银杏外种皮提取物杀灭钉螺效果的研究

目的 　观察银杏外种皮石油醚提取物（主要成分为银杏酸，含量为64%）、槟榔碱及两药伍用杀灭钉螺效果及对斑马鱼急性毒性。 方法 取7～8螺层、活力强的钉螺，用银杏外种皮干粉、水提取物和石油醚提取物3种制剂以及银杏外种皮石油醚提取物与槟榔碱伍用，采用WHO“杀螺剂实验室终筛方法”中的浸泡法，进行浸杀钉螺试验、钉螺上爬试验以及斑马鱼急性毒性试验。 3项试验均以氯硝柳胺为对照。 结果 　银杏外种皮3种制剂随浸泡时间延长浸杀效果明显提高。 其中，石油醚提取物浸杀效果较好， 浸泡24 h LC₅₀和LC₉₀分别为0.65 mg/L和5.50 mg/L，48 h 分别为0.07 mg/L和0.85 mg/L； 72 h钉螺死亡率近100%。与槟榔碱伍用, 浸杀效果明显提高, 浸泡24 h 银杏外种皮石油醚提取物LC₅₀和LC₉₀分别为0.26 mg/L 和0.56 mg/L，较银杏外种皮石油醚提取物单药LC₅₀降低60%，LC₉₀降低90%(P值均<0.05)。2.50 mg/L银杏外种皮石油醚提取物24 h总上爬率为10%；两药伍用，其银杏外种皮石油醚提取物0.16 mg/L上爬率仅为8%，提高了其抑制钉螺上爬效果。1倍LC₉₀和2倍LC₉₀浓度的银杏外种皮石油醚提取物，斑马鱼存活时间分别为24 h和10 h；伍用后，24 h斑马鱼在2倍LC₉₀浓度中未见死亡，48 h内死亡率为50%，伍用对斑马鱼急性毒性较低。 结论 银杏外种皮石油醚提取物有较好的灭螺效果，是具有研究价值的灭螺植物。  

金钱松内生真菌杀螺活性菌株筛选

目的筛选出对钉螺具有致死作用的金钱松内生真菌菌株，并进行形态学初步鉴定。方法  从药用植物金钱松的18株内生真菌中，按照WHO的杀螺剂浸泡试验法观察不同内生真菌以及不同浓度发酵液杀螺效果，并采用玻片培养法进行真菌鉴定。结果JJ18菌株发酵液的中和液(pH=7)有较高的杀螺效果，24 h钉螺死亡率达26. 7%，48 h达76. 7%，72 h达100.O%。发酵液浓度为5%时，钉螺死亡率为53.3%；浓度为10%时，钉螺死亡率为86. 7%。其杀螺活性成分主要是发酵液的细胞外产物，且对鱼无急性毒性。通过鉴定该菌属于曲霉属。结论金钱松内生真菌JJ18细胞外产物具有一定的杀螺效果，可作为筛选新型杀螺药物的资源。  

去甲斑蝥素诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的探讨去甲斑蝥素（NCTD）对人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响。方法用MTT方法检测人肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制率。应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果 NCTD对人肝癌细胞SMMC-7721有生长抑制作用,随浓度升高、时间延长作用增强,呈剂量和时间效应关系。流式细胞仪示SMMC-7721细胞的S期细胞明显增多,G0/G1期细胞减少,凋亡率上升（P〈0.05或〈0.01）。结论 NCTD能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞的生长,其可能与抑制SMMC-7721细胞增殖,诱导细胞凋亡有关。  

病原生物学课程建设与教学改革的探索

病原生物学是一门以病原生物为研究对象的医学基础课程,也是知识更新和发展最为迅速的课程之一。在总结多年教学经验的基础上,根据各专业学生的培养目标和培养要求,结合本校实际情况,对不同专业学生的病原生物学课程的授课内容、教学模式、教学方法及教学手段进行了综合改革,并取得了一定的成效。  

