人IgE重链3-4区蛋白的表达、纯化及功能分析

目的通过基因重组的方法表达IgECε3-Cε4区,鉴定重组蛋白与天然细胞表面受体FcεRⅠ之间的相互作用．并用重组蛋白免疫小鼠制备血清。方法用RT—PCR方法从过敏性疾病病人外周血淋巴细胞调取IgECε3-Cε4cDNA片段,克隆至pET28a（＋）构建原核表达载体IgECε3-Cε4-pET28a（＋）,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）,诱导表达IgECε3-Cε4区蛋白,通过Ni-NTA亲和层析纯化融合蛋白后,用免疫荧光方法鉴定重组蛋白与天然细胞表面受体FcεRⅠ之间的结合能力,并用UniCAP100全自动分析检测仪对重组抗原进行定量检测与鉴定：用表达蛋白免疫BALB／c小鼠,制备抗鼠血清,用Western—blot法对多克隆抗体进行鉴定。结果成功调取的人IgECε3-Cε4区基因与已报道的序列相一致;获得的IgECε3-Cε4区蛋白相对分子质量（Mr）同预期的结果相一致;IgECε3-Cε4能特异性结合人嗜碱性粒细胞表面的FcεRⅠ受体;通过UniCAP 100全自动分析检测仪能够检测到重组抗原并精确到国际单位;免疫鼠血清多抗能特异性结合天然人血清IgE。结论成功构建了IgECε3-Cε4-pET28a（＋）表达载体,获得了能被人嗜碱性粒细胞表面的FcεRⅠα亚基特异性识别的IgECε3-Cε4区蛋白．并用天然人血清IgE鉴定了多克隆抗体,为下一步单克隆抗体的制备打下了基础。     

羊布鲁杆菌M5-90 BP26抗原单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备高亲和性的羊布鲁杆菌M5-90 BP26抗原单克隆抗体,并对抗体进行鉴定.方法 将质粒pET-28a-BP26转化感受态大肠埃希菌(E.coli)BL21 (DE3),构建原核表达质粒pET-28a-BP26,用镍离子金属螯合亲和层析法(Ni-NTA)纯化、重组BP26蛋白(rBP26).将纯化后的rBP26蛋白与弗氏完全佐剂等体积混合成乳化抗原,接每只100 μg/0.1 ml在BALB/c小鼠皮下多点注射进行初次免疫;2周后,按每只50μg/0.1ml 在小鼠皮下多点注射进行再次免疫.再次免疫后2周,小鼠尾静脉取血测效价,检测免疫效果;在细胞融合前3天,将乳化抗原按每只小鼠50μg腹腔注射加强免疫.将小鼠骨髓瘤SP2/0细胞与脾细胞按1∶5比例在聚乙二醇( PEG) 1450作用下进行细胞融合,置于37℃、5％CO2培养箱中培养;10 d后取细胞培养上清液,用间接酶联免疫吸附法(ELISA)测定,筛选分泌抗rBP26抗体的杂交瘤细胞;再经过反复3次克隆,筛选出单克隆全阳性的杂交瘤细胞建株,用杂交瘤细胞株制备BP26抗原单克隆抗体,并以初始杂交瘤细胞克隆导命名.利用羊布鲁杆菌M5 -90疫苗株制备膜蛋白提取物(NMP),采用免疫印迹法(Western)及斑点间接酶联免疫吸附法(Dot-ELISA)对筛选的单克隆抗体进行免疫学特性鉴定,用单克隆抗体亚型试剂盒进行抗体分型和Kappa (κ)和Lambda(λ)轻链鉴定.结果 成功地获得2株能稳定分泌抗rBP26抗原的高亲和性杂交瘤3C3和5A5单克隆抗体,并能与羊布鲁杆菌M5-90疫苗株上的NMP结合,构建成M5-90 BP26抗原单克隆抗体,抗体亚型分别为IgG1和IgG2b,轻链均为κ链.结论 鉴定结果表明,成功制备2株羊布鲁杆菌BP26抗原的高亲和性单克隆抗体,抗体具有识别M5-90疫苗株的膜蛋白构象表位的能力,优势表位的识别可为羊布鲁杆菌M5-90疫苗株的改造提供实验依据.     

琼脂糖/聚苯乙烯磺酸微囊化胰β细胞株MIN6体外胰岛素释放反应的研究

本研究应用琼脂糖/聚苯乙烯磺酸(PSSa)微囊化胰β细胞株MIN6作为一种新型人工生物胰岛,采用静态培养胰岛素释放试验和灌流实验,探讨其在体外糖刺激时胰岛素的释放反应.静态培养胰岛素释放试验结果显示,低糖浓度(3.3mmol/L)时胰岛素的分泌释放量为8.824±0.698μU/(100microbeads·h);高糖浓度(16.7mmol/L)刺激时胰岛素的分泌释放量为28.045±4167μU/(100microbeads·h),约为低糖浓度时的3.2倍,有显著性差异(P<0.05).灌流实验结果显示,用16.7mmol/L糖浓度刺激,胰岛素的释放量逐渐增加,约在高糖刺激后50分钟时胰岛素的释放量达到高峰,约为38.66μU/(100microbeads·h);将糖浓度改变为3.3mmol/L,胰岛素的释放量逐渐下降.实验结果表明,琼脂糖/聚苯乙烯磺酸免疫隔离膜微囊化胰β细胞株MIN6作为一种新型人工生物胰岛,具有良好的糖刺激胰岛素释放反应,为进一步进行实验及临床移植的深入研究提供了基本的实验依据.     

