H295R细胞系类固醇生成试验的研究进展

2011年新修订的经济合作与发展组织（OECD）化学品测试指南中增添了指南456——H295R细胞系类固醇生成试验，用来筛选和检测潜在的内分泌干扰物。H295R细胞能表达类固醇激素生成过程中涉及的所有酶类，已作为有效的体外筛选环境类固醇激素干扰物的模型，也可作为研究肾上腺皮质分化及其类固醇激素的分泌与调控以及雄激素产生的调节作用的模型。H295R试验已用于美国内分泌干扰物筛选项目（EDSP）的一级筛选，还发展了高通量H295R细胞系类固醇生成试验方法。本文主要就H295R细胞系的建立，在环境类固醇激素干扰中的应用，以及目前存在的问题作一综述。     

不同历史时期虚劳病组方用药规律分析

目的:探究《中医方剂大辞典精选本》中隋唐及之前,宋元时期与明清及近代的虚劳病组方用药规律。方法:利用R语言数据挖掘软件对《中医方剂大词典精选本》中的方剂药物信息进行描述性分析(药物药类及药物性味与归经)、关联规则分析与聚类分析。结果:3个历史时期使用频率最高的药物分别为甘草、人参与熟地黄,使用药类居前的均包含补虚药、清热药、收涩药、利水渗湿药、温里药,累计频率均高于62.40%,药性以温性居多,药味都以甘、辛、苦为主,药物归经中归肾经药物的使用频率最高。关联规则与聚类分析共得出45个药对与药组,27个聚类方。结论:虚劳病的治疗在隋唐及之前取法经方以调和气血,宋元时期以补阳与补土为特点,明清及近代则重视阴精补益,呈现由气血并治,到倾向阴阳分治的特点。     

通窍活血汤含药脑脊液对OGD/R损伤大鼠BMECs的保护作用

目的:探讨通窍活血汤含药脑脊液对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)的保护作用及潜在机制。方法:通过酶消化法提取原代BMECs,并将细胞随机分为6组,分别为正常组,OGD/R组,通窍活血汤(TQHXT)组(20%),尼莫地平(NMDP)组(10μmol·L~(-1)),卡博替尼(BMS)组(1μmol·L~(-1))和合用药组。除正常组外,其余各组细胞在氧糖剥夺2 h后迅速复糖复氧24 h进行OGD/R造模并分组给药。采用细胞免疫荧光染色法鉴定BMECs,观察OGD/R损伤大鼠BMECs的形态学和超微结构改变并检测细胞跨膜电阻(TEER)值变化。用试剂盒检测细胞内一氧化氮(NO)水平、乳酸脱氢酶(LDH)活性、活性氧(ROS)荧光强度和组织型纤溶酶原激活因子(tPA)含量。采用流式细胞术检测细胞内钙离子浓度及细胞凋亡,观察血管新生标记因子CD34的表达,用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中紧密连接蛋白(ZO-1),血管内皮生长因子(VEGF),黏着斑激酶(FAK)和桩蛋白(Paxillin)蛋白的表达情况。结果:与正常组比较,OGD/R组细胞皱缩、变圆,细胞TEER值和细胞中ZO-1蛋白表达显著降低,细胞中NO,LDH及ROS水平显著升高,tPA含量显著降低,细胞中钙离子浓度和细胞凋亡显著增加,细胞中CD34有所表达,VEGF,FAK和Paxillin蛋白表达显著升高(P0. 01);与OGD/R组比较,TQHXT组细胞损伤明显改善,细胞TEER值和细胞中ZO-1蛋白表达显著升高,细胞中NO,LDH及ROS含量显著降低,tPA含量显著升高,细胞中钙离子浓度和细胞凋亡显著减少,细胞中CD34表达增加,VEGF,FAK和Paxillin蛋白表达显著升高(P0. 05,P0. 01)。结论:通窍活血汤含药脑脊液对OGD/R损伤大鼠BMECs具有保护作用,该保护作用可能是通过VEGF/VEGF受体2(R2)/FAK/Paxillin信号通路促进血管生成来发挥作用。     

