微环境对牙周膜干细胞分化的抑制和诱导作用

牙周膜干细胞(PDLSC)在牙周组织缺损修复和维持牙周动态平衡中起关键性的作用,是牙周组织再生修复治疗的基础细胞.在不同微环境作用下,PDLSC的增殖分化特性呈现出较大的差别.牙周膜干细胞龛和炎症等微环境对PDLSC的分化有抑制作用,然而,牙本质微环境及发育期根尖微环境能促进PDLSC的分化.研究不同的微环境对PDLSC功能的影响,一方面有助于深入研究PDLSC的生物学功能,另一方面为PDLSC应用于牙周疾病的再生治疗提供理论依据.本文就不同的微环境对PDLSC分化的抑制和诱导作用研究进展作一综述,并展望PDLSC在牙周缺损再生治疗中的应用前景.     

表皮生长因子受体为靶向重组T7噬菌体抗肿瘤疫苗的构建

目的：构建表皮生长因子受体（EGFR）为靶向的重组T7噬菌体抗肿瘤疫苗。方法：通过RT-PCR克隆EGFR基因膜外DNA片段，经测序鉴定正确，亚克隆3个同的DNA片段插入T7噬菌体载体，构建重组T7噬菌体。用PCR、SDS-PAGE和Western印迹法鉴定构建的重组T7噬菌体。结果：目的DNA片段以融合蛋白形式表达，展示于噬菌体壳蛋白，Western印迹显示实验组重组T7噬菌体呈阳性信号。结论：构建的重组T7噬菌体融合表达了外源目的多肽，并保持TNNN功能活性。     

T7噬菌体表达巨细胞病毒PP65蛋白抗原的初步研究

目的利用噬菌体展示技术构建巨细胞病毒基质蛋白PP65的抗原，初步评价其抗原性。方法PP65的基因片段经酶切后，与T7噬菌体的基因组相应酶切位点结合．借助包装蛋白组裴成为完整的噬菌体。PP65目的蛋白以融合蛋白的形式表达在T7噬菌体的头蛋白部位，每个噬菌体颗粒表面可表达5～15个拷贝。噬菌体可以在宿主细胞中快速繁殖，并且能够迅速裂解宿主细胞，使目的蛋白的富集达到很高的效率。人巨细胞病毒基质蛋白PP65可以激发机体强烈的免疫反应，运用T7噬菌体载体展示系统表达PP65的部分肽段，扩增噬菌体，以SDS—PAGE电泳和western—blot鉴定所表达的抗原特性。结果获得了重组T7-PP65噬菌体，通过鉴定，噬菌体表达在其头蛋白上的PP65抗原可以被天然PP65的单克隆抗体所识别。结论噬菌体展示技术可以有效地进行病毒蛋白抗原的表达，为抗原筛选和疫苗的研制提供科学依据。将PP65表达在T7噬菌体表面，可以研究其免疫原性及评估其作为疫苗的可能性。     

旋转式生物反应器培养细胞因子诱导的杀伤细胞研究

目的采用旋转式生物反应器（rotating wall-vessel bioreactor,RWV）与传统的T-Flask培养瓶培养人外周血细胞因子诱导的杀伤（cytokine-induced killer,CIK）细胞,比较CIK细胞的增殖能力、细胞因子分泌情况、细胞杀伤力。方法提取健康志愿者的外周血,分离出外周单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,体外诱导成CIK细胞,分别接种到T-Flask培养瓶及RWV中培养。采用台酚蓝染色法检测细胞活率并绘制其生长曲线;ELISA法检测各组CIK细胞的IL-2,IFN-γ,TNF-α分泌情况;乳酸脱氢酶测定法检测CIK细胞对靶细胞的杀伤力。结果与传统的T-Flask培养瓶培养CIK细胞比较,RWV培养CIK细胞增殖数量明显多且生长力旺盛;使用RWV培养CIK细胞能使其分泌更多的IL-2,IFN-γ,TNF-α细胞因子;RWV组培养的CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤力更强。结论RWV培养CIK细胞更能提高其增殖能力、细胞因子分泌能力及肿瘤杀伤活力,同时可解决传统细胞培养数量少、稳定性差、易污染、工作量大及周期长等问题,有效地降低临床治疗成本。