日本对胃切除术后胆石形成的研究近况

胃切除术后胆囊及胆管的功能异常和形态变化早就引起了人们的关注。1947年Majoor等最先报告胃切除术后胆囊结石，1952年Johnson等认为其与切断迷走神经有关。但目前对胃切除术后胆石形成这一病理改变尚无系统的探讨，对其病因的研究及胆道运动功能的评价尚有许多不明之处，而其治疗上也发生了一些变化，预防上还存在许多问题。一、发生频度与发生时间胃切除术后胆石形成包括胃切除术后胆囊结石、胆总管结石和肝内胆管结石，目前尚无统一名称，有人称胃切除术后胆石症、胃切除术后综合征等。近年来，随着对胃切除术后生活质量要求的不断提高…     

一种新型疫苗递送系统——GEM微球

目的 介绍一种新型疫苗递送系统"GEM微球",可用于制备诱发机体同时产生局部黏膜免疫和系统免疫的多价疫苗.方法 利用乳酸菌制备GEM微球,获得融合了蛋白锚定结构(PA)的抗原或多肽等免疫原,二者结合后直接运载至黏膜作用于靶点,进而发挥诱导机体免疫应答的疫苗作用.结果 与PA融合表达的蛋白,可高载量与革兰氏阳性菌递送系统"GEM微球"结合,制备多价疫苗. 结论本文提供的构建"GEM微球疫苗"的相关实验技术,即GEM新型的疫苗递送系统,可为对迄今无安全有效疫苗的布鲁氏菌病的免疫防护和治疗提供有价值的依据.     

布鲁氏菌AP-PCR最优反应体系的建立

目的建立布鲁氏菌的随机扩增DNA多态性的优化反应体系，用于布鲁氏菌分子流行病学研究。方法利用几种随机引物及其组合(Pl、P2、P3、P4、P5、OPLO4、P3／5、P4／5)进行随机引物PCR的反应(AP—PCR，又称RAPD)，及重复片断引物ERICIR／ERIC2的随机扩增多态性；另外针对优选引物P5和OPLO4，分别对Mg^2 浓度、dNTPs浓度、模板DNA浓度、引物的浓度及扩增过程中的退火温度等影响反应结果的因素，进行了一系列优化组合方案的试验及系统分析。结果引物Ps、OPLO4和引物组合P4，5可以得到布鲁氏菌的高分辨率的分型带谱，并建立相应的优化反应体系。结论在严格的优化反应条件下。建立简单、快捷、灵敏度高的RAPD方法，用于布鲁氏菌的DNA多态性研究，为布鲁氏菌分子流行病学的深入研究提供资料。     

琼脂糖胶/聚苯乙烯磺酸微囊化胰B细胞株MIN6作为人工生物胰的实验研究

应用琼脂糖胶／聚苯乙烯磺酸微囊化胰B细胞林MIN6作为人工生物胰进行大鼠皮下异种移植。结果表明，在不应用任何免疫抑制剂的情况下，大鼠皮下异种移植一周后，重新取出的微囊仍保持光滑完整的球状，其内MIN6细胞仍清晰可见，囊周无明显纤维化及粘着。胰岛素释放试验结果显示，低糖浓度刺激时胰岛素的释放量为19．20±1．35μU·10microbead－1／h；高糖浓度刺激时胰岛素的释放量达到51．47±3．80μU·100microbeads-1／h，约为低糖浓度时的2．7倍，与低糖浓度时比较其差异有高度显著性（P＜0．001）。提示琼脂糖胶／聚苯乙烯磺酸微囊化胰B细胞林MIN6作为人工生物胰，既能保护移植物膜B细胞株MIN6免受排斥反应，也能维护膝B细胞株MIN6对糖刺激的有效的胰岛素分泌反应性。     

2006-2020年苏州市相城区水痘流行病学特征分析

目的 了解苏州市相城区水痘流行病学特征,为制定水痘免疫预防策略提供依据.方法 采用描述性流行病学方法对相城区2006-2020年水痘报告病例进行统计分析.结果 2006-2020年,相城区共报告水痘病例8 063例,年均报告发病率72.49/10万,不同年份发病率差异有统计学意义(x2=1 348.90,P＜0.05).发病呈明显季节性,主高峰在10月一次年1月(占60.16％),次高峰为5-7月(占22.54％).各街道(镇)均有病例报告,报告发病率最高为黄埭镇(138.38/10万);男女比为1.09∶1;4～＜7岁组报告发病率最高(618.22/10万),不同年龄组差异有统计学意义(x2=41 264.00,P＜0.05);职业以学生(3 303例,占40.96％)和幼托儿童(2 668例,占33.09％)为主.共报告水痘暴发疫情30起,主要发生在幼儿园(7起)和小学(22起).2006-2020年共报告1～＜8岁病例3 967例,其中有水痘疫苗免疫史1 360例,占34.28％,接种疫苗至发病间隔为(47.03±20.94)个月.结论 相城区水痘报告发病率较高,应持续加强水痘疫苗2剂次接种策略.     

布鲁菌脉冲场凝胶电泳图谱分型研究

我们挑选国内不同年分、不同地点分离的95株布鲁菌（包括19株标准菌株），进行脉冲场凝胶电泳图谱分型的分析研究。     

盆腔静脉石的X线认识( 附296例报告）

盆腔静脉石虽是盆腔内常见的无病理意义的致密阴影，但对有泌尿系症状的患者常须与输尿管结石鉴别，因此有必要对其X线影像有一定认识，本刊综合了北京医学院附属三院等四个医院经腹部平片，静脉肾盂造影，逆行肾盂造影及手术证实的静脉石296例（共550枚），将其临床X线所见综合如下。