LINC00649通过miR-424-5p/IGF1R轴调控内质网应激介导的宫颈癌细胞凋亡

目的探讨LINC00649/miR-424-5p/IGF1R对内质网应激(ERs)介导的宫颈癌(CC)细胞凋亡的影响。方法从GEO数据库中获取CC相关的数据,并分析差异表达的miRNAs。利用生物信息学数据库预测miR-424-5p的上、下游靶点,将LINC00649和IGF1R纳入研究,随后双荧光素酶实验进一步验证靶向关系。qRT-PCR检测LINC00649、miR-424-5p和IGF1R在CC组织和细胞中的表达水平。CCK-8和流式细胞术分别评估CC细胞增殖和凋亡变化。Western blot检测ERs相关蛋白GRP78、CHOP和Caspase-12的表达。结果与癌旁组织和H8细胞相比,LINC00649和IGF1R在CC组织和细胞中表达上调,而miR-424-5p下调(均P<0.05)。LINC00649的异常高表达与CC患者的预后不良有关,敲减LINC00649可通过促进ERs来抑制CC细胞活力,诱导细胞凋亡(均P<0.05)。LINC00649吸附miR-424-5p上调IGF1R的表达。miR-424-5p抑制剂或过表达IGF1R均可部分逆转敲减LINC00649对CC细胞的影响(均P<0.05)。结论 LINC00649能够通过miR-424-5p/IGF1R抑制CC细胞的ERs过程进而减少细胞凋亡,提高细胞活力。     

丹皮酚对PMDD肝气逆证模型大鼠焦虑样行为及其神经内分泌功能的影响＊

目的 观察丹皮酚对经前烦躁障碍症（Premenstrual Dysphoric Disorder，PMDD）肝气逆证模型大鼠行为学和孕酮（P）、四氢孕酮（ALLO）、海马脑区GABA_ARα4 mRNA和蛋白表达的影响、以探讨其作用机制。方法 将大鼠分为正常组（Control）、模型组（Model）、模型+丹皮酚低剂量组（Model+6.05）、模型+丹皮酚中剂量组（Model+12.11）、模型+丹皮酚高剂量组（Model+24.23）、模型+氟西汀组（Model+FLX），运用攻击行为测试（RIT）、旷场实验（OFT）、高架十字迷宫实验（EPM）等检测大鼠的焦虑样行为，ELISA检测血清及海马P、ALLO的含量，通过免疫荧光和PCR检测海马脑区GABA_ARα4的蛋白定位和mRNA的表达。结果 与正常组相比，模型组OFT的Center distance（中央区运动路程）、Center time（中央区停留时间）显著下降（P<0.05，P<0.001），相比模型组，氟西汀组OFT的Center time（中央区停留时间）显著上升（P<0.05）；与模型组相比，氟西汀组和丹皮酚中剂量组进入EPM开放臂次数和时间百分比明显上升（P<0.05，P<0.01，P<0.05，P<0.001）；与模型组相比，丹皮酚中剂量组血清中P、ALLO的含量显著增加（P<0.001，P<0.01），丹皮酚高剂量组血清中ALLO含量明显升高（P<0.05）；与模型组相比，丹皮酚中剂量组海马脑区中P含量显著升高（P<0.01）；各给药组海马脑区中ALLO含量明显增加（P<0.01、P<0.001、P<0.0001、P<0.001）；与正常组相比，模型组GABA_ARα4蛋白含量显著性降低（P<0.05），相比模型组，丹皮酚低剂量组和丹皮酚中剂量组显著性降低（P<0.05，P<0.05）；与正常组相比，模型组海马脑区内GABA_ARα4 mRNA表达显著性升高（P<0.01）。结论 丹皮酚可有效改善PMDD肝气逆证大鼠焦虑样行为，且中剂量用药可发挥更明显的疗效，其作用机制可能与纠正P、ALLO、GABA_ARα4 有关。     

Fc⁃gammaⅠ型受体在阿尔茨海默病患者和模型小鼠脑皮质的表达

目的 探讨高亲和力IgG受体Fc-gammaⅠ型(FcγRⅠ)在阿尔茨海默病(AD)脑皮层的表达变化。方法 选用正常人脑组织样本和神经病理诊断为AD患者脑组织样本，6月龄野生型小鼠和APP/PS1小鼠。免疫荧光和免疫蛋白印迹检测脑皮层FcγRⅠ的细胞定位和表达。结果 人和小鼠脑皮层的神经元均普遍表达FcγRⅠ。与健康人脑相比，AD患者脑皮层的FcγRⅠ表达显著降低(P<0.05)。与野生型小鼠脑相比，AD模型小鼠脑皮层的FcγRⅠ表达也呈现出显著降低(P<0.05)。结论 IgG高亲和力受体FcγRⅠ在AD患者脑和AD模型小鼠脑皮层的表达显著下降，可能与AD的神经病理机制相关。     

如何正确运用χ~2检验——病例对照设计四格表资料的χ~2检验

本文目的是介绍病例对照设计四格表资料的χ~2检验、优势比的假设检验和区间估计以及使用SAS与R软件实现的方法。针对病例对照设计的特点,重点介绍优势比的概念、假设检验和区间估计方法。对SAS与R软件计算的结果作出解释,并给出统计结论和专业结论。