构建海人酸急性致痫小鼠模型

目的 建立海人酸诱导的小鼠急性癫痫模型,并探讨其特点.方法 实验取健康雄性昆明小鼠99只,随机分为生理盐水组(n=33)和致痫组(n=66),痫组腹腔注射海人酸10mg/kg,生理盐水组腹腔注射生理盐水35μl/g.注射后连续5h观察小鼠是否有痫性发作并分级.当小鼠持续痫性发作达1h时给予地西泮4mg/kg腹腔注射,对照组3只和致痫组9只同时描记脑电图,并取脑切片后苏木精-伊红染色法观察海马各区病理学改变.结果 ①行为学表现,模型组小鼠注射海人酸后可出现湿狗样抖动、头面部肌肉阵挛、肢体阵挛及全面强直阵挛发作.生理盐水对照组未见癫痫发作.②脑电图表现,癫痫持续状态小鼠表现为持续性节律性棘波、棘慢波或高波幅慢波.③病理学研究,双侧海马均可出现神经元变性,以CA1和门区为主.结论 腹腔注射海人酸致痫小鼠急性模型同相应的大鼠模型一样,具有制作简便、痫性发作潜伏期短、致痫率高等特点,其所产生的急性癫痫模型具有与人类颞叶癫痫相似的行为、脑电图与神经病理改变.     

硼中子俘获疗法治疗小鼠颅内G422胶质细胞瘤

目的探讨硼中子俘获疗法（BNCT）治疗G422胶质细胞瘤的效果。方法建立小鼠颅内G422胶质细胞瘤模型，以ICP—AES法测定荷瘤小鼠不同组织中的10^B浓度。将荷瘤小鼠随机分为未照射组（0Gy）、γ射线对照组（5、10Gy）、反应堆组（5、10Gy）、BNCT组（5、10Gy）。采用生存时间的中位数、平均生存时间、生存时间延长率作为评价指标，观察各组的治疗效果。结果荷瘤小鼠腹腔注射对二羟苯丙氨酸硼溶液后1．5h，瘤组织内的10^B浓度达到峰值[（43．78±3．02）μg/g]。BNCT5、10Gy照射后，移植G422胶质细胞瘤小鼠的生存时间延长率分别为235％（233％）、329％（342％）。BNCT5Gy组的生存率与未照射组、γ射线5Gy组和反应堆5Gy组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。BNCT10Gy组的生存率与未照射组、γ射线5Gy组、γ射线10Gy组、反应堆5Gy组、反应堆10Gy组、BNCT5Gy组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论BNCT可以显著提高荷G422胶质细胞瘤小鼠的生存率，并具有剂量依赖性的特点；同时BNCT具有较高的相对生物学效应，优于同剂量γ射线的治疗效果。     

神经干细胞分化过程中bHLH基因表达

目的 通过检测神经干细胞分化过程中抑制型和激活型碱性螺旋（bHLH）转录调控因子mRNA的表达，探讨神经干细胞定向分化机制。方法 小鼠胎脑细胞原代培养并鉴定。用全反义维甲酸（RA）诱导神经干细胞分化，通过反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测神经干细胞分化前以及分化后1d、2d、3d、5d和10d时Hesl、Hess、Mashl、Mathl及NeumDmRNA的表达。结果 HeslmRNA在神经干细胞分化前后均表达，无显著差异；HessmRNA随分化时间延长表达下降；NeuroDmRNA和MashlmRNA仅在已分化神经元中表达；MathlmRNA在分化后期表达明显。结论 神经干细胞分化过程中bHLH转录因子mRNA的表达具有明显的时相性，这将为最终揭示神经干细胞分化调控机制提供实验基础。     

硼中子俘获疗法诱导SHG44胶质瘤细胞凋亡

目的 探讨硼中子俘获疗法(BNCT)是否抑制人脑胶质瘤细胞SHG44增殖及其作用机制。方法 BNCT作用后,应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测SHG44细胞的增殖抑制,采用光镜、电镜、荧光显微镜观察细胞的形态学变化。应用流式细胞仪检测SHG44细胞的凋亡率,以Western blot检测细胞表达Bcl-2、Bax蛋白的变化。结果 BNCT对SHG44细胞的增殖抑制作用呈剂量依赖性。BNCT 4和8 Gy后48 h流式细胞仪检测凋亡率分别为63.2%和88.3%。BNCT作用后,Bax蛋白表达增高,Bcl-2蛋白表达下降。结论 BNCT对胶质瘤细胞SHG44具有明显的增殖抑制及诱导凋亡作用,并使Bax蛋白表达上调、Bcl-2蛋白表达下调。     

时间因素对神经干细胞向γ-氨基丁酸能神经元分化的影响

目的探讨时间因素对体外培养的神经干细胞向γ氨基丁酸(gammaaminobutyricacid,GABA)能神经元分化的影响。方法体外培养神经干细胞并加以鉴定。利用反义寡核苷酸诱导神经干细胞向GABA能神经元分化,通过免疫荧光染色计算不同时间点的GAD65阳性细胞率。结果体外培养获得神经干细胞,染色可见神经球及分化细胞中分别有nestin、NF200、GFAP阳性细胞。方差分析表明不同时间点的阳性细胞率存在的差别具有显著意义(F=702.93,P<0.05),LSDt检验表明除第7d与第9d无明显差别外,其余各时间点之间均有明显差别。其中第7天的分化率最高为87.60%±6.26%。结论本实验利用反义寡核苷酸序列特异性阻断了Hes1的表达,促进了神经干细胞向GABA神经元分化,并发现在诱导分化7d后分化率达到最高值。     

