HGF非融合蛋白真核表达载体的构建及其在骨骼肌细胞中的表达

目的构建以HGF为目的基因、以EGFP为报告基因的非融合蛋白真核表达载体pCMV-HGF-IRES-EGFP,并观察HGF基因在原代培养的大鼠骨骼肌细胞中的表达。方法利用BamHI单酶切质粒pcDNA3-HGF,得到HGF基因片段,将其正向插入到真核表达载体pCMV-IRES-EGFP的CMV后方BamHI的单克隆位点。脂质体介导转染至原代培养的大鼠骨骼肌细胞,在荧光显微镜下观察EGFP的表达,并用ELISA法检测HGF的表达情况。结果构建了HGF的非融合蛋白真核表达载体pCMV-HGF-IRES-EGFP,转染原代培养的大鼠骨骼肌细胞24~72h后,见30%的细胞表达EGFP。ELISA检测细胞培养液证实转染后第1天即有HGF的表达,第4天HGF浓度为(5402.0±227.9)ng/L。结论成功构建了非融合蛋白真核表达载体pCMV-HGF-IRES-EGFP,其在原代培养的大鼠骨骼肌细胞中能有效表达。     

TNF相关的凋亡诱导配体及其在肿瘤治疗中的研究现状

TNF相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-induc-ingligand,TRAIL)或Apo-2L,属于TNF超家族,是一个Ⅱ型跨膜蛋白,它在调节肿瘤发生与凋亡、自然免疫、病毒感染和机体的自稳机制中有重要意义,被认为是一个极具潜力的TNF家族凋亡诱发因子。一、TRAIL的结构及其抗肿瘤的生理作用TRAIL基因编码281个氨基酸,其cDNA长约2 kb,分子质量32.5 ku,N端15~40氨基酸为疏水区域并形成跨膜结构,目前认为N端没有明显的信号序列。胞内区只有17个氨基酸。与受体结合的胞外区为C端的114~281位氨基酸,为TRAIL的活性部分,有一个N-糖基化位点…     

腹腔镜胆囊切除术在老年患者