采用实时PCR技术比较不同方法提纯

目的 比较不同方法提纯隐孢子虫卵囊DNA的效果。 方法 将分离纯化的隐孢子虫卵囊分别加入美国Promega公司（简称Promega）和上海捷瑞公司（简称捷瑞）基因组DNA纯化试剂盒的裂解液、2% Triton X-100和5% 异硫氰酸胍，同时联合使用冻融法、蛋白酶K法和声裂法裂解卵囊，用试剂盒法或Chelex-100法提纯卵囊基因组DNA，用实时PCR测定隐孢子虫卵囊囊壁蛋白（COWP）基因拷贝数，以Promega试剂盒为参照比较不同纯化方法的提纯效果。 结果 Promega试剂盒的裂解液裂解隐孢子虫卵囊的效果最好，纯化所得卵囊COWP基因拷贝数可达（6.45～9.86）×106；其他依次为捷瑞试剂盒的裂解液[（2.38～3.69）×106]、5%异硫氰酸胍[（1.27～21.29）×105]和2% Triton X-100[（2.06～866.70）×103]。冻融法+蛋白酶K法+声裂法提纯隐孢子虫卵囊DNA效果最佳，其次为冻融法+声裂法和蛋白酶K法+声裂法，冻融法+蛋白酶K法效果最差。 结论 冻融法+蛋白酶K法+声裂法联合使用能使卵囊DNA的提纯效率达到最大，捷瑞基因组DNA纯化试剂盒和5%异硫氰酸胍裂解法提纯隐孢子虫卵囊DNA可获得与Promega试剂盒相近的效果。  

牛源隐孢子虫上海分离株的巢式PCR鉴定

目的 用巢式PCR鉴定1株自然感染的上海牛源隐孢子虫。 方法 改良抗酸染色法检查含隐孢子虫卵囊的牛粪，油镜下观察卵囊形态，测量大小。以牛粪中的隐孢子虫卵囊DNA为模板，根据隐孢子虫18S rRNA序列设计2对引物，巢式PCR扩增目的片段，测序，同源性比对，并运用MEGA4.0软件构建系统发育树。 结果 上海牛源隐孢子虫分离株卵囊呈圆形或椭圆形，大小为（5.6±0.49）mm×（5.2±0.51）mm。扩增出的18S rRNA基因片段为812 bp。上海牛源隐孢子虫分离株的18S rRNA与巴西的牛隐孢子虫（Cryptospridium bovis，GenＢank登录号为151935628）序列一致性为100%，两者在种系发育树上为同一分支，亲缘关系最近；与中国青海、蒙古国、美国、突尼斯等地的牛隐孢子虫序列一致性均为99%。 结论 上海牛源隐孢子虫分离株为牛隐孢子虫（C. bovis）。  

刚地弓形虫RH株速殖子在HeLa细胞系体外培养的实验观察

目的 建立稳定高效的刚地弓形虫RH株速殖子(以下简称弓形虫速殖子)体外培养模型。 方法 ①将HeLa细胞（1×10⁴个）接种置于细胞培养皿内底部的盖玻片，12 h后将纯化的弓形虫速殖子接种于细胞培养皿（1×10⁴个/皿），继续培养0.5～96 h，观察弓形虫速殖子在HeLa细胞内增殖情况；②将纯化的弓形虫速殖子接种于HeLa细胞后分为2组，一组于37 ℃分别培养24～120 h后，移入25 ℃培养120 h；另组于37 ℃培养48 h后，移入25 ℃分别培养72～168 h，观察不同温度和时间对弓形虫速殖子产率和活虫率的影响；③当培养的HeLa细胞80%发生细胞融合时更换速殖子培养液，同上法12 h后接种纯化的弓形虫速殖子进行培养，当80% HeLa细胞被感染增殖的弓形虫速殖子涨破时，收集、计数弓形虫速殖子，并用其感染（3×10⁶个/瓶）新的HeLa细胞，观察其连续传代情况；④每隔5代取弓形虫速殖子，腹腔接种昆明小鼠（3×10⁶个/只），观察小鼠存活时间、评价该体外培养条件对弓形虫速殖子毒力的影响。 结果 接种弓形虫速殖子96 h后HeLa细胞均被感染及涨破，培养弓形虫速殖子30代（3～4 d为1代）增殖稳定，每代获得弓形虫速殖子1×10⁷～5×10⁷个，增殖5～20倍。各代弓形虫速殖子对昆明小鼠的平均致死时间为5.80～6.40 d, 毒力未见减弱(P>0.05)。HeLa细胞接种弓形虫速殖子，于37 ℃培养72 h后，移至25 ℃培养120 h，其产率高达40倍以上，活虫率为90%以上，仅残留极少量Hela细胞。 结论 刚地弓形虫RH株速殖子可在HeLa细胞中增殖并长期稳定传代。  

