金水宝胶囊生产过程中质量控制方法的建立

目的:完善金水宝胶囊生产过程中的质量控制体系,为该制剂的后续研究与应用提供实验依据。方法:采用高效液相色谱法(HPLC),Ultimate AQ-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),腺苷、鸟苷、尿苷含量测定的色谱条件为流动相甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)梯度洗脱(0~14 min,100%~99%B;14~19 min,99%~89%B;19~39 min,89%~85%B),流速0.4 m L·min^-1,柱温30℃,进样量10μL,检测波长260 nm。麦角甾醇含量测定的色谱条件为流动相甲醇-水(98∶2),流速1 m L·min^-1,柱温25℃,进样量10μL,检测波长283 nm。结果:发酵虫草菌粉不同生产阶段样品的指纹图谱中主要色谱峰差异性较小。腺苷、鸟苷、尿苷的线性关系良好(R2均>0.999);三者的加样回收率分别为106.06%,101.25%,105.88%,RSD均<3.0%。于2016-2018年各抽取的20批样品中腺苷、麦角甾醇的含量均符合2015年版《中国药典》的要求,鸟苷、尿苷的质量分别为0.97~1.36,0.67~1.38 mg/粒。结论:市面所售金水宝胶囊质量较为稳定。建立的方法可用于检测金水宝胶囊的质量,且操作简便、稳定可靠,可为发酵虫草菌粉类产品的检测提供参考。     

虫草素对舌癌TCA-8113细胞周期和凋亡的影响

目的:研究虫草素在体外对舌癌TCA-8113细胞周期和凋亡的影响;方法:以噻唑蓝法(MTT)测定虫草素对TCA-8113细胞增殖活性的影响;用流式细胞术测定虫草素对TCA-8113细胞周期的影响情况以及是否诱导TCA-8113发生凋亡作用;采用蛋白免疫印迹检测细胞周期相关蛋白和细胞凋亡相关蛋白的表达情况;结果:虫草素对TCA-8113细胞增殖活性的抑制作用具有浓度依赖性,能够引起TCA-8113细胞发生G2期细胞周期阻滞,并诱导TCA-8113细胞发生凋亡作用;Cyclin B1和Bcl-2表达减少,Cdc2和Bax表达量没用明显变化。结论:虫草素有效的引起TCA-8113发生细胞周期阻滞,诱导TCA-8113细胞凋亡,从而抑制TCA-8113细胞的增殖活性,为进一步应用于临床治疗舌癌等肿瘤疾病提供了依据。     

虫草素通过ERK1/2、Ezrin和Akt信号通路抑制胆囊癌细胞SNU-308的增殖和迁移

目的:探讨虫草素对胆囊癌细胞SNU-308增殖和迁移的影响及其分子机制。方法:MTT法和平板集落形成实验检测不同浓度虫草素对胆囊癌SNU-308细胞活力和集落形成能力的影响;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞凋亡和自噬相关蛋白以及Akt、ERK1/2和Ezrin蛋白的磷酸化水平;免疫荧光染色法检测细胞内LC3的表达水平;划痕愈合实验和Transwell实验检测虫草素对胆囊癌细胞迁移能力的影响;划痕实验检测Akt抑制剂和ERK1/2抑制剂及Ezrin基因沉默对细胞迁移能力的影响。结果:虫草素可显著抑制胆囊癌细胞的活力和集落形成能力(P0.05)。流式细胞术结果显示,虫草素可诱导胆囊癌细胞凋亡(P0.05)。Western blot结果显示,虫草素处理后Bcl-2表达降低,Bax、细胞色素C(Cyto C)、Fas、Fas L和cleaved caspase-3蛋白水平升高,自噬标识蛋白LC3-II/I比例和beclin 1表达上调(P0.05)。免疫荧光染色结果显示,虫草素处理后SNU-308细胞胞浆中LC3荧光颗粒的数量明显增多。划痕实验和Transwell实验结果显示虫草素可抑制细胞迁移(P0.05)。虫草素明显抑制Akt、ERK1/2和Ezrin蛋白的磷酸化水平(P0.05)。Ezrin基因沉默及Akti-1/2和GDC-0994均可抑制胆囊癌细胞的迁移作用(P0.05)。结论:虫草素通过诱导凋亡和自噬抑制胆囊癌细胞的增殖和迁移,其机制可能与调控ERK1/2,Ezrin和Akt信号通路有关。     

