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1.
目的:研究RNA干扰技术的重组慢病毒载体沉默人肝癌Hep G2细胞中表皮脂肪酸结合蛋白-5(fatty acid binding protein-5,FABP-5)基因对其增殖、凋亡和侵袭力的影响及作用机制.方法:构建3个靶向FABP-5基因sh RNA载体,并筛选出最有效的靶点.将Hep G2细胞分为3组:实验组用FABP-5基因沉默重组慢病毒颗粒(LV-sh RNA-FABP-5)感染HepG2细胞;阴性对照组用空载慢病毒颗粒(LV-sh RNANC组)感染Hep G2;空白对照组正常培养.应用RT-PCR、实时荧光定量PCR检测FABP-5基因m RNA的表达;Western blot技术检测各组细胞FABP-5蛋白的相对表达;MTT法测定细胞体外增殖能力;Giemsa染色法检测细胞的克隆形成;细胞侵袭小室法检测各组细胞的体外侵袭力;流式细胞技术(flow cytometry,FCM)检测各组细胞增殖和凋亡的变化情况.结果:通过测序验证构建的FABP-5-shRNA表达载体,感染人肝癌HepG2细胞,荧光显微镜观察到细胞感染率90%.Real-time PCR和Western blot结果得出:相比空白对照组和阴性对照组,实验组的3种靶点FABP-5-sh RNA干扰序列中,LV-sh RNA-FABP-5(1)靶点中FABP-5表达的敲减率最高(P0.05),筛选出此组为最佳靶点;MTT法结果提示:实验组细胞490 n m处的吸光度(A)值在转染后第1-5天时均低于阴性对照组、空白对照组,差别有统计学意义(P0.05).Giemsa染色法结果显示:稳定转染Hep G2细胞后细胞的增殖能力明显下降(P0.05);细胞侵袭小室实验显示:与空白对照和阴性对照组相比,实验组细胞的侵袭力明显受到抑制(P0.05);流式细胞技术检测发现实验组的细胞相对于阴性对照组出现了明显的凋亡(P0.05).实验组较阴性对照组、空白对照组G2/M期延长,G1期缩短,差别具有统计学意义(P0.05).结论:人肝癌Hep G2细胞中沉默FABP-5基因可以有效抑制其表达,能够降低肝癌细胞的侵袭力,抑制肝癌细胞的增殖,将细胞周期阻滞于G2/M期,使其凋亡显著增加.  相似文献   
2.
目的 探讨鼻咽癌调强放疗所致急性放射性口干与放疗剂量的关系。方法 收集2013年12月至2014年7月接受调强放疗的109例鼻咽癌患者,分析患者的一般临床资料及双侧腮腺、双侧下颌下腺、双侧涎腺(双侧腮腺+双侧下颌下腺)的照射剂量等数据。在放疗结束时根据口干程度把患者分为非重度口干组(57例)和重度口干组(52例),并对两组之间的一般资料以及相关的剂量学因素进行比较分析。记录双侧腮腺接受15~50 Gy照射剂量的体积百分比,采用Logistic多因素回归法分析急性重度口干的独立预测因子,并用受试者工作特征曲线(ROC)分析其诊断界值点。结果 至放疗结束,所有入组患者重度口干的发生率为47.7%(52/109)。临床因素的分析提示年龄、黏膜炎、化疗方式均与急性重度放射性口干的发生无关。非重度口干组和重度口干组剂量学指标比较的结果显示,两组平均剂量差异均有统计学意义(t=-6.179、-6.055、-2.293,P<0.05)。Logistic回归分析显示,V34是判断急性重度放射性口干的独立预测因素。V34的ROC曲线表明:V34=49%对重度放射性口干预测的敏感度和特异度分别为71.2%和75.4% (OR=1.231,P<0.05,95%CI:1.116~1.357)。结论 在鼻咽癌调强放疗计划中,双侧腮腺的V34是重度急性放射性口干的独立预测因子,可以作为评估发生急性重度放射性口干发生风险的剂量学指标。  相似文献   
3.
