红色荧光蛋白在酿酒酵母中的表达特性研究

目的研究红色荧光蛋白编码基因Dsred在酿酒酵母菌中的快速克隆与表达。方法根据已发表基因序列设计引物,采用连续重叠PCR方法快速克隆获得全长Dsred基因,将其与pMD-18T载体连接后进行测序鉴定。通过In-fusion方法将鉴定正确的pMD-Dsred重组载体与酿酒酵母表达载体pYeDP60进行连接,测序后利用LiAc方法将鉴定正确的pYeDP60-Dsred重组表达载体转化至酿酒酵母菌W303-1B中,PCR扩增筛选阳性克隆,获得的W303B[pYeDP60-Dsred]工程菌经诱导培养后进行SDS-PAGE电泳分析和绿光激发荧光成像检测。将工程菌分别接种至YPD、YPG、SCG和SCD培养基,培养48、72、96、120和144h后分别测定吸光度(A600)值。取诱导表达后的工程菌(菌液组)进行离心(菌体组)、离心后加甘油(高渗组)处理,分别置于–70、–20、4、28和37℃条件培养,荧光显微镜观察其表达特性。结果连续重叠PCR扩增和测序鉴定结果表明,扩增获得的Dsred基因长为678bp,其序列与已发表的基因序列完全一致;Dsred基因已成功插入pYeDP60-Dsred重组表达载体,且受酵母诱导型启动子GAL10-CYC1调控表达。PCR扩增筛选和SDS-PAGE分析显示,pYeDP60-Dsred重组表达载体已成功导入酿酒酵母菌中,诱导表达产物相对分子质量与预期相符,且诱导后工程菌可在绿光激发下发出红色荧光。4种培养基内工程菌的菌体生长情况无明显差别,重组Dsred红色荧光蛋白表达不会抑制酿酒酵母菌体生长。荧光显微镜观察显示,工程菌经不同处理后,高渗组红色荧光蛋白成熟时间最短,菌液组时间最长;红色荧光蛋白在37℃条件下培养时成熟最早,但降解速度较快。结论成功构建了pYeDP60-Dsred重组酿酒酵母表达载体,实现了Dsred基因在酿酒酵母菌体内的异源表达。红色荧光蛋白表达对酿酒酵母菌体生长无明显影响,且离心保留菌体和加入甘油等缺水高渗处理都有利于红色荧光蛋白的成熟。     

TARDBP在胃腺癌组织中的表达及其临床意义

目的　检测 TAR DNA结合蛋白（transactive response DNA-binding protein,TARDBP）在胃腺癌组织中的表达 ,分析其表达与胃腺癌患者临床病理特征之间的关系。方法　选取 2017年 1月～ 2018年 1月陕西省人民医院确诊的 49例胃腺癌、 19例癌旁组织及 19例正常胃组织作为研究对象,采用免疫组织化学（ SP）法检测 TARDBP的表达,并探讨 TARDBP表达与胃腺癌患者临床病理特征之间的关系。结果　TARDBP的着色部位在细胞核,其在胃腺癌组织中的表达率为 89.80%（44/49）,在胃腺癌癌旁组织中的表达率为 68.42%（13/19）,在胃正常黏膜组织中的表达率为 26.32%（5/19）。TARDBP蛋白在胃腺癌及癌旁组织中的表达均显著高于胃正常黏膜组织,其差异均具有统计学意义 (χ2=6.756～ 27.400,均 P＜ 0.05);TARDBP在胃腺癌中的表达高于癌旁组织,但其差异无统计学意义 (χ2=3.171,P＞ 0.05);TARDBP在胃腺癌组织中的表达与患者性别、年龄、肿瘤的分化程度、肿瘤大小、淋巴结转移和临床分期均无相关性 (χ2=0.000～ 0.762,均 P＞ 0.05)。结论　TARDBP在胃腺癌组织和癌旁组织中可高表达, TARDBP表达失调可能与胃腺癌的发生、进展存在一定的相关性。     

柴胡药材干根DNA提取及RAPD分析

目的 探索一种适用于柴胡药材干根DNA提取的方法,为实现以分子标记方法辨别柴胡药材奠定基础.方法 比较研究了分别用CTAB法、SDS法和高盐低pH法等3种方法提取柴胡样品基因组DNA.柴胡药材干根经过PVP以及TNE缓冲液进行不同的预处理,以CTAB法抽提DNA.以EcoR I/Mse I双酶切琼脂糖凝胶电泳及RAPD扩增检测提取DNA的质量.采用NTSYS-pc软件计算Jaccard遗传相似系数,以非加权配对算术平均数法(UPGMA)建立聚类图.结果 常规DNA提取方法提取药材干根DNA溶液经4℃放置后,黏稠并褐变,严重影响酶切和RAPD扩增.样品预处理优化条件是研磨时加入3%PVP,TNE缓冲液于0℃浸提2次,每次30min.以该优化的预处理方法处理6个柴胡药材干根样品,提取DNA条带清晰,酶切完全,RAPD扩增图谱清晰稳定,共获得有效扩增条带28条,其中多态性条带为20条,占71.43%.聚类分析表明,6个栽培品中,原产地为山西灵丘外地引种(LQWY)和甘肃陇西(LX)、山西灵丘(LQ)和山西方山(FSH)的亲缘关系较近,陕西商洛(SHL)和其他5个栽培品的亲缘关系较远.结论 柴胡药材干根经过预处理后,可采用常规的DNA提取方法抽提DNA,所提DNA适合于酶切、RAPD等分子标记分析.     

