2 种新型骨植入钛合金的细胞生物相容性研究

目的:研究国内2种新研制骨植入钛合金Ti1、Ti2对成骨细胞生物学行为的影响。方法:采用SD乳鼠体外原代分离培养的成骨细胞,将细胞分别接种于新型钛合金表面建立体外共同培养。采用MTT比色试验检测第3天成骨细胞的增殖百分率,采用扫描电镜(SEM)观察细胞形态学变化,并且对培养第5天时细胞碱性磷酸酶(ALP)功能活性进行检测。结果:成骨细胞在新合金表面增殖百分率、碱性磷酸酶活性检测值均高于对照组,细胞增殖百分率及碱性磷酸酶吸光度值与对照组间统计学分析无显著性差异(P>0.05)。扫描电镜观察细胞在新合金表面伸展状况良好、黏附牢固,并具有成骨细胞典型形态特征。结论:2种新型钛合金对成骨细胞学行为无不良影响。     

纳米氧化铝陶瓷对成骨细胞功能代谢影响的研究

目的 :比较纳米氧化铝 (nAl2 O3 )和常规氧化铝 (cAl2 O3 )对成骨细胞功能代谢方面影响。方法 :采用压制成型和无压烧结工艺制备nAl2 O3 和cAl2 O3 的块体材料 ,将体外原代分离培养成骨细胞分别接种于nAl2 O3 和cAl2 O3 的表面 ,分别在 7、14、2 1、2 8d时检测细胞内总蛋白、ALP活性及细胞基质钙含量。结果 :所制备的nAl2 O3 和cAl2 O3 的平均粒径分别为 60nm和 1.80 μm。 14、2 1和 2 8d时 ,nAl2 O3 表面附着的成骨细胞ALP活性和细胞基质钙含量均高于cAl2 O3 。结论 :与相应的cAl2 O3 比较 ,nAl2 O3 更能增强成骨细胞的功能及代谢活动     

成骨细胞中蛋白激酶A的作用

目的 研究蛋白激酶A在大鼠成骨细胞分化成骨过程中的作用。方法 纯化培养大鼠成骨细胞后，以cAMP,PKI,BMP-2,PKI-BMP-2(PKI预刺激1h后加BMP－2）共4种干预方式，分别作用细胞10，30，60min，及24h，通过MTT试验观察细胞增殖状况，并检测细胞内ALP活性，观察细胞的分化程度。结果 各种干预因素对细胞的增殖（MTT）无统计学上的显著影响。但是，BMP－2和c-AMP使细胞的ALP活性明显增高（P＜0．05）；PKI作用1h后，使ALP活性下降（P＜0．05）。BMP－2可以部分逆转PKI的抑制作用。结论 PKA参与大鼠成骨细胞功能的分化成熟。BMP－2可以减轻抑制PKA后引起的ALP活性的下降。     

胰岛素样生长因子Ⅱ对体外培养成骨细胞辐射效应的影响

目的：检测不同浓度胰岛素样生长因子Ⅱ(Insulin-like growth factorⅡ，IGF-Ⅱ)对电离辐射后成骨细胞增殖、功能和分化方面的影响，探讨不同剂量辐射后IGF-Ⅱ对成骨细胞的效应。方法：成骨细胞通过酶消化法从SD大鼠颅骨中获取传代；将第3代细胞分别进行0、100、400、600和900cGy的γ线辐射，辐射后的细胞在含有不同浓度IGF-Ⅱ的培养液中培养6d，观察及检测成骨细胞的增殖、功能及分化等情况。结果：经电离辐射后，细胞的增殖、碱性磷酸酶活性及骨钙素含量均受到抑制。IGF-Ⅱ可有效降低100cGy辐射对增殖的抑制效应，1，10，和100μg／L的IGF-Ⅱ都改变了400cGy时的辐射效应，其中以10μg／L的浓度时最明显。结论：IGF-Ⅱ能有效促进成骨细胞辐射损伤的恢复，而这种作用有浓度依赖性，并取决于辐射损伤的程度。     

染料木黄酮对成骨细胞增殖、分化和凋亡影响的实验研究

目的研究染料木黄酮对成骨细胞增殖、分化和凋亡的影响，以阐明其对骨形成的作用机制。方法酶消化和组织块相结合培养获得原代成骨细胞，并以成骨肉瘤细胞株UMR-106细胞作对照，加入不同浓度的染料木黄酮后，流式细胞仪和噻唑蓝比色法(MTT)检测成骨细胞细胞周期比例的改变以及凋亡情况；生化法检测细胞内碱性磷酸酶含量的改变。结果流式细胞分析和MT观测结果表明：染料木黄酮促进了原代成骨细胞由G0(G1)期向S期、G2期和M期的移行过渡，从而促进了原代成骨细胞的增殖。染料木黄酮对成骨肉瘤细胞株UMR-106细胞周期无影响，但可诱导UMR-106细胞凋亡。碱性磷酸酶检测结果表明：染料木黄酮可促进原代成骨细胞的分化。结论染料木黄酮可在一定程度上促进成骨细胞的增殖和分化，诱导成骨肉瘤细胞凋亡。     