青霉素与海人酸癫痫模型的比较

目的 通过用青霉素、海人酸2种药物制作癫痫模型,探讨2种致痫剂的作用特点及应用条件.方法 取健康雄性昆明小鼠90只,分为3组,对照组(n=10)、青霉素致痫组(n=40)和海人酸致痫组(n=40),青霉素致痫组腹腔注射青霉素7×106 U/kg,海人酸致痫组腹腔注射海人酸10mg/kg,生理盐水组腹腔注射生理盐水35 μL/g.注射后连续5 h观察小鼠是否有痫性发作并分级,进行脑电图描记.结果 空白对照组无痫性发作,两模型组均出现痫性发作,海人酸致痫组与青霉素致痫组按Racine分级0～Ⅴ级各级之间无明显差异(P＞0.05),小鼠出现癫痫的潜伏期海人酸致痫组比青霉素致痫组短(P<0.05),而且海人酸致痫组比青霉素致痫组死亡率低(P<0.05).结论 腹腔注射海人酸所致的动物模型具有与人类颞叶癫痫极为相似的癫痫发作行为学、脑电图特征,是理想的模拟人类颞叶癫痫的动物模型.     

硼中子俘获疗法诱导U87胶质瘤细胞凋亡

目的 探讨硼中子俘获疗法(BNCT)对人脑胶质瘤细胞株U87的增殖抑制和诱导凋亡的作用及可能机制.方法 实验分为未照射组(0 Gy)、γ射线对照组(4、8 Gy)、反应堆组(3.5 Gy)、BNCT组(4、8 Gy).采用形态观察、流式细胞仪Annexin V/PI荧光染色、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法等方法观察BNCT对U87细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用,以免疫组织化学技术检测P53蛋白的表达,应用western blot检测BCL-2、BAX蛋白表达的变化.结果 硼中子照射后细胞出现典型的凋亡形态改变.BNCT 4、8 Gy组处理后48 h细胞的凋亡率分别为65.1%、85.9%.BNCT 4、8 Gy组细胞生长抑制作用显著高于同等剂量的γ射线照射组(P＜0.01).未照射的U87细胞P53蛋白表达阴性,BNCT4、8 Gy照射后P53蛋白表达阳性.BNCT4、8 Gy照射后BCL-2蛋白表达下降,BAX蛋白上升.结论 BNCT对U87细胞具有显著的增殖抑制作用,并有剂量、时间依赖性特点.     

葡萄糖浓度对原代培养神经干细胞增殖、分化的影响

目的探讨不同浓度葡萄糖对神经干细胞增殖、分化的影响。方法胚胎小鼠脑细胞原代培养并鉴定。生理浓度和高浓度葡萄糖培养及诱导分化后．四唑盐比色（MTT）法及免疫荧光法观察两组不同葡萄糖浓度对神经干细胞增殖、分化的影响。结果原代培养的神经球表达巢蛋白（hestin），神经球分化的细胞表达神经丝200（NF200）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）。与生理浓度葡萄糖相比，高浓度葡萄糖降低了神经干细胞的增殖活力：分化3d后，高糖组的NF200阳性细胞和GFAP阳性细胞比例高于生理浓度组（P〈0．01），而nestin阳性细胞比例则反之（P〈0．01）；分化10d后，神经干细胞完全分化，免疫荧光检测发现生理浓度葡萄糖提高了NF200阳性细胞比例。结论高糖损害了神经干细胞的增殖活性。加速了神经干细胞的早期分化．降低了神经元的分化率。     

硼中子俘获疗法诱导U251胶质瘤细胞凋亡

目的研究硼中子俘获疗法（BNCT）能否诱导体外培养的U251细胞发生凋亡，并探讨其诱导细胞凋亡的机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法绘制细胞生长曲线，应用光镜、荧光显微镜、透射电子显微镜观察BNCT后细胞形态改变；使用流式细胞仪检测细胞凋亡率；利用细胞克隆形成实验分析细胞存活分数；用免疫组织化学方法检测相关蛋白表达的变化。结果在体外试验中BNCT对U251细胞的杀伤力强，并观察到了典型的细胞凋亡改变，4、8Gy照射后48h流式细胞仪检测，细胞凋亡率分别为60．2％、80．6％。在凋亡过程中，p53蛋白表达明显增高，而bcl-2蛋白表达下调。结论BNCT可诱导U251细胞发生凋亡，其机制可能与p53基因表达上调及bcl-2基因表达下调有关。     

化学合成siRNA对大鼠骨髓间充质干细胞Mash1基因的抑制效应

目的筛选能有效抑制大鼠骨髓间充质干细胞Mash1基因表达的siRNA序列。方法根据siRNA靶序列设计原则,设计并化学合成针对大鼠Mash1基因编码区的siRNA三对,并以一对无关序列的寡核苷酸作阴性对照。原代培养大鼠骨髓间充质干细胞并分为5组:Mash1-1组,Mash1-2组,Mash1-3组,无关序列组,空白组。用阳离子脂质体LipofectamineTM 2000转染,转染后48h行RT-PCR检测Mash1表达水平的变化。结果转染48h后,与序列3、无关序列、空白组细胞相比,序列1、序列2转染的大鼠骨髓间充质干细胞Mash1mRNA水平明显下降。结论化学合成siRNA能有效地抑制大鼠骨髓间充质干细胞Mash1的表达。