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目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的KNDC1并观察其抗衰老能力。方法通过在线软件设计靶向于KNDC1外显子1、2、3的5个sgRNAs,并将其构建到CRISPR/Cas9载体中;经测序确认序列正确后,将重组质粒转染HeLa细胞和HUVECs,48 h后用real-time PCR和Western blot分别检测KNDC1 mRNA和蛋白表达水平;用SA-β-gal染色检测细胞衰老情况;用2, 7-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针检测细胞内活性氧水平。结果测序结果显示,设计的5个sgRNAs全部插入到了CRISPR/Cas9载体中,序列正确,构建成功。将5个重组质粒转染到HeLa细胞后发现第4和5号载体敲除效率较高,接下来将4和5号重组质粒转染到HUVECs中,发现与转染对照质粒相比,转染了4和5号重组质粒的HUVECs KNDC1 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P0.05),衰老HUVECs数量和细胞内活性氧水平明显减少。结论利用CRISPR/Cas9技术能有效敲除HUVECs的KNDC1,敲除KNDC1的HUVECs具有抗衰老能力。  相似文献   
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孙一奎在其著作《赤水玄珠》《孙氏医案》中论述了肠风的病因病机及诊治经验。孙氏认为肠风之病因病机主要为热窜血络,肠络受损;胃寒肠热,肠腑燥实;肝脾不调,外风引动。用药特点总以凉血为本,佐以清热;寒凉之中,佐以辛味;病久用温,酒制升提,并独具特色的丸剂新用,以护胃气;明辨病机,对"证"设药。这些临床经验为后世治疗肠风提供了更加全面的指导,具有现实的临床意义。  相似文献   
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孙一奎在其著作《赤水玄珠》《孙氏医案》中论述了肠风的病因病机及诊治经验。孙氏认为肠风之病因病机主要为热窜血络,肠络受损;胃寒肠热,肠腑燥实;肝脾不调,外风引动。用药特点总以凉血为本,佐以清热;寒凉之中,佐以辛味;病久用温,酒制升提,并独具特色的丸剂新用,以护胃气;明辨病机,对"证"设药。这些临床经验为后世治疗肠风提供了更加全面的指导,具有现实的临床意义。  相似文献   
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支链氨基酸对糖脂代谢、蛋白质合成和寿命等具有重要的调节作用。许多研究报道了循环支链氨基酸水平或饮食摄入支链氨基酸与寿命、骨骼肌减少症、肥胖及糖尿病等疾病息息相关。其中,在不同动物模型中支链氨基酸与寿命之间往往存在相反的作用效果。本文综述了支链氨基酸的生物学特征及其在寿命调控中两种相反的作用及机制,以期为支链氨基酸对衰老的干预研究提供崭新的思路及合理的依据。  相似文献   
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