虫草素抑制哮喘大鼠支气管上皮细胞间充质转化

目的 考察虫草素(Cor)抑制哮喘大鼠上皮细胞间充质转化的作用机制。方法 将大鼠随机分为4组(n=10):对照组、模型(OVA)组、OVA+10 mg/kg Cor组、OVA+50 mg/kg Cor组。治疗7 d后,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中的细胞计数,苏木精-伊红(HE)染色评价气道炎性反应和气道重塑程度,Masson三色染色检测上皮胶原沉积。将人支气管上皮样细胞16HBE分为3组：对照组、TGF-β1组和TGF-β1+Cor组。免疫荧光染色检测细胞中c-Jun的表达。CCK-8法和Transwell小室法检测细胞的增殖和迁移。免疫组织化学染色或Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、α-SMA、vimentin、Smad3、p-Smad3、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达水平。结果 与对照组相比,OVA组的胶原纤维面积和细胞计数显著增加(P<0.05);与OVA组相比,OVA+10 mg/kg Cor组和OVA+50 mg/kg Cor组的胶原纤维面积和细胞计数均减少(P<0.05)。与对照组相比,OVA组的E-cadhe...     

“军七虫草胶囊”在维持性血液透析中的应用

目的：观察“军七虫草胶囊”治疗维持性血液透析（血透）患者的疗效。方法：分别测定２５例病情稳定的维持性血透患者服用“军七虫草胶囊”前和用药１周后血尿素氮（ＢＵＮ）、肌酐（Ｃｒ）及血Ｋ＋、体重的上升值和血Ｃａ２＋的下降值各３次，以及用药前和用药１个月后的血白蛋白、血红蛋白值各１次，并进行对比分析。结果：透析间期的血ＢＵＮ和Ｃｒ上升值用药前分别为１６．３±４．２ｍｍｏｌ／Ｌ和４４１．６±９２．０μｍｏｌ／Ｌ，用药后分别下降为１２．９±５．４ｍｍｏｌ／Ｌ和３５９．８±８９．５μｍｏｌ／Ｌ（Ｐ值均＜０．０５）；体重上升值由用药前的１．９０±０．５０ｋｇ下降为１．５０±０．３５ｋｇ（Ｐ＜０．０１），血白蛋白则由３０．７±４．５ｇ／Ｌ上升为３４．８±３．７ｇ／Ｌ（Ｐ＜０．０５），血Ｋ＋上升值和Ｃａ２＋下降值无明显变化。结论：“军七虫草胶囊”能使透析间期毒素上升水平减慢，明显改善透析患者的生存质量．且能使部分患者透析时间缩短，降低透析费用。     

人工虫草提取物Cs-4改善人体心肺功能及增强耐力的临床研究

目的:探究人工虫草提取物Cs-4对健康老年志愿者有氧能力的影响。方法:采用随机双旨安慰剂对照研究方法,30例健康老年志愿者被随机分配到Cs-4组(n=16)或者安慰剂组(n=14),服用Cs-4(3g／d)或安慰剂共6周。实验前后,在第0周和第6周,通过测定症状限制性的增量功率运动试验期间的最大氧摄取(VO2max)、最大通气率(VEmax)、代谢当量(METs)和气体交换无氧阈值(VO2θ),以及试验前及试验终止后:3min,从手臂静脉取静脉血测定血乳酸浓度,来评估有氧能力、运动能力以及体能。结果:6周治疗后,安慰剂组的各项指标无明显变化;Cs-4组的VO2max较服药前的基线水平平均提高了7.0％±3.5％(P=0.05),最大METs明显提高了8.29％±3.33％(P<0.05),VEmax明显提高了10.4％±4.5％(P<0.05),无氧阈(VO2θ)较6周前明显提高了12.6％±4.3％(P<0.05);血清乳酸水平无明显变化。结论:人工虫草提取物Cs-4能够增强老年健康人的有氧能力、运动能力和肺通气容量,从而有力地支持了中医关于冬虫夏草具有提高运动能力和抗疲劳作用的理论。