同时分离纯化枇杷叶中熊果酸和科罗索酸工艺研究

目的采用大孔吸附树脂吸附法同时分离纯化枇杷叶中的熊果酸和科罗索酸,并确定分离纯化工艺。方法采用乙醇浸提法将枇杷叶中的熊果酸和科罗索酸进行提取分离纯化,对15种大孔吸附树脂进行筛选,利用大孔吸附树脂柱层析同时分离纯化枇杷叶中的熊果酸和科罗索酸。结果经过对15种大孔吸附树脂的筛选,HPD722的吸附量最好,因此选择HPD722大孔吸附树脂进行柱分离,并确立了最佳的分离纯化工艺。结论HPD722大孔吸附树脂能够使熊果酸和科罗索酸达到较好的分离纯化,工艺可行。     

全自动测序仪PCR产物测序影响因素研究

目的对影响ABI3500xl全自动测序仪测序过程的因素进行研究,以提高测序的准确度和成功率并降低成本。方法对PCR反应体系、产物纯化方法进行优化。将Big Dye分别稀释8、16和32倍进行测序PCR反应,比较不同的Big Dye稀释倍数对PCR产物测序结果的影响;使用CENTRI-SEP柱纯化法、Big Dye Cleaning Beads磁珠法和乙醇乙酸钠EDTA法对测序PCR产物进行纯化,比较不同纯化方法对测序结果的影响。结果 Big Dye稀释8倍和16倍时,PCR反应体系的测序结果正常,而稀释32倍时测序结果出现碱基误读;3种不同的测序PCR产物纯化方法均可得到满意的测序结果。相比之下,CENTRI-SEP Kit纯化方法所需时间最短(0.5 h),但是成本较高;乙醇乙酸钠EDTA纯化方法成本最低,但耗时较长(2 h);磁珠纯化法所需时间(1 h)和成本介于CENTRI-SEP Kit法和乙醇乙酸钠EDTA法之间,但不适于高通量操作。结论 ABI3500xl全自动测序仪测序过程中,Big Dye稀释16倍时所得测序结果准确且成本较低;3种测序PCR产物纯化方法均可得到准确的测序结果 ,实际工作中应根据操作者具备的实验条件选择最适纯化方法 ,以减少测序时间和成本。     

军事医学科学院附属医院临床检验中心分子诊断实验室

<正>军事医学科学院附属医院临床检验中心分子诊断实验室位于北京市丰台区东大街8号,成立于2007年3月,是集临床、科研、教学为一体的综合实验室。现有技术人员8人,其中主任技师1人,主治医师1人,技师6人。拥有完备的分子生物学实验条件和设备,包括罗氏LighCycler480Ⅱ实时荧光定量PCR检测系统、伯乐IQ5实时荧光定量PCR仪、SLAN实时荧光定量PCR仪、罗氏MagNA Pure LC 2.0全自动核酸分离纯化及加样系统、西安天隆核酸提取仪、梅里埃Easy MAG全自动核酸提取系统、电化学     

人ATG4B的表达及蛋白纯化和鉴定

目的构建含His标签的自噬相关蛋白4同源物B(ATG4B)重组质粒以得到His-ATG4B蛋白,初步鉴定其生物学活性。方法利用PCR技术从人乳腺文库中扩增出ATG4B基因的编码序列,插入p ET-28a(+)载体中得到重组质粒,经酶切鉴定后转化Rossate菌,挑选小量诱导出的His-ATG4B菌液进行His-ATG4B蛋白的纯化,SDS-PAGE和Western blot法检测His-ATG4B蛋白的纯化效果,GST pull-down技术对蛋白生物学功能进行鉴定。结果用PCR技术从人乳腺文库中扩增得到大小约1100 bp的目的片段,插入p ET-28a(+)载体中构建出His-ATG4B重组质粒,酶切鉴定及测序结果均表明His-ATG4B质粒构建成功;转化Rossate菌并小量诱导,表达鉴定成功后纯化蛋白,得到相对分子质量(Mr)约为47 000的His-ATG4B蛋白,且SDS-PAGE检测蛋白纯化效果较好;GST pull-down实验证实His-ATG4B蛋白可以和LC3B蛋白在体外相互作用,生物学活性良好。结论本实验成功得到His-ATG4B蛋白,为研究ATG4B在自噬中的作用机制奠定实验基础。     

水质对蒸气灭菌的影响

目的研究纯化水和软化水对灭菌器的影响,为灭菌器的安全运行提供有效的解决措施。方法郑州市第一人民医院消毒供应中心2002年4月至2010年7月使用软化水进行灭菌,2010年8月至2018年8月使用纯化水进行灭菌。分析软化水和纯化水对灭菌器的影响。结果 1号灭菌器(软化水蒸汽)灭菌后纱布A发黄,镊子A表面有黄斑。2号灭菌器(纯化水蒸汽)灭菌后纱布B和镊子B无明显变化。使用纯化水后,灭菌器水垢及灭菌器的损坏现象大大减少。结论使用纯化水后,灭菌设备维修更换频率下降,纯化水产生的蒸汽冷凝物指标优于使用软化水。     

广西壮药鸡骨草分级多糖的制备与纯化

目的:探讨广西壮药鸡骨草分级多糖的制备及纯化。方法:用传统的水提法提取鸡骨草多糖,并用三氯乙酸法去除蛋白纯化;鸡骨草多糖的醇沉分级采用分步醇沉法,用90%、70%、40%的乙醇将鸡骨草粗多糖进行分级沉淀,分别得到总多糖(PACL)和90%醇沉多糖(PACL1)、70%醇沉多糖(PACL2)、40%醇沉多糖(PACL3)三个级分。结果:测得鸡骨草总糖(PACL)及各级醇沉多糖(PACL1、PACL2、PACL3)的量分别为65.8 g、27.5 g、21.5 g、10.0 g。结论:随着乙醇浓度的增加,所沉淀的鸡骨草多糖的质量随之增加,即表明多糖沉淀的量与所用的乙醇浓度呈一定的正相关性。