左旋门冬酰胺酶与盐霉素联合作用对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖凋亡的影响

 目的：研究左旋门冬酰胺酶（L-asparaginase,L-ASP）与盐霉素（salinomycin,Sal）联合作用对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖和凋亡的影响及其机制。方法：CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况;Western blotting方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、caspase-3、caspase-8、caspase-9及细胞色素C表达的变化;流式细胞术分析各实验组细胞凋亡率之间的差别。结果：不同浓度的L-ASP和Sal单独处理Jurkat细胞株后均显示出明显的增殖抑制作用,L-ASP的IC50为812 IU/L,Sal 的IC50为0.75 μmol/L。而两药联合使用的增殖抑制作用更显著（P<0.05）;合用指数计算公式结果显示两药为协同作用。Western blotting 显示联合用药组与L-Asp、Sal单独处理组相比,Bcl-2蛋白表达明显减少,caspase-3、caspase-8、caspase-9和胞浆细胞色素C水平明显增高;干预48 h后行流式细胞术检测结果显示L-ASP（25 IU/L）单独处理组和Sal（0.5μmol/L）单独处理组细胞凋亡率分别为（7.11±0.23）%和（25.43±047）%,与对照组（6.67±0.13）%比较差别有统计学意义（P＜0.05),联合用药组细胞凋亡率（39.12±1.97）%分别与L-ASP、Sal单独处理组比较,差别有统计学意义（P＜0.05)。结论：左旋门冬氨酸酶与盐霉素联合作用于Jurkat细胞具有协同抑制增殖和诱导凋亡的作用。     

红景天苷对内皮祖细胞功能及其PI3K/Akt通路的影响

 目的：研究红景天苷对人内皮祖细胞（EPCs）功能及其对磷酸肌醇3羟基激酶（PI3K）/Akt通路的影响。方法：体外培养正常人外周血EPCs,观察红景天苷或PI3K抑制剂的干预对EPCs增殖、黏附、迁移及一氧化氮（NO）分泌量的影响。MTT法检测细胞增殖、Western blotting检测Akt蛋白表达。结果：与对照组比较, 红景天苷能促进EPCs的增殖、黏附及迁移功能（P<0.05）,促进EPCs分泌NO,增加细胞内磷酸化Akt蛋白的水平。但这些作用均被PI3K抑制剂LY294002抑制（P<0.05）。结论：红景天苷通过PI3K/Akt通路调节EPCs的功能。     

红景天苷对急性辐射损伤小鼠骨髓脂肪细胞生成的影响

目的：探讨红景天苷抑制辐射诱导小鼠骨髓脂肪化、促进辐射后造血恢复的情况,并研究其可能的机制。方法：取6~7周龄健康BALB/c小鼠按随机数字表法分为健康对照组、单纯照射组、药物干预组,每组各20只。辐射对照组和实验组均给予6.0 Gy ⁶⁰Co γ射线辐射处理,实验组于辐射后12 h腹腔注射红景天苷（30 mg·kg^-1·d^-1）至照后8 d,辐射对照组腹腔注射等体积生理盐水。辐射后14 d观察小鼠的一般情况、体重变化、外周血象,并取股骨制作骨髓切片观察骨髓病理改变,测定脂肪细胞面积,分离骨髓单个核细胞后提取总RNA,荧光定量PCR（q-PCR）检测PPAR-γ和FABP4 mRNA的相对表达量。结果：单纯照射组小鼠在照射后均出现外周血白细胞降低、血小板减低,骨髓脂肪细胞过度增生,骨髓有核细胞减少等骨髓造血抑制改变。与单纯照射组小鼠比较,红景天苷能改善照射后小鼠一般情况,并通过抑制PPAR-γ、FABP4的表达（t=8.64、13.19,P<0.05）,抑制骨髓脂肪细胞的过度增生,减少脂肪空泡面积（t=13.31,P<0.05）;照后7 d,药物干预组小鼠外周血白细胞计数高于单纯照射组（t=5.80,P<0.05）;照后14 d,药物干预组小鼠外周血白细胞计数较单纯照射组及照后7 d药物干预组小鼠外周血白细胞计数均有增高（t=13.78、7.54,P<0.05）,同时血红蛋白较单纯照射组高（t=14.66,P<0.05）。结论：红景天苷能抑制急性辐射损伤小鼠骨髓脂肪细胞生成,调节骨髓微环境,从而促进辐射损伤后小鼠造血恢复。     

