microRNA与结核病相互关系的研究进展

microRNA（miRNA）是一类广泛存在于各种生物体内的小分子非编码单链RNA,主要在转录后水平调控靶基因的表达。越来越多的证据表明它在细胞分化与沟通、机体发育、免疫反应等诸多方面都发挥着重要作用。尤其在疾病相关研究中,miRNA更是具有广泛的用途和美好的前景。本文主要针对miRNA的相关特性、与结核病（tuberculosis,TB）相互关系的研究进展以及应用前景等做综述。     

糖尿病患者血流感染334例的病原学特征及死亡危险因素分析

目的 分析糖尿病患者发生血流感染的病原学特征及死亡危险因素，以寻找可能改善患者预后的诊疗方案。方法 回顾性分析2017—2021年绵阳市第三人民医院收治的糖尿病血流感染患者的临床及实验室检查资料，使用WHONET 5.6软件统计分析病原菌的分布及药敏结果。将患者按照感染后30 d疾病转归分为生存组、死亡组，分析患者发生全因死亡的危险因素。结果 共334例糖尿病血流感染患者被纳入研究，分离出非重复病原菌347株，以大肠埃希菌(143株，41.2%)、肺炎克雷伯菌(83株，23.9%)、金黄色葡萄球菌(22株，6.3%)最为常见；其中泌尿道感染的病原菌以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌多见，呼吸道感染的病原菌主要是肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌，90%以上的肝脓肿源性血流感染由肺炎克雷伯菌引起。不同类型血流感染的病原菌构成存在差异，大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌等肠杆菌目细菌在社区获得性感染中分离率更高，而铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、念珠菌更常见于医院获得性血流感染患者。大肠埃希菌对氨苄西林、哌拉西林等的耐药率均高于50%，对哌拉西林-他唑巴坦、亚胺培南、米诺环素等药物的耐药率低于10%，医院...     

锌离子依赖金属蛋白酶1(Zmp1)抑制小鼠RAW264.7细胞增殖以及吞噬体-溶酶体的融合北大核心CSCD

目的观察卡介苗（BCG）的锌离子依赖金属蛋白酶1（Zmp1）对RAW264.7小鼠巨噬细胞的增殖以及吞噬体-溶酶体融合的影响。方法在大肠杆菌BL21（DE3）中克隆表达Zmp1,用金属螯合磁珠纯化;用纯化的Zmp1处理RAW264.7细胞,采用CCK-8法检测（0、24、48、72、96）h的细胞增殖情况,采用流式细胞术检测细胞周期分布;用减毒沙门菌感染RAW264.7细胞诱导吞噬体形成后,用Zmp1处理细胞,在吞噬体内的减毒沙门菌和溶酶体的溶酶体相关膜蛋白1（LAMP1）分别用相应Alexa Fluor（R）350抗沙门菌抗体（蓝色荧光）和Cy5抗LAMP1抗体（红色荧光）标记,通过荧光显微镜观察RAW264.7细胞内两种荧光,将其重合分析吞噬体与溶酶体融合情况。结果用Zmp1蛋白处理细胞48 h后,细胞增殖活性明显降低;处理48 h后,细胞周期中G1期细胞比例下降,S期比例增高;采用双荧光标记感染沙门菌的RAW264.7细胞,Zmp1处理后显示紫色荧光的吞噬溶酶体融合减少。结论 Zmp1抑制小鼠RAW264.7巨噬细胞增殖,抑制吞噬体-溶酶体融合。     

