PERK信号通路介导结肠癌细胞对5-氟尿嘧啶耐药机制的研究

目的:观察PERK蛋白对结肠癌细胞药物敏感性的影响，并进一步探讨其相关作用机制。方法:结肠癌细胞系HCT116分为三组:空白对照（Control）组、下调PERK表达（si-PERK）组、阴性对照（si-NC）组；采用免疫荧光及RT-PCR验证转染效率；利用CCK-8实验检测下调PERK表达后结肠癌细胞对化疗药物5-FU的敏感性变化；Annexin V-FITC凋亡实验检测下调PERK表达对结肠癌细胞凋亡的影响；利用RT-PCR及Western Blot实验检测PERK信号通路中关键分子eIF2α、ATF4、CHOP、XIAP的mRNA及蛋白表达变化。结果:RT-PCR实验表明:与正常对照组相比，si-PERK 组mRNA的表达显著下降（P＜0.05）,免疫荧光提示转染效率达80%以上；CCK-8实验发现与si-NC组相比，5-FU对 si-PERK组细胞的半数抑制浓度（IC50）明显降低（P＜0.01）；Annexin V-FITC凋亡实验发现与si-NC组相比，si-PERK组细胞的凋亡发生率显著升高（P＜0.05）；RT-PCR及Western Blot实验发现与si-NC组相比，si-PERK组细胞中PERK信号通路下游关键分子eIF2α、ATF4、CHOP的mRNA及蛋白表达均明显降低（P＜0.05）。结论:在结肠癌细胞中，抑制PERK表达后，其可能通过下调eIF2α、ATF4、CHOP的表达促进细胞发生凋亡，从而促进细胞对化疗药物5-FU的敏感性。     

医疗环境表面分离革兰阴性非发酵杆菌对消毒剂抗性的研究

摘要 目的 了解医院环境表面分离的革兰阴性非发酵杆菌对消毒剂的抗性情况,为科学选择消毒剂提供依据。方法 采用肉汤稀释法对医院环境物体表面分离出的革兰阴性非发酵杆菌的消毒剂抗性进行测定。结果 从医院物体表面176份标本中分离出15株革兰阴性非发酵杆菌,检出率8.52%,主要来自重症监护病房(ICU)。检出部位居前3位的是治疗操作台面、电脑键盘和ICU床栏。三氯异氰尿酸对15株非发酵杆菌的MIC值为有效氯250～500 mg/L,标准菌株为500 mg/L；MBC值为250～1 000 mg/L,标准菌株为1 000 mg/L。复合季铵盐对15株菌的MIC值为0.98～15.62 mg/L,标准菌株为15.62 mg/L；MBC值为1.95～31.25 mg/L,标准菌株为250 mg/L。结论 医院环境物体表面分离的革兰阴性非发酵杆菌对含氯消毒剂和季铵盐类消毒剂抗力未见升高现象,这些消毒剂在医院环境使用消毒效果可得到保证。     

煮炸鹿茸加工过程中晚期糖基化终产物生成规律及动力学分析

目的研究煮炸鹿茸加工过程中晚期糖基化终产物的生成规律及动力学参数。方法通过构建葡萄糖与赖氨酸模拟煮炸鹿茸加工过程美拉德(Maillard)反应体系,分别采用紫外-可见分光光度法和UPLC-MS/MS法测定体系褐变指数和典型晚期糖基化终产物(羧甲基赖氨酸和羧乙基赖氨酸)含量变化,探讨晚期糖基化终产物的生成规律和动力学参数。结果鹿茸加工过程中煮炸时发生褐变反应,生成羧甲基赖氨酸和羧乙基赖氨酸反应的活化能分别为5.07、40.44、78.47 kJ/mol,且均为零级反应;烘烤时相应反应的活化能分别为6.72、89.34、164.77 kJ/mol,也均为零级反应。相对于生成羧甲基赖氨酸而言,生成羧乙基赖氨酸所需能量更高,反应更难发生。结论烘烤过程温度变化对晚期糖基化终产物的动力学参数影响显著高于煮炸过程,长时间较高温度的烘烤使鹿茸中产生了较多的晚期糖基化终产物,这些结果为鹿茸加工过程中晚期糖基化终产物的阻断、抑制策略提供了理论基础,对生产绿色安全的鹿茸及加强中药安全具有重要意义。     