垂序商陆叶灭螺活性及其毒性的初步研究

目的探讨垂序商陆叶杀灭钉螺效果、对钉螺糖原的影响及其对斑马鱼的急性毒性。方法用系统分离法分离垂序商陆叶的各极性部位,采用WHO推荐的＂杀螺剂实验室终筛法＂中的浸泡法进行浸杀灭螺试验,筛选垂序商陆叶的灭螺活性部位;用蒽酮比色法测定灭螺活性部位对钉螺糖原的影响;测定垂序商陆叶极性部位对斑马鱼的急性毒性。结果垂序商陆叶灭螺活性部位集中在乙酸乙酯极性部位,对钉螺48hLC50和LC90值分别为6.0mg/100ml和26.1mg/100ml;垂序商陆叶乙酸乙酯极性部位可使钉螺糖原含量降低20%;在近LC50浓度（48h）的垂序商陆叶乙酸乙酯极性部位作用下,斑马鱼可存活12h。结论垂序商陆叶乙酸乙酯极性部位有较好的灭螺效果,但对斑马鱼有较强的急性毒性。  

Cocultivation of umbilical cord blood CD34^＋ cells with retro-transduced hMSCs leads to effective amplification of long-term culture-initiating cells

AIM:To establish a novel coculture system for ex vivoexpansion of umbilical cord blood(UCB)hematopoieticprogenitors using thrombopoietin(TPO)/Flt-3 ligand(FL)-transduced human marrow-derived mesenchymalstem cells(tfhMSCs)as feeder.METHODS:UCB CD34~ cells were isolated and culturedusing four culture systems in serum-containing or serum-free medium.Suitable aliquots of cultured cells wereused to monitor cell production,clonogenic activity,and long-term culture-initiating culture(LTC-IC)output.Finally,the severe-combined immunodeficient(SCID)mouse-repopulating cell(SRC)assay was performed toconfirm ability of the cultured cells to reconstitute long-term hematopoiesis.RESULTS:There were no significant differences in thenumber of total nucleated cells among different culturesystems in serum-containing medium during 21-dculture.However,on d 14,the outputs of CD34~ cells,CFU-C and CFU-GEMM in ffhMSCs coculture system weresignificantly enhanced.LTC-IC assay demonstrated thatthe tfhMSCs coculture system had the most powerfulactivity.The severe-combined immunodeficient(SCID)mouse repopulating cell(SRC)assay confirmed extensiveability of the expanded cells to reconstitute long-termhematopoiesis.Furthermore,PCR analysis demonstratedthe presence of human hematopoietic cells in the bonemarrow and peripheral blood cells of NOD/SCID mice. CONCLUSION:The TPO/FL-transduced hMSCs,incombination with additive cytokines,can effectivelyexpand hematopoietic progenitors from UCB in vitro andthe tfhMSCs coculture system may be a suitable systemfor ex vivo manipulation of primitive progenitor cellsunder contact culture conditions.  

Localization and translocation of RhoA protein in the human gastric cancer cell line SGC-7901

AIM： To elucidate the localization of RhoA in gastric SGC-7901 cancer cells and its translocation by lysophosphatidic acid （LPA） and/or 8-chlorophenylthio- cAMP （CPT-cAMP）.
METHODS： Immunofluorescence microscopy was used to determine the localization of RhoA. Western blotting was used to detect both endogenous and exogenous RhoA in different cellular compartments （membrane, cytosol, nucleus） and the translocation of RhoA following treatment with LPA, CPT-cAMP, or CPT-cAMP ＋ LPA.
RESULTS： Immunofluorescence staining revealed endogenous RhoA to be localized in the membrane, the cytosol, and the nucleus, and its precise localization within the nucleus to be the nucleolus. Western blotting identified both endogenous and exogenous RhoA within different cellular compartments （membrane, oltosol, nucleus, nucleolus）. After stimulation with LPA, the amount of RhoA within membrane and nuclear extracts increased, while it decreased in the cytosol fractions. After treatment with CPT-cAMP the amount of RhoA within the membrane and the nuclear extracts decreased, while it increased within the cytosol fraction. Treatment with a combination of both substances led to a decrease in RhoA in the membrane and the nucleus but to an increase in the cytosol.
CONCLUSION： In SGC-7901 cells RhoA was found to be localized within the membrane, the cytosol, and the nucleus. Within the nucleus its precise localization could be demonstrated to be the nucleolus. Stimulation with LPA caused a translocation of RhoA from the cytosol towards the membrane and the nucleus; treatment with CPT-cAMP caused the opposite effect. Furthermore, pre-treatment with CPT-cAMP was found to block the effect of LPA.