利用CRISPR/Cas9系统检测同源片段长度对重组效率的影响

目的：在大肠埃希菌中利用CRISPR/Cas9系统对插入失活的mCherry红色荧光报告基因进行靶向切割并重组,以研究同源片段长度对重组修复效率的影响。方法：通过Golden Gate克隆方法构建Cas9表达质粒pKD46-Cas,转化至大肠埃希菌DH5α中,阿拉伯糖诱导表达Cas9蛋白,Western blot检测蛋白表达。用同样的方法,将一段随机靶标序列引入pTac-mCherry-3guid质粒中,造成插入失活,同时在插入序列两侧分别预留0、40、80、120 bp的mCherry编码区overlap序列,构建出含不同长度同源片段的插入失活mCherry荧光报告质粒pQ0、pQ40、pQ80、pQ120,并将其分别转化到表达Cas9蛋白的大肠埃希菌DH5α中,对应的细菌平板分别为pQ0组、pQ40组、pQ80组及pQ120组,每组各9个平板,对每个平板的红、白色菌落进行计数,分别计算出红色菌落数/菌落总数的比值,即为重组修复效率。结果：PCR及测序证实pKD46-Cas质粒及插入失活的mCherry荧光报告载体pQ0、pQ40、pQ80、pQ120构建成功,Western blot鉴定pKD46-Cas在大肠埃希菌DH5α中表达Cas9蛋白;红色菌落计数显示pQ0组为0,其余3组均出现红色菌落,4组重组修复效率的差异有统计学意义（P<0.05）,重组修复效率与同源片段长度呈正相关（r=0.792,P<0.01）。结论：成功建立了基于mCherry红色荧光报告基因和Cas9的同源重组效率检测系统;研究表明不包含同源片段的质粒无法进行有效的重组,当同源片段在0~120 bp时其长度对重组效率有影响。此系统为深入研究原核生物的同源重组提供了一个新的技术平台。     

EV71病毒反向遗传学系统的建立及拯救病毒的鉴定

目的：建立高效的EV71病毒反向遗传学系统,快速获得拯救病毒并鉴定其活性。方法：首先构建含有人RNA聚合酶Ⅰ启动子（Ppol Ⅰ）、ccdB自杀基因和鼠终止子（mTer）的接收质粒pHM-ccdB,并在ccdB两侧引入AarⅠ酶切位点;为了回避EV71病毒基因组中自身的AarⅠ酶切位点,分两段PCR扩增基因组,在引物中引入必需的AarⅠ酶切位点,通过Golden Gate Clone技术连接到目的载体中获得病毒拯救质粒pHT-EV71,转染至RD细胞后,获得拯救的EV71病毒,并以RT-PCR、病毒滴度、Western blot以及电镜检测等方法鉴定拯救子代病毒。结果：通过引入ccdB致死基因和Golden Gate Clone成功构建了EV71病毒的拯救质粒（pHT-EV71）,并将其转染至RD细胞后,观察到明显的致细胞病变效应（cytopathic effect,CPE）,将得到的拯救子代病毒,经EV71 VP1的特异性引物进行RT-PCR扩增,观察到长约1 900 bp的特异性条带;Western blot结果显示,该病毒可与EV71 VP1特异抗体结合;透射电子显微镜（transmission electron microscopy,TEM）检测可见20～30 nm球形病毒颗粒;在RD细胞中将子代病毒连续增殖8代后,检测其毒力高于母本株（6.35 lgTCID50/mL）。结论：通过引入ccdB和Golden Gate Clone技术,建立了快速、高效构建EV71病毒的拯救质粒的方法,效率达到100%,为正链RNA病毒反向遗传学系统的构建提供了一种新的策略,为进一步研究EV71病毒的致病机制及疫苗制备等提供了技术平台。     

耐碳青酶烯铜绿假单胞菌的分布及耐药分析

目的了解耐碳青酶烯铜绿假单胞菌的分布及耐药分析,为临床合理使用抗菌药物及医院感染的防控提供依据方法对该院2015年1月到2017年12月临床分离的耐碳青酶烯铜绿假单胞菌的分布及药敏情况作回顾性分析。结果耐碳青酶烯铜绿假单胞菌的检出以痰标本为主,占90.85%;主要分布在ICU病房、呼吸内科等科室;耐碳青酶烯铜绿假单胞菌对阿米卡星的耐药率较低,为14.5%～30.5%,对其他抗菌药物呈不同程度的耐药;耐碳青酶烯铜绿假单胞菌对常用的抗菌药物的耐药率明显高于非耐碳青酶烯铜绿假单胞菌。结论临床医生应加强对耐碳青酶烯铜绿假单胞菌的耐药监测,合理使用抗生素。     

