/MEBO对慢性难愈合创面的修复作用

慢性难愈合创面多见于创伤导致的长期卧床患者及糖尿病等慢性疾病患者,具有病程较长、迁延难愈等特点。近年来部分研究学者发现,细胞外微环境中存在的细胞角蛋白、细胞外基质对创面修复具有一定的促进作用。但对慢性难愈合创面具有显著疗效的皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO),其作用机制是否也与细胞外微环境相关,则未见相关研究报道。为此,笔者于本研究中阐述了细胞外微环境中的细胞角蛋白、细胞外基质对慢性难愈合创面修复的意义,并分析了MEBT/MEBO促进慢性难愈合创面修复与改善细胞外微环境,进而调控细胞分化方向的相关性及可能作用机制,旨在为MEBT/MEBO的临床应用提供部分理论依据。