NRAGE影响人食管癌细胞放射抗性的作用及其机制研究

背景与目的：食管癌是全球威胁人类生命和健康的常见恶性肿瘤之一，中国每年食管癌发病人数占全球发病总人数的一半以上，以食管鳞癌最为常见。放疗是食管癌三大治疗手段之一，而放射抗性是导致其治疗失败的主要原因。神经营养因子受体相互作用MAGE类药物（neurotrophin receptor-interacting MAGE homolog，NRAGE）在放射抗性细胞株TE13R120中表达量明显高于亲本TE13细胞，且NRAGE亚细胞定位变化可能参与食管癌细胞放射抗性的形成。通过基因转染构建NRAGE稳定表达的食管癌细胞系，以进一步明确NRAGE基因与食管鳞癌细胞放射抗性的关系，分析该基因影响放射抗性的具体机制。方法：通过基因转染构建NRAGE稳定表达的食管癌细胞系。采用细胞克隆形成实验检测细胞放射敏感性，采用流式细胞术检测细胞周期及凋亡；细胞划痕、Transwell侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力，采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitive polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞中β-catenin表达情况。组间差异采用t检验或方差分析。结果：实验分为转染过表达组（Eca109/NRAGE组）和空白对照组（Eca109组）。Eca109/NRAGE细胞中NRAGE的表达量明显高于Eca109（t=29.65，P<0.05）。照射后Eca109/NRAGE细胞的放射抗性显著高于Eca109。流式细胞术检测结果显示，Eca109/NRAGE细胞中对射线抵抗性最强的S期细胞比例增加，对射线最敏感的G ₂ /M期减少。Eca109/NRAGE细胞凋亡率较Eca109细胞降低（t=3.268，P<0.05）。Eca109/NRAGE细胞迁移和侵袭能力均高于Eca109。RTFQ-PCR和Western blot检测结果显示，β-catenin的mRNA表达及蛋白水平在Eca109/NRAGE细胞中明显高于Eca109（t=15.87，P<0.05）。结论：NRAGE参与Eca109细胞放射抗性的形成，改变细胞的细胞周期分布和凋亡情况，影响细胞迁移及侵袭能力并可能影响食管癌细胞的放射敏感性，该作用可能与激活Wnt/β-catenin信号转导通路有关。     

棉铃虫对Bt作物抗性新机制被发现

本报讯近日,从中国农业科学院植物保护研究所获悉,该所经济作物虫害监测与控制团队研究发现,棉铃虫苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素受体基因ABCC2的变异可以导致其对Bt作物产生高水平的抗性,但这种变异显著增加了抗性棉铃虫对另外一种生物毒素阿维菌素的敏感性。据悉,苏云金芽孢杆菌(Bt)     

北京地区耐多药结核分枝杆菌抗性相关基因突变频率的评价

目的探讨北京地区耐多药结核分枝杆菌(MDRMTB)中与异烟肼(INH)和利福平(RFP)抗性相关基因突变的分布和频率。方法对173株MDR-MTB菌株中和INH耐药相关的基因katG、inhA和inhA启动子区,和RFP耐药相关基因rpoB进行测序分析;并对全部MDR-MTB菌株进行基因分型,对不同基因型菌株中抗性相关基因突变的比例进行分析。     

淡色库蚊中溴氰菊酯和生物丙烯菊酯抗性发展与击倒抗性基因频率之间的关系?

使用溴氰菊酯和生物丙烯菊酯对采自北京的淡色库蚊蚊株进行抗药性筛选,筛选时,4龄幼虫被置于LC_(50)浓度值的水体中饲养。经过7代的不间断筛选,蚊虫对溴氰菊酯和生物丙烯菊酯的抗性倍数分别上升了12.9倍和4.8倍,对应敏感株,抗性倍数分别为217.8倍和41.6倍。PCR检测结果显示,kdr抗性基因的频率在逐代上升。F_7代时,溴氰菊酯筛选株和生物丙烯菊酯筛选株的kdr抗性基因频率已分别上升至98.96%和97.87%。结果表明,Phe1014的抗性纯合子频率和抗性杂合子频率均与LC_(50)值之间具有显著相关性。本文证明了高浓度的拟除虫菊酯杀虫剂筛选会使Phe1014突变频率快速的上升。