CCNE1基因在卵巢高级别浆液性癌中的研究进展

细胞周期蛋白E1（Cyclin E1,CCNE1）基因扩增是卵巢高级别浆液性癌（high-grade serous ovarian carcinoma,HGSOC）最常见的拷贝数变异之一,扩增率为20%左右。CCNE1基因扩增不仅参与HGSOC的早期癌前病变,促进恶性肿瘤的发生、发展,还可引起细胞周期紊乱和染色体不稳定,从而增加HGSOC的铂类耐药性和复发率,最终导致患者的化疗效果不佳和预后较差。为改善CCNE1扩增的HGSOC患者的预后和生活质量,在暂时没有CCNE1扩增的HGSOC的靶向治疗药物的情况下,使用细胞周期蛋白依赖性激酶2（cyclin-dependent kinases 2,CDK2）小分子抑制剂或者多腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly (ADP-ribose) polymerase,PARP]抑制剂与其他药物联合治疗,一定程度上能有效地抑制肿瘤细胞的增殖活性,促进肿瘤细胞死亡。因此,从CCNE1扩增对HGSOC的早期发病机制的影响和产生铂类耐药的角度上来说,CCNE1基因有望成为HGSOC的潜在治疗靶标和预后评价生物学指标,在改善患者的治疗和预后方面具有重要意义。     

Musashi1基因调控结肠癌HCT116细胞恶性生物学行为的机制研究

背景与目的：Musashi1（Msi1）属于RNA结合蛋白家族中的一员，是RNA转录后表达的关键调控者，其是否参与肿瘤的发生、发展，以及具体分子机制仍不十分清楚。探讨沉默Msi1基因对结肠癌HCT116细胞恶性生物学行为的影响及可能的机制。方法：采用慢病毒载体构建稳定低表达Msi1的细胞株，细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）实验检测细胞增殖能力，克隆形成实验检测细胞克隆形成能力，流式细胞术（flow cytometry，FCM）检测细胞周期的变化，裸鼠移植瘤模型观察沉默Msi1对裸鼠成瘤的影响。实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）和蛋白质印记法（Western blot）检测沉默Msi1基因后p27基因的mRNA表达和蛋白水平，双荧光素酶实验验证Msi1基因与目的基因p27 3’-非编码区（3’-untranslated region，3’-UTR）的相互作用。结果：沉默Msi1基因后，HCT116细胞的增殖能力显著下降，克隆集落数明显减少，G ₀ /G ₁ 期细胞增多，S期细胞明显减少，裸鼠移植瘤生长明显受到抑制。沉默Msi1基因后p27 mRNA表达未见明显变化，而p27蛋白水平明显上调，双荧光素酶实验证实Msi1基因能与p27 3’-UTR区域直接结合，抑制其翻译。结论：沉默Msi1基因通过靶向上调p27，导致结肠癌HCT116细胞G ₀ /G ₁ 期阻滞，从而抑制肿瘤细胞体内及体外增殖能力。     

Cyclin D1启动子在养精胶囊促进小鼠精原干细胞增殖中的作用※

目的 研究养精胶囊促进小鼠精原干细胞（SSCs）增殖的分子机制。方法 将不同浓度的养精胶囊提取物加入SSCs中培养48 h，CCK-8检测细胞的增殖活性，流式细胞仪检测细胞周期，荧光素酶报告基因检测Cyclin D1启动子的活性，qRT-PCR以及免疫荧光检测Cyclin D1的表达。之后进行阻断实验，在加入养精胶囊前预先加入siRNA-Cyclin D1，同样的方法检测细胞的增殖活性、细胞周期、Cyclin D1启动子的活性以及Cyclin D1的表达情况。结果 低、中、高浓度的养精胶囊可以促进SSCs的增殖，提高S期细胞的比例，增强Cyclin D1启动子的活性，促进Cyclin D1的表达。阻断Cyclin D1后，SSCs的增殖活性降低，S期细胞比例减少，Cyclin D1启动子的活性降低，Cyclin D1的表达减少。结论 养精胶囊通过增强Cyclin D1启动子的活性提高Cyclin D1的转录和翻译水平，进而促进SSCs增殖。     

RNA结合蛋白QKI-5对肾癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的:探讨RNA结合蛋白QKI-5在肾癌中的生物学功能。方法:应用以慢病毒为载体的过表达技术观察过表达QKI-5对肾癌细胞增殖作用的影响及对细胞周期的影响。结果:过表达QKI-5能够抑制肾癌细胞株786-O和A-498细胞的增殖能力、克隆形成能力；流式细胞术结果显示:过表达QKI-5使786-O和A-498细胞产生G1期阻滞，而这种阻滞与周期相关蛋白Cyclin D1表达降低及p21、p27表达增高有关。结论:QKI-5在肾癌中发挥着抑癌基因的功能，可以抑制肾癌细胞增殖，并使细胞周期阻滞在G1期。     

新加归肾丸通过调节mTOR信号通路促进体外培养大鼠卵巢颗粒细胞增殖

目的:观察补肾活血中药复方新加归肾丸对体外培养大鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响。方法:体外培养大鼠卵巢颗粒细胞,分为空白组,模型组,中药低、中、高剂量组共五组,空白组用1%胎牛血清培养基培养,其余四组滴加雷帕霉素,20 min后中药各组加入不同浓度的中药水提醇沉液。分别在培养24、48、72 h后采用流式细胞仪检测细胞周期各时相的变化,并计算细胞增殖指数(PI); 免疫印迹法检测磷酸化-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、细胞周期蛋白D₂(Cyclin D₂)的表达水平。结果:用药24、48、72 h 这3个时段,中药各组S期细胞比率、PI均高于模型组(P<0.05),其中中药中剂量组最为明显(P<0.05)。用药24、48、72 h这3个时段,中药各个剂量组p-mTOR、Cyclin D₂表达水平均高于模型组(P<0.05)。中药各个剂量中以中药中剂量组效果最明显(P<0.05)。结论:补肾活血中药复方新加归肾丸能通过激活mTOR信号通路活性,上调Cyclin D₂蛋白表达,促使颗粒细胞由G₁期向S期转化,加速卵巢颗粒细胞周期进程,促进颗粒细胞增殖来实现改善卵泡发育。     

miR-361-5p对肾细胞癌ACHN细胞恶性生物学行为的影响

目的：探讨miR-361-5p对肾细胞癌ACHN细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡及其细胞周期的影响。方法：将miR-361-5p mimics和miR-361-5p inhibitor分别转染至肾癌ACHN细胞中，用qPCR检测转染细胞中miR-361-5p的表达水平，用MTT法、划痕愈合实验、Transwell实验、流式细胞术分别检测细胞的增殖、迁移、侵袭、细胞周期和凋亡水平。结果：与空白对照组和 Mimics-NC组比较，miR-361-5p mimics组ACHN细胞中miR-361-5p表达水平显著升高（P<0.01），细胞的增殖、侵袭和迁移能力均显著减弱（均P<0.01），而凋亡率升高（P<0.01）。与空白对照组或Inhibitor-NC组比较，miR-361-5p inhibitor组细胞中miR-361-5p表达水平显著下降（P<0.01），细胞的增殖、侵袭和迁移能力均增强（均P<0.01），细胞周期运转加速（P<0.01），凋亡率降低（P<0.05）。结论：miR-361-5p可抑制肾癌ACHN细胞的增殖、侵袭和迁移，并诱导细胞凋亡，其在肾癌发生发展过程中发挥重要的抑制作用。