红景天苷对内皮祖细胞的辐射防护作用

 目的: 探讨红景天苷对内皮祖细胞(EPCs)的辐射防护作用,并分析其机制。方法: 体外培养正常人外周血EPCs,观察红景天苷对辐射后EPCs活性、黏附、迁移及凋亡的影响。应用CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率, Western blotting法检测细胞内磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt通路中Akt蛋白表达水平。结果: 4 Gy [⁶⁰Co]γ射线辐射可导致EPCs损伤,不仅细胞活性、黏附和迁移能力下降,而且细胞凋亡增加;与辐射对照组比较, 红景天苷则能部分逆转辐射对EPCs的损伤,提高EPCs的活性、黏附和迁移能力,减少辐射导致的细胞凋亡,增加细胞内磷酸化Akt蛋白的水平。但这些作用可被PI3K特异性抑制剂LY294002削弱。结论: 红景天苷对内皮祖细胞辐射损伤具有一定的防护作用,其机制可能与增强PI3K/Akt通路的作用有关。     

1,25-(OH)2D3对辐射损伤小鼠骨髓微环境的保护作用

目的 探讨1,25-(OH)₂D₃对辐射损伤小鼠骨髓微环境的保护作用,并研究其可能的分子机制。 方法 60只雄性7周龄健康BALB/c小鼠按随机区组法分为健康对照组、单纯照射组和照射+给药组,每组20只。单纯照射组和照射+给药组给予6.0 Gy ⁶⁰Co γ射线照射,照射+给药组于照射前48 h开始给予1,25-(OH)₂D₃ 2.5 μg/kg(用DMSO稀释)灌胃至辐射后第8天,单纯照射组给予相同剂量DMSO对照。干预后观察小鼠的一般情况、体重变化、外周血象,并取股骨制作骨髓切片观察骨髓病理改变,测定脂肪细胞面积,免疫组织化学染色比较照射后第8天不同组间过氧化物酶体增殖活化受体γ(PPARγ)的表达。结果 接受照射后小鼠均出现体重减轻,外周血白细胞降低,骨髓脂肪化等骨髓造血抑制改变。与单纯照射组比较,1,25-(OH)₂D₃能改善小鼠一般情况,减轻体重下降(t_{照射后3 d、6 d}=-2.23、-2.34,P<0.05);另外,照射后第4天和第8天,照射+给药组小鼠外周血白细胞计数高于单纯照射组(t=-4.99、-4.46,P<0.05);脂肪空泡面积减少(t=-3.75、-2.10,P<0.05);采用免疫组织化学染色发现1,25-(OH)₂D₃通过抑制PPARγ表达,减少骨髓脂肪化的形成。结论 1,25-(OH)₂D₃可抑制辐射后骨髓脂肪化,保护辐射后小鼠骨髓微环境。     

miR-155特异性siRNA增强阿糖胞苷诱导的Burkitt淋巴瘤Raji细胞凋亡

 目的：研究miR-155特异性siRNA增强阿糖胞苷（Ara-C）诱导的Burkitt淋巴瘤Raji细胞凋亡及其机制。方法：Ara-C与miR-155 siRNA单独或者联合干预Raji细胞增殖。qRT- PCR检测脂质体转染siRNA后miR-155的表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting法检测caspase-3的表达。结果：qRT-PCR显示,转染miR-155 siRNA后,Raji细胞的miR-155表达明显下降（P<0.05）,Ara-C或miR-155 siRNA单独处理细胞后均显示出增殖抑制作用,而两者联合使用的增殖抑制作用更显著（P<0.05）。各组细胞进行药物干预48 h后行流式细胞术,结果显示Ara-C或miR-155 siRNA单独处理细胞凋亡率分别为（16.5±0.3）%和（14.6±0.3）%,与对照组［（3.6±0.4）%］比较差别有统计学意义（P＜0.05),Ara-C+miR-155 siRNA组的凋亡率［（38.4±1.4）%］分别与Ara-C和miR-155 siRNA单独处理组比较,差别有统计学意义（P＜0.05）。Ara-C+miR-155 siRNA组与Ara-C组及miR-155 siRNA组相比,caspase-3的水平明显增高。结论：miR-155特异性siRNA具有增强阿糖胞苷对Raji细胞增殖抑制及诱导Raji细胞凋亡的作用,其机制与caspase-3凋亡途径有关。     