血小板计数与血栓弹力图参数相关性研究

目的探讨血小板(PLT)计数与血栓弹力图(TEG)参数之间的相关性,为临床诊疗提供相关信息。方法对2018年9月至2019年7月绵阳市第三人民医院收治的11535例患者的相关检测指标进行回顾性分析。结果弹力图最大切角(Angle)、血凝块最大振幅(MA)、凝血综合指数(CI)与PLT计数呈正相关,相关系数r分别为0.362、0.463、0.312(P<0.001);反应时间(R)、血凝块形成时间(K)与PLT计数呈负相关,相关系数r分别为-0.022、-0.228(P<0.05)。PLT轻度降低组(PLT计数为75×10^9/L~<100×10^9/L)的PLT计数与MA及CI呈正相关,PLT轻度升高组(PLT计数为300×10^9/L~<450×10^9/L)、PLT正常低值组(PLT计数100×10^9/L~<200×10^9/L)、PLT正常高值组(PLT计数为200×10^9/L~<300×10^9/L)PLT计数与Angle、MA及CI呈正相关(P<0.05)、与K呈负相关(P<0.05),其余各组PLT计数与TEG参数之间均无相关性(P>0.05)。结论PLT计数与K和R呈负相关;与Angle、MA及CI呈显著正相关,PLT计数异常时,MA比PLT计数更能准确地反映PLT功能。     

四川省某医院精神科患者尿路感染的病原菌分布及耐药性分析

目的了解精神科住院患者尿路感染的病原菌分布及细菌耐药情况,为临床经验性抗感染治疗提供参考。方法收集2016年-2018年在四川省精神卫生中心精神科住院治疗且存在尿路感染的患者171例,对尿液标本进行细菌分离培养,使用质谱(MALDI-TOF-MS)和Vitek 2 Compact全自动细菌鉴定系统进行细菌鉴定,采用微量肉汤稀释法进行体外药敏试验,使用WHONET 5. 6软件对药敏试验结果进行分析。结果在发生尿路感染的精神科住院患者中,女性106例(61. 99%),男性65例(38. 01%)。共分离出病原菌171株,最常见的致病菌是大肠埃希菌[96株(56. 14%)],其次为肺炎克雷伯菌[16株(9. 36%)]和摩根菌属[9株(5. 26%)]。大肠埃希菌对氨苄西林、哌拉西林、庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、复方新诺明的敏感性均低于50%;对哌拉西林/他唑巴坦、头孢西丁、亚胺培南、磷霉素、呋喃妥因的敏感性均高于90%,检出1例对亚胺培南不敏感的大肠埃希菌,未发现对美罗培南、阿米卡星耐药的菌株。结论精神科住院患者尿路感染以女性多见,常见病原菌包括大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、摩根菌属,其中大肠埃希菌的耐药性较严重。     

596株肺炎链球菌的感染分布特征及耐药性分析

目的 探究肺炎链球菌的临床感染分布特征、耐药状况和变化趋势,为临床防治提供参考。方法 回顾性分析绵阳市第三人民医院2017年1月至2020年12月收治的75 201例患者临床分离的肺炎链球菌感染特点及耐药趋势。结果 共分离出肺炎链球菌596株,其中儿童组378株,成人组218株;感染标本主要来源于痰液标本(82.0%),其次为咽拭子(6.7%);主要分布在儿科(60.1%),其次为ICU (14.9%);感染人群主要为<3岁儿童(48.2%)及>60岁老年人(25.8%),感染以冬春季节为主;未发现万古霉素、利奈唑胺耐药株,儿童组对多数抗菌药物的耐药率低于成人组,其中青霉素、阿莫西林、头孢曲松、头孢噻肟、美罗培南、红霉素、左氧氟沙星、莫西沙星耐药率比较差异均有统计学意义(P<0.05);青霉素、头孢曲松、头孢噻肟、美罗培南、氯霉素、左旋氧氟沙星、莫西沙星总体耐药率较低(<16.8%);四环素、红霉素、复方磺胺甲噁唑耐药率较高(78.6%～97.6%)。结论 肺炎链球菌主要感染人群为<3岁和>60岁患者,冬、春季多发,肺炎链球菌对四环素、红霉素、复方磺...