α-AMY同工酶的应用概况

简要介绍了α-AMY同工酶的来源、存在方式及物理化学性质,重点阐述α-AMY同工酶在临床诊断、工业和农业中的应用,并展望α-AMY同工酶在临床诊断、工业和农业中的应用前景.     

大黄素对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响

目的：研究大黄素(emodin,EMO)对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响。方法：分离培养大鼠前体脂肪细胞,按照EMO添加剂量不同,把培养板中接种细胞的培养孔随机分为0,5,10,20,40,80,160 μmol·L^-1 处理组；采用MTT比色法和流式细胞术测定EMO对大鼠前体脂肪细胞增殖的影响；采用油红O染色提取法,检测脂肪细胞内甘油三酯积聚量的变化；采用形态学观察,检测前体脂肪细胞分化的形态学变化。结果：20～160 μmol·L^-1 的EMO对大鼠前体脂肪细胞的增殖与分化呈剂量和时间依赖性地抑制作用,并可在一定程度上诱发前体脂肪细胞凋亡。结论：EMO具有潜在的减肥降脂作用。     

菔厚双参胶囊对脾虚模型小鼠的影响

目的:研究菔厚双参胶囊对大黄致小鼠脾虚模型的影响。方法:连续灌胃大黄水煎液14d造成小鼠脾虚模型,观察实验小鼠体重、体温、低温游泳时间、小肠推进率。结果:菔厚双参胶囊对脾虚模型用药治疗后各剂量组动物的状态明显好转,其外观状态与空白对照组相似,菔厚双参胶囊2.10g·kg-1、1.05g·kg-1组能缓解大黄造成的小鼠体重下降,可明显提高脾虚模型小鼠体温;明显延长小鼠低温游泳时间,提示菔厚双参胶囊能够改善小鼠脾虚证脾虚模型体征,明显增强脾虚模型小鼠耐寒耐疲劳能力;能够显著降低小肠推进率。结论:结论:菔厚双参胶囊可改善小鼠的脾虚症状,具有健脾作用。     

复方乌骨藤胶囊与环磷酰胺合用治疗Lewis肺癌研究增效减毒作用

目的:探讨复方乌骨藤胶囊与环磷酰胺合用治疗Lewis肺癌的增效减毒作用。方法:以小鼠移植性肿瘤为模型,测定其抑瘤率、体重、血常规变化和骨髓增生情况。结果:复方乌骨藤胶囊和环磷酰胺合用可明显对抗治疗量环磷酰胺致荷瘤小鼠的体重下降,对小鼠Lewis肺癌具有明显的抑瘤作用,可使治疗量环磷酰胺所致骨髓有核细胞数、外周血白细胞数降低有明显回升作用。结论:复方乌骨藤胶囊与治疗量环磷酰胺联合应用于肿瘤治疗,抗癌效果更佳,副作用更低。     

骨质糖浆对肾阳虚模型小鼠的实验研究

目的:探讨骨质糖浆对小鼠肾阳虚模型的治疗作用。方法:将雄性小鼠分为6组,除正常对照组外,其余各组小鼠用氢化可的松注射液制造肾阳虚模型,然后,各组给水或给药,连续10d。结果:骨质糖浆10mL/kg、5mL/kg组体重增加量均显著高于模型对照组,10mL/kg组小鼠体温显著高于模型对照组,骨质糖浆10mL/kg、5mL/kg组能明显延长阳虚证小鼠低温游泳耗竭时间,10mL/kg、5mL/kg、2.5mL/kg能使阳虚小鼠胸腺指数显著升高(P<0.05)。结论:骨质糖浆能明显增加阳虚证小鼠体重、体温和延长低温游泳耗竭时间的作用,明显改善肾阳虚小鼠胸腺萎缩状况。     

生干漆及煅干漆的生药学研究

目的 对生干漆和煅干漆进行生药学研究。方法 采用生药性状描述、粉末特征鉴定、理化鉴别等方法,对生干漆与煅干漆的主要性状进行了比较。结果 生干漆及煅干漆在生药性状、粉末特征及化学成分上均有一定的差异。结论 可为生干漆及煅干漆的进一步开发利用提供理论依据。     

大学生人际敏感状况研究

本研究对15 290名大学新生的心理健康状况进行测量,并对其中204名大学生进行追踪研究,结果显示,大学生在人际敏感方面的心理症状较为突出,中等以上强度检出人数仅次于强迫症状,明显多于其他常见的心理症状。对在大学生中高发的人际敏感问题,应当引起高校心理健康教育工作者的重视,在心理咨询等个体帮助以外,寻求更为高效的团体心理疏导和思想政治教育等帮助模式。