成骨细胞在微弧氧化处理后纯钛表面的附着、增殖及ALP活性

目的 :对表面微弧氧化 (microarcoxidation ,MAO)处理后的纯钛材料进行成骨细胞生物相容性检测 ,评价改进的MAO工艺应用于钛植入材料表面处理的可能性。方法 :纯钛材料经过 2种MAO处理后 (MAO 1和MAO 2工艺 ) ,采用MC 3T3细胞系对不同时间点成骨细胞在材料表面的附着率、生长增殖情况以及ALP活性进行检测 ,以未经处理光滑纯钛表面作为对照 ,以SPSS对实验结果进行统计分析。结果 :早期 (0 .5h、1h)细胞附着率差异有统计学意义 ,MAO 1组 >MAO 2组 >纯钛组 ;2h后 ,MAO 1组与MAO 2组无差异 ,2组细胞附着率都显著高于纯钛组。细胞增殖及ALP活性测试中 ,MAO 1处理组在各时间点都显著高于另外 2组。结论 :MAO处理后的纯钛对成骨细胞的生物相容性优于未处理组 ,改进的MAO 1处理工艺较一般工艺可以更有效提高成骨细胞的早期粘附、增殖及ALP活性。     

组织工程化人形下颌骨髁状突的实验研究

目的　评价采用组织工程技术构建人下颌骨髁状突软骨复合组织的可行性。方法　以可降解生物材料聚羟基乙酸 (polyglycolicacid ,PGA) /聚乳酸 (polylacticacid ,PLA)预制人下颌骨髁状突模型 ,体外培养扩增牛骨膜成骨细胞和牛关节表面软骨。实验分 3组 :第 1组 ,模型内仅注入 1.5 %藻酸钙和 30 %氧化乙丙烯 ;第 2组 ,模型内分别注入成骨细胞和软骨细胞悬液 ,浓度为 5× 10 7/ml;第 3组 ,模型内接种成骨细胞藻酸钙悬液 ,同时在模型关节表面涂敷软骨细胞 PluronicF12 7悬液 ,浓度为 5× 10 7/ml。分别植入裸鼠皮下 ,12周后取材 ,作大体和组织学观察。结果　第 1组无骨和软骨形成 ,模型支架明显缩小 ,形态不规则 ;第 2组仅留残缺不全的组织结构 ,标本体积缩小变形 ;第 3组形态结构与原植入模型支架相同 ,组织学观察有骨和软骨组织结构 ,两者界面连接有序 ,骨组织内有大量新生骨板。结论　以人工合成生物材料预制人下颌骨髁状突支架 ,采用组织工程技术 ,可以在裸鼠体内构建具有骨软骨复合结构的正常形态的人形下颌骨髁状突 ,从而为进一步临床应用提供了理论依据     

两种纳米晶羟基磷灰石的细胞相容性比较

目的 比较两种不同形态纳米晶羟基磷灰石的细胞相容性。方法 采用化学湿法合成的两种纳米晶形态羟基磷灰石。采用原代培养的成骨细胞检测两者的细胞相容性。采用MTT法观察成骨细胞在几种材料表面3d后的增殖情况，细胞培养第5d时对碱性磷酸酶活性进行检测，并用SEM观察第3d时细胞在材料表面的附着形态。结果 成骨细胞在球形纳米晶羟基磷灰石表面的细胞增殖数显著高于同直径的棒状纳米晶羟基磷灰石，并具有更好的细胞伸展形态；而碱性磷酸酶表达没有明显差别。结论 羟基磷灰石球形纳米晶较棒状纳米晶更能促进成骨细胞生长。     

17β-雌二醇及补骨脂素对骨髓间充质细胞向成骨细胞分化的诱导作用

目的:观察17β-雌二醇对骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的诱导作用。方法:将大鼠的骨髓间充质干细胞(BMSCs)暴露于不同浓度的17β-雌二醇、补骨脂素增殖和成骨分化培养基。通过茜素红(Alizarin Red)染色法观察细胞增殖;通过酶联免疫吸附试验法(ELISA)和实时聚合酶链反应(PCR)评估成骨标志物Ⅰ型胶原的分泌水平以及关键因子RUNX2的表达情况。结果:与对照组比较,17β-雌二醇补充剂促进BMSCs增殖。BMSCs增殖添加的17β-雌二醇的不同剂量(0、0.001、0.01、0.1 nmol/L),有效地改善了骨髓间充质干细胞分泌Ⅰ型胶原的水平,RUNX2的mRNA也被上调。17β-雌二醇干预后第5天,Ⅰ型胶原表达显著升高(P<0.05),在17β-雌二醇干预的第7天,RUNX2 mRNA及蛋白表达随17β-雌二醇水平的增加而升高(P<0.05)。结论:17β-雌二醇联合补骨脂素可以作为一种有效的调节剂,以提高骨髓再生中MSC的能力。