砷酸钠对秀丽线虫生殖细胞周期停滞和细胞凋亡的作用研究

背景与目的： 砷在自然界主要以五价砷(AsV)的形式存在,是公认的致癌剂、致畸剂和致突变剂,但其遗传毒性作用机制还不十分清楚,为此,本文研究了砷酸钠对模式生物秀丽隐杆线虫的遗传毒性作用及其机制。 材料与方法： 分别以0.0、 2.5、5.0、10.0和20.0 mmol/L砷酸钠处理秀丽隐杆线虫,测定其对线虫平均后代数目、生殖细胞周期和细胞凋亡的影响。 结果： 在5.0～20.0 mmol/L剂量范围内,砷酸钠暴露可导致线虫后代数目降低(P<0.05),在2.5～20.0 mmol/L浓度下,砷酸钠可诱导线虫生殖细胞周期停滞和细胞凋亡,并具有显著的时间-剂量效应(P<0.05)。自由基淬灭剂二甲基亚砜(DMSO,0.1％)可抑制砷酸钠诱导的生殖细胞周期停滞,抑制砷酸钠诱导的细胞凋亡。结论： 砷酸钠具有遗传毒性作用,可导致线虫生殖细胞凋亡和细胞周期的停滞。     

神经酰胺在辐射诱导的秀丽隐杆线虫生殖细胞旁效应中的机制研究

目的 利用秀丽隐杆线虫为研究对象,以单粒子束为辐射源,从活体水平探究神经酰胺在辐射旁效应中的作用。方法 以野生型N2和突变体L4期线虫的后食道球为辐射部位,分别给予2 000个质子的辐照剂量,检测和分析成虫的生殖腺凋亡细胞以及基因表达水平。结果 定点辐射N2的后食道球可显著诱导线虫旁区生殖腺细胞凋亡的增加（t=9.007,P<0.05）,但在神经酰胺合酶基因突变体中未表现出这一现象（P>0.05）。实时定量PCR结果显示,辐射诱导N2和神经酰胺合酶基因突变体lagr-1（gk327）;hyl-1（ok976）线虫中凋亡核心通路基因egl-1和ced-13表达量的上升,但两品系线虫间的差异无统计学意义（P>0.05）;辐射可诱导N2和DNA损伤检验点突变体hus-1（op241）中hyl-1和lagr-1表达量的上升,且两品系间的差异无统计学意义（P>0.05）。非受体络氨酸激酶abl-1突变可显著增加辐射诱导的旁区细胞凋亡（t=13.241,P<0.05）,而当神经酰胺合酶基因与abl-1同时突变时,凋亡增加的现象被抑制（t=13.462,P<0.05）。结论 神经酰胺参与线虫体内辐射引起的旁区凋亡过程,且可能与凋亡核心通路中的促凋亡蛋白egl-1和ced-13以及DNA损伤响应通路中的HUS-1协同发挥作用。抑凋亡基因abl-1与神经酰胺合酶在凋亡过程中表现出拮抗关系。     

ZNF451通过调控53BP1/MDC1促进A549和HeLa细胞DNA损伤修复

目的:探究SUMO E3连接酶(zinc finger protein 451,ZNF451)介导非小细胞肺癌A549细胞和宫颈癌HeLa细胞DNA损伤修复的功能及机制。方法:采用γ射线或依托泊苷处理A549细胞和HeLa细胞,CCK-8法检测细胞增殖活力,蛋白免疫印迹法检测蛋白表达量。DR-GFP质粒系统检测DNA损...     

α粒子辐射对ROS介导src激酶活性和自噬的影响

目的 通过检测人胚肾上皮细胞HEK293受不同剂量α粒子照射后,src激酶活性和细胞自噬系统的变化,探讨调控细胞自噬对高剂量辐射诱导细胞死亡的影响.方法 将人胚肾上皮细胞HEK293分为3组:0 cGy(对照)组、241Am α粒子照射低剂量(10 cGy)组和高剂量(300 cGy)组.应用免疫印迹实验检测细胞内源性蛋白LC3Ⅰ/Ⅱ和src激酶的变化;分子探针检测细胞内活性氧(ROS)水平;用ROS淬灭剂DMSO预处理照射细胞,并用免疫印迹法检测照射后src激酶的变化;使用自噬诱导剂雷帕霉素预处理照射细胞,以PI染色流式细胞术测定细胞死亡率.结果 与0 cGy相比,10 cGy α射线照射后LC3 Ⅰ/Ⅱ比例降低(=4.07,P＜0.05),胞质内具有绿色荧光点状GFP-LC3的细胞比例升高(t=12.29,P＜0.05),自噬被诱导;而300 cGy照射后,LC3Ⅰ/Ⅱ比例升高(t=2.93,P＜0.05),胞质内GFP-LC3形态无明显变化,自噬被抑制.与0 cGy相比,10和300 cGy照射后4h均能提升细胞内ROS水平(t=17.93、22.88,P＜0.05),且300 cGy比10 cGy照射诱发的ROS更多(t=15.76、22.66、14.22,P＜0.05).与0 cGy相比,10 cGy照射使src激酶419位酪氨酸磷酸化水平升高(t=5.66,P＜0.05),而300 cGy照射则降低其磷酸化水平(=4.67,P＜0.05).DMSO能够部分逆转高低剂量照射对src激酶活性的影响.辐照前以自噬诱导剂雷帕霉素处理细胞则能降低300 cGy照射诱发的细胞死亡率(t=12.14,P＜0.05).结论 高低剂量α粒子分别抑制和激活src激酶以及细胞自噬,ROS参与介导辐照对src激酶活性及自噬系统的影响.对自噬系统的干预能够降低细胞的辐射敏感性.     

青石棉诱导AL细胞CD59基因突变和DNA氧化损伤的研究

目的　研究谷胱甘肽合成酶抑制剂buthioninesulfoximine(BSO)和自由基清除剂二甲亚砜 (DMSO)对青石棉诱导人鼠杂交瘤 (AL)细胞CD59基因突变率的影响以及青石棉引发细胞内 8 羟基脱氧鸟苷 (8 OHdG)产生的规律。方法　细胞毒性、遗传毒性检测分别采用克隆法 ;8 OHdG检测采用ABC酶免疫染色法 ;非蛋白巯基化合物 (NPSH)检测采用改进后的Tietze法。结果　 2 5μmol/LBSO预处理AL 细胞 2 4h后的细胞内NPSH含量降为 2nmol/ 10 7细胞 ,仅为对照组的 5%。青石棉单独处理组AL 细胞CD59基因突变率为 2 0 8± 18。BSO预处理 2 4h后与青石棉继续共同孵育组细胞突变率可达到 3 97± 55,是青石棉单独处理组的 2倍左右 ,差异有显著性 (P <0 .0 5) ;而DMSO存在时 ,青石棉诱导的CD59基因突变率仅为 57± 8,比青石棉单独处理组降低 72 .6%。细胞内 8 OHdG的产生随着青石棉处理剂量的增加而线性增加 (y =150 2 0x ,r =0 .962 1)。当青石棉处理剂量为 6μg/cm2 时 ,细胞内 8 OHdG含量由对照组的 13 7± 9提高到 2 89± 6,是对照组的 2倍以上。DMSO存在时 ,可使 6μg/cm2 石棉诱导的细胞内 8 OHdG含量由 2 89± 6降低到 170± 3。结论　自由基是青石棉诱导基因突变和DNA损伤过程中重要的调节物 ,具有剂量 -效应关系