硫酸软硫骨素对3T3-L1细胞增殖和分化的影响

目的 研究硫酸软骨素对3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化的影响,并对其机制进行初步探讨.方法 噻唑蓝法观察0、5、10、25、50、100、200 mg/L浓度的硫酸软骨素对3T3-L1细胞增殖能力的影响;3T3-L1细胞由3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、胰岛素和地塞米松联合诱导分化,实验组加入硫酸软骨素干预,诱导分化第8天油红O染色观察脂肪细胞分化程度;荧光定量PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBPα)和脂肪酸结合蛋白4(FABP4) mRNA表达水平;Western blot检测脂肪细胞分化过程中PPARγ、C/EBPα和Smad3蛋白表达.结果 硫酸软骨素对3T3-L1细胞的促增殖作用呈剂量和时间相关性,其中25 mg/L的硫酸软骨素作用24 h后对3T3-L1细胞的促增殖作用最大.硫酸软骨素能够抑制3T3-L1细胞成脂分化,减少脂滴聚集.并且硫酸软骨素能够下调PPARγ、C/EBPα和FABP4 mRNA,抑制PPARγ和C/EBPα、上调Smad3蛋白表达水平.结论 在适当浓度范围内硫酸软骨素具有促进3T3-L1细胞增殖作用,并通过激活Smad3、下调PPARγ和C/EBPα抑制成脂.     

川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞的增殖和分化影响

目的研究川续断皂苷Ⅵ(asperosaponinⅥ,ASAⅥ)对3T3-L1前脂肪细胞的增殖及成脂分化影响,以进一步了解其药理作用。方法以3T3-L1前脂肪细胞为靶细胞,通过噻唑蓝(MTT)法观察不同浓度川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞增殖能力的影响;不同浓度(0、10、25、50μmol·L-1)川续断皂苷Ⅵ干预3T3-L1细胞的成脂诱导分化,油红O染色检测3T3-L1细胞分化程度;试剂盒测定各组培养液中葡萄糖及游离脂肪酸含量;荧光定量PCR(Q-PCR)检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activatedreceptorγ,PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白(CCAAT/enhan-cer-binding proteinα,C/EBPα)mRNA表达水平。结果 MTT法测定表明不同浓度川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞增殖能力的影响不同,其中10μmol·L-1浓度组作用24 h后促增殖作用最明显,随着川续断皂苷Ⅵ浓度增加,促增殖效应降低;川续断皂苷Ⅵ能够剂量依赖性的抑制3T3-L1细胞成脂,减少细胞内脂滴聚集,抑制细胞对葡萄糖的吸收利用,减少游离脂肪酸形成,下调成脂过程中PPARγ和C/EBPαmRNA表达。结论川续断皂苷Ⅵ具有促进3T3-L1细胞增殖作用,并通过下调PPARγ和C/EBPα基因抑制3T3-L1细胞成脂分化。     

miR-155在淋巴瘤Raji细胞辐射抵抗中作用的研究

目的 研究miR-155在淋巴瘤Raji细胞辐射抵抗中的作用及其机制。方法 实时定量聚合酶链反应检测Raji细胞miR-155的表达,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测PTEN和p-AKT的表达。结果 miR-155 RNA和p-AKT蛋白在Raji细胞中表达较高,而pten基因mRNA和蛋白质表达水平极低,单纯4.0 Gy照射48 h后Raji细胞凋亡率较低;miR-155 siRNA不仅使miR-155 RNA和p-AKT表达水平明显下降,而且pten基因mRNA和蛋白质水平显著增高,同时细胞显示出增殖抑制作用,显著增加Raji细胞对该辐射剂量敏感性,siRNA+射线照射组细胞凋亡率为(36.78±1.35)%,高于单纯照射组(t=12.572,P<0.05)。结论 miR-155 表达对Raji细胞辐射敏感性具有重要影响,其机制与PTEN/PI3K/AKT信号途径激活有关。