目的探讨微小染色体维持蛋白7(miniehromosome maintenanceprotein7,MCM7)基因RNAi(RNA interference)的重组慢病毒载体,对人肝癌细胞SMMC-7721 MCM7基因表达和裸鼠移植瘤生长的影响。方法构建重组逆转录慢病毒载体MCM7-shRNA,以MCM7基因沉默重组慢病毒颗粒(LV-shRNA-MCM7)感染SMMC-7721细胞,作为实验组;以对照慢病毒颗粒(LV-shRNA-NC)感染SMMC-7721细胞,作为阴性对照组;空白对照组常规培养,不做任何处理。通过嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株。3组细胞分别接种至裸鼠皮下,建立人肝癌裸鼠移植瘤模型。观察裸鼠成瘤情况、移植瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线;4周后测定肿瘤体积和质量,并用RT-PCR、实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法及免疫组织化学法检测移植瘤中MCM7的表达情况。结果 MCM7-shRNA慢病毒载体构建成功。裸鼠接种癌细胞后第6天均有肿瘤形成,与空白对照组和阴性对照组相比,实验组的肿瘤生长速度明显减慢,实验组、阴性对照组和空白对照组的瘤体平均体积分别为(27.72±7.80)、(81.86±10.91)和(79.75±16.61)mm3,差异有统计学意义,F=61.949,P<0.05;实验组、阴性对照组和空白对照组的瘤体平均质量分别为(0.19±0.06)、(0.501±0.14)和(0.509±0.18)g,差异有统计学意义,F=18.41,P<0.05。实验组MCM7mRNA的相对表达量为0.253±0.198,阴性对照组1.213±0.548,空白对照组1.201±0.744,实验组相比阴性对照组和空白对照组明显下降,差异有统计学意义,F=4.091,P<0.05;实验组MCM7蛋白相对表达量为0.207±0.015,阴性对照组1.116±0.062,空白对照组1.088±0.040,实验组相比阴性对照组和空白对照组明显下降,差异有统计学意义,F=292.778,P<0.05。MCM7蛋白在阴性对照组和空白对照组中阳性表达率均为100%(10/10),在实验组中为30%(3/10),实验组明显低于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义,χ2=18.261,P<0.001。结论慢病毒沉默SMMC-7721细胞MCM7基因表达能有效抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,MCM7基因可能成为肝癌基因治疗的有效靶点。  相似文献   
4.
目的:研究细胞分裂周期素25a(cell division cycle 25a,CDC25a)基因RNAi(RNA干扰)的重组慢病毒载体对人肝癌细胞Hep G2 CDC25a基因表达和裸鼠移植瘤生长的影响。方法:实验组以CDC25a基因重组慢病毒颗粒感染Hep G2细胞;阴性对照组以RNAi-NC慢病毒颗粒感染Hep G2细胞;空白对照组常规培养。三组细胞分别接种至裸鼠皮下,建立人肝癌裸鼠移植瘤模型。连续28 d观察裸鼠成瘤情况及移植瘤生长情况,28 d后测定肿瘤体积和重量。用RT-PCR、Western blot及免疫组织化学法检测移植瘤中CDC25a的表达情况。结果 :各组裸鼠接种Hep G2细胞后第7天均有肿瘤形成,实验组的肿瘤生长速度、体积和重量明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。实验组瘤体中CDC25a的m RNA及蛋白表达与阴性对照组及空白对照组相比明显下降(P<0.05)。结论:LV-CDC25a-RNAi重组体沉默Hep G2细胞的CDC25a基因后能有效抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,提示CDC25a基因可被认为是肝癌治疗的关键靶点。  相似文献   
5.
目的 研究自噬与人鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性之间的关系。方法 采用慢病毒介导的RNA干扰技术建立稳定沉默自噬相关基因ATG5的人鼻咽癌CNE-2细胞系,实验分为未转染的CNE-2细胞组(对照组)、转染NC-shRNA的CNE-2细胞组(NC组)及转染ATG5-shRNA的CNE-2细胞组(ATG5组),应用CCK-8法、流式细胞术及克隆形成实验检测细胞增殖、凋亡及放射敏感性的变化。结果 CCK-8实验结果显示,与对照组和NC组相比,各剂量点ATG5组的细胞存活率均显著降低(F=3.755、46.086、8.609、44.160,P<0.05),绘制细胞生存曲线可见下调ATG5的表达后可以增加CNE-2细胞的放射敏感性;流式细胞术结果显示,经6 Gy X射线照射后,ATG5组细胞的凋亡率较NC组及对照组明显升高(F=394.876,P<0.05);克隆形成实验结果提示沉默ATG5基因可增加鼻咽癌CNE-2细胞的放射敏感性。结论 降低鼻咽癌CNE-2细胞的自噬活性可以增强其放射敏感性。  相似文献   
6.
目的:探讨乳腺癌改良根治术后图像引导放疗不同体位固定图像配准的效果.方法:乳腺癌改良根治术后20例患者采用泡沫负压真空垫行治疗体位固定(体模A组),20例患者采用热塑连体网罩行治疗体位固定(连体网罩C组),进行CBCT釆集图像并与计划CT图像配准,分别记录左右方向(X)、头脚方向(Y)、前后方向(Z)的平移误差及旋转误差值,计算其均值、标准差,进行统计学处理.结果:本研究A、C组釆集图像各100张,匹配结果平移误差在X、Y、Z方向,A组分别为(2.17±1.51) mm、(1.33±1.15) mm、(2.18±1.53) mm;C组分别为(1.35±1.28) mm、(1.25±1.13) mm、(1.46±1.33) mm.旋转误差在X、Y、Z方向,A组分别为(3.94±1.25)°、(2.31±1.32)°、(3.82±1.83)°;C组分别为(2.92±1.73)°、(2.43±1.12)°、(2.35±1.23)°.其中≤3°概率: A组分别为83.2%、82.6%、84.5%,最大值分别为5.1°、3.2°、4.8°;C组分别为87.3%、88.3%、85.8%,最大值分别为3.3°、3.1°、3.5°.两套体位固定装置在X、Y、Z三方向的平移误差经配对样本检验在Y方向P>0.05,在X、Z方向P<0.05,C组明显优于A组.两套装置测量差值有负相关关系.结论:乳腺癌改良根治术后放疗采用连体网罩行治疗体位固定,重复性好.C组能降低X、Z方向上的误差,其放疗靶区中心的平移误差中差异有统计学意义,因此建议乳腺癌改良根治术后放疗体位固定时优选连体网罩固定装置,提高图像引导放射治疗精准体位的要求,提高临床治疗效果.  相似文献   
7.
