基于网络药理学和分子对接法探索复方一枝蒿颗粒治疗新型冠状病毒肺炎的潜在分子机制

目的 通过网络药理学及分子对接技术探寻复方一枝蒿颗粒治疗新型冠状病毒肺炎的作用机制。方法 应用TCMSP数据库、BATMAN-TCM数据库及文献收集复方一枝蒿颗粒活性成分及潜在靶点。通过TTD、GeneCards和OMMI数据库检索新型冠状病毒肺炎相关的靶点。将复方一枝蒿颗粒药物靶点和新型冠状病毒肺炎相关基因取交集，使用String数据库构建靶蛋白相互作用（PPI）网络。通过Cytoscape构建“药物–活性成分–靶点基因–疾病”网络。对交集靶点进行GO功能、KEGG通路富集分析。利用Autodock_vina软件对活性成分和靶点进行分子对接。结果 共筛选92个活性成分，1 627个靶点，新型冠状病毒肺炎疾病靶点464个，两者取交集筛选出87个潜在靶点。GO功能富集得到2 040个条目（P＜0.05），与病毒过程、参与共生相互作用的生物过程、活性氧代谢过程的调节、与宿主相互作用的生物过程、病毒生命周期、炎症反应的调节等生物学过程有关。KEGG通路分析共得到150条通路，与新冠肺炎密切相关的有人巨细胞病毒感染、结核、COVID-19、IL-17信号通路等。分子对接结果证实，筛选的靶点受体蛋白与活性成分可以较好地结合。结论 复方一枝蒿颗粒可通过多组分、多靶点和多途径的方式对新型冠状病毒肺炎产生治疗作用。     

刺槐素通过调控TLR4通路对干眼症大鼠的保护作用及其机制研究＊

目的 研究刺槐素对干眼症（DED）大鼠的保护作用及可能的分子机制。方法 60只SD大鼠随机分为空白组（不做处理）；模型组；0.1% SH组；刺槐素0.1%、0.25%、0.5%组。每组10只，除正常组外，每日4次皮下注射12.5 mg/天氢溴酸东莨菪碱（SCOP），共7天。所有的药物均为在眼球表面局部给药，每只眼睛20 μL，每天4次。通过泪液分泌实验检测各组大鼠泪液分泌情况，通过角膜荧光染色检测各组大鼠角膜表面缺损情况，过碘酸雪夫试剂（PAS）染色观察结膜杯状细胞数量，酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组大鼠角膜组织中炎症反应和氧化应激相关指标含量。免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠角膜组织中Toll样受体4（TLR4）通路相关蛋白TLR4、髓样分化因子88（MyD88）、核因子κB p65（NF-κB p65）、Pyrin域蛋白3（NLRP3）蛋白表达。结果 与正常组相比，模型组大鼠泪液分泌量、结膜杯状细胞数量明显减少，角膜荧光素染色评分显著升高，但角膜新血管生成评分减少，同时角膜组织中白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、IL-10、丙二醛（MDA）水平上调，而超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）含量则下调，TLR4、MyD88、NLRP3、p-NF-κB p65蛋白相对表达量均升高（P<0.05）；与模型组相比，经刺槐素0.25%、0.5%组治疗后，大鼠泪液分泌量、结膜杯状细胞数量明显增加，角膜荧光素染色评分显著降低，角膜新血管生成评分显著增加，同时角膜组织中IL-1β、TNF-α、IL-10、MDA水平下调，而SOD和GSH-Px含量则上调（P<0.05），尤其是刺槐素0.5%组上述指标变化更明显，而且角膜组织中TLR4、MyD88、NLRP3、p-NF-κB p65蛋白相对表达量较模型组显著降低（P<0.05）。结论 刺槐素对干眼症大鼠具有保护作用，其保护机制与抑制干眼症大鼠的氧化应激反应、炎症反应和TLR4/MyD88/NLRP3通路活性有关。     

速生薄口螨休眠体的形态和分子特征鉴定

目的 通过形态和分子特征鉴定速生薄口螨休眠体。方法 从采集到的生姜样本中分离出速生薄口螨休眠体,分别在光镜和扫描电镜下观察其外部形态和超微形态并进行拍照鉴定。同时提取基因组DNA对cox1和ITS基因进行测序和分析。结果 速生薄口螨休眠体足4对,背面躯体呈扁平状,表皮骨化,前足体呈三角状,足三表皮内突相连,形成一条拱线,分隔开胸板和腹板。足爪和前跗节发达,有刚毛附着,躯体末端吸盘板发达,板上有八个吸盘呈2-4-2分布。经PCR扩增得到cox1基因片段大小为487 bp,ITS全序列长度为1667 bp。结论 根据光镜和电镜下速生薄口螨休眠体的形态,结合cox1和ITS基因序列,为速生薄口螨休眠体的鉴定和生物学分类提供了依据,也可为控制速生薄口螨及其引起的过敏性疾病奠定基础。     

基于单糖指纹图谱技术的速生黄芪与野生黄芪的鉴别

目的建立黄芪单糖指纹图谱,找出速生黄芪与野生黄芪糖谱专属性差异,为不同生长方式黄芪鉴别和品质评价提供依据。方法采用单糖指纹图谱技术,对24批不同生长方式的黄芪药材,以黄芪细胞质中游离糖、多糖和糖缀合物为研究对象,建立速生黄芪与野生黄芪的单糖指纹图谱,并对不同生长方式的黄芪中单糖的种类与量进行主成分分析和聚类分析。结果野生黄芪中不同糖类成分的量明显高于速生黄芪,且2种黄芪可按指标成分的比例进行鉴别(速生黄芪中甘露糖-阿拉伯糖3.5∶1,葡萄糖-阿拉伯糖4∶1;野生黄芪中甘露糖-阿拉伯糖3.5∶1,葡萄糖-阿拉伯糖4∶1)。结论该结果不仅为黄芪品质评价指标的筛选提供了依据,同时为以糖类化合物为主要活性物质的中药材质量评价标准的研究提供了思路与方法。     