鼻咽癌是一种起源于鼻咽部上皮组织的鳞状细胞恶性肿瘤,在东南亚和中国华南地区具有很高的发病率,目前放疗已成为鼻咽癌的首选治疗方式。放射抗拒是鼻咽癌放疗成功的主要障碍,寻找鼻咽癌放射抗拒相关的生物标志物,明确放射抗拒的产生机制,对治疗具有重大意义。MicroRNAs通过结合靶mRNA的3’UTR 从而诱导其翻译抑制或降解,调节蛋白的表达,参与放疗反应相关的所有重要的细胞过程如DNA损伤反应与修复、细胞凋亡、增殖以及血管生成的调节。近年来鼻咽癌放射抗拒相关microRNAs的研究成为热点,本文就microRNAs及其潜在的作用机制进行综述。  相似文献   
8.
邹俊  李杰  陈茂伟  曹骥  苏建家 《山东医药》2011,51(44):27-29
目的研究Caveolin-1mRNA在肝癌组织、癌旁肝组织及正常肝组织中的表达情况,及其与肝细胞癌发生发展的关系。方法收集广西医科大学肿瘤医院肝细胞癌患者手术切除的肝癌组织、癌旁肝组织各60例,正常肝组织10例。用RT—PCR方法分析Caveolin-1mRNA在3种不同组织的表达差异。结果Caveolin-1mRNA在肝癌组织、癌旁肝组织、正常肝脏组织中的相对表达量分别为0.197±0.116、0.142±0.087、0.457±0.094(P〈0.01)。结论Caveolin-1与肝细胞癌的发生、发展有密切的关系,在肝细胞癌的形成过程中可能起抑制作用。  相似文献   
9.
目的:观察辣椒碱(capsaicin)对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响及可能的分子机制。方法:设立不同浓度辣椒碱组以及空白组,采用细胞计数试剂盒-8法(CCK-8)检测辣椒碱(0,25,50,75,100,150,200,250μmol·L-1)处理肝癌SMMC-7721细胞24 h后的细胞活性;穿透小室(transwell)检测辣椒碱(0,50,75,100μmol·L-1)的肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭能力;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测辣椒碱(0,50,75,100μmol·L-1)处理肝癌SMMC-7721细胞24 h后,对细胞中的E-钙黏蛋白(E-cadherin),波形蛋白(Vimentin),基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达水平的影响。结果:与空白组比较,辣椒碱(25,50,75,100μmol·L-1)作用24 h后均对细胞存活率未产生明显影响,从150μmol·L-1开始,随着辣椒碱浓度逐渐升高,细胞存活率逐渐下降(P0.01),且呈剂量依赖效应;与空白组比较,辣椒碱(50,75,100μmol·L-1)干预能显著抑制肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭,且呈浓度依赖效应(P0.01);与空白组比较,辣椒碱(50,75,100μmol·L-1)干预能明显上调肝癌SMMC-7721细胞中E-cadherin蛋白表达水平(P0.01),下调Vimentin,MMP-2,MMP-9蛋白的表达水平(P0.01)。结论:辣椒碱干预对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭具有抑制作用,可能与其上调肝癌SMMC-7721细胞中E-cadherin蛋白的表达,下调肝癌SMMC-7721细胞中Vimentin,MMP-2和MMP-9蛋白的表达有关。  相似文献   
10.
目的 建立一种同时测定水源水中三种微囊藻毒素(MC-LR、MC-RR、MC-YR)的高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)方法。 方法 取500 mL水样,0.45 μm滤膜过滤,滤液过C18柱,依次用10 mL超纯水、20 mL 20%甲醇溶液淋洗,15 mL 80% 甲醇溶液(加入0.05%三氟乙酸)洗脱,蒸发浓缩吹干,溶于1 mL超纯水,待测。采用固相萃取柱,流动相为0.1%磷酸水溶液-乙腈(67∶33),流速1.0  mL/min,柱温45℃,在238 nm波长紫外线检测器检测。结果 MC-LR、MC-RR和MC-YR 在 0.05~1.00 μg/mL范围内线性良好(r=0.9987、0.9992和0.9997),且峰形较好;回收率均在80%~110%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为5.0%~9.6%;MC-LR、MC-RR和MC-YR的方法检出限(limit of detection,LOD)分别为0.028 μg/L、0.037 μg/L和0.056 μg/L。结论 本方法准确度、灵敏度、回收率高,重现性好,可用于水源水中MC-LR、MC-RR、MC-YR同时检测。  相似文献   
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