野菊花中刺槐甙的库伦滴定法

野菊花Chrysanthemum indicum L.是一种常用中草药,对防治流行性脑脊髓膜炎、流感、高血压、肝炎、痢疾、痈疖疗疮有一定作用。最近还报道野菊花栓剂可用于治疗前列腺炎等症。野菊花的化学成分,据报道含有黄酮类化合物,已知的有刺槐甙(acaciin),水解后得刺槐素(acacetin),分子结构式为     

香青兰中总黄酮和单体的含量测定

目的:考察香青兰中单体(刺槐素-7-o-β-D-葡萄糖苷)、总黄酮的含量。方法:采用紫外分光光度法(UV)测定总黄酮含量;采用高效液相色谱法(HPLC)测定单体含量,RP-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水(26∶74),流速为1.1 mL·min-1,柱温室温,检测波长为326 nm。结果:单体(刺槐素-7-o-β-D-葡萄糖苷)含量为0.33%,回收率为98.62%;总黄酮含量为1.90%,回收率为97.59%。结论:所建方法准确、简便,为科学地评价香青兰药材的质量提供依据。     

基于网络药理学的黄芩治疗鼻咽癌分子机制研究

目的 通过网络药理学的方法,筛选黄芩Scutellariae Radix的主要活性成分,构建药物-成分-疾病-靶点网络,探讨其治疗鼻咽癌分子机制。方法 采用TCMSP、String及Genecard等数据库,获取黄芩化学成分及其相关靶点、鼻咽癌疾病的靶点,并制作蛋白互作网络。通过Cytoscape 3.7.2绘制药物-成分-疾病-靶点网络。基于生物信息学开源软件Bioconductor以及R统计程序设计语言对黄芩作用的生物学过程以及KEGG进行富集分析。结果 黄芩的36个有效成分通过调控48个靶点和99条通路对鼻咽癌进行治疗,4个关键的化合物为汉黄芩素、黄芩素、刺槐素及β-谷甾醇,可通过AKT1、JUN、CASP3、VEGFA等关键靶蛋白介导AGE-RAGE、乙型肝炎、白细胞介素17等信号通路发挥抗鼻咽癌作用。结论 黄芩可以通过多靶点、多途径参与鼻咽癌的治疗。     

刺槐素在SH-SY5Y细胞氧-葡萄糖剥夺和小鼠脑缺血再灌注中的神经保护作用

目的 探讨刺槐素在SH-SY5Y细胞氧-葡萄糖剥夺和小鼠脑缺血再灌注中的神经保护作用.方法 培养神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,分为正常培养组、氧-葡萄糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)组以及刺槐素小剂量组(1μmol/L)、中剂量组(5μmol/L)和大剂量组(10 μmol/L),复氧24 h后应用噻唑蓝染色法测定细胞存活率,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法测定LDH漏出率.60只C57小鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注组以及小剂量组、中剂量组和大剂量刺槐素组,每组12只.采用线栓法制作大脑中动脉闭塞模型,缺血再灌注时给予刺槐素腹腔注射(小、中、大剂量组分别为6.25、12.5和25 mg/kg).再灌注后24 h时进行神经功能评分,应用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色检测脑梗死体积.结果 体外实验显示,1 μmol/L、5μmol/L和10 μmol/L刺槐素组SH-SY5Y细胞存活率分别为(90.34±6.87)％(P=0.000)、(85.47 ±2.24)％ (P=0.001)和(81.79±1.77)％(P=0.008),均显著高于OGD组的(70.62± 8.89)％.1μmol/L、5μm/L和10 μm/L刺槐素组SH-SY5Y细胞LDH漏出率分别为(159.11 ±13.11)％ (P=0.021)、(155.12±24.72)％(P=0.011)和(160.92 ±7.83)％ (P =0.027),均显著低于OGD组的(180.35±10.60)％.体内实验显示,大剂量刺槐素组神经功能评分显著低于与脑缺血再灌注组[(1.67±0.85)分对(2.50±0.55)分;P=0.018].小剂量、中剂量和大剂量刺槐素组梗死体积分别为(24.14±7.10)mm3、(17.18±3.19)mm3和(12.86±1.88)mm3,均显著小于脑缺血再灌注组的[(48.81±9.48) mm3](P均=0.000).结论 体外和体内实验均显示,刺槐素具有神经保护作用.     

HPLC法测定香菊感冒颗粒(无糖型)中刺槐素的含量

目的:建立高效液相色谱法测定香菊感冒颗粒(无糖型)中刺槐素的含量。方法:刺槐苷使用甲醇超声提取并用盐酸水解在ODS(5μm,4.6×250 mm)柱上,以甲醇-水-冰醋酸(350∶150∶2)为流动相进行分离,流速1.0m l/m in,340 nm波长检测。结果:方法准确、精密度高、重现性好,浓度在2.00~10.00μg/m l范围内线性关系良好,r=0.9998,平均加样加收率为99.9%,RSD=0.41%(n=6)。结论:方法简便、专属、重现性好,可作为香菊感冒颗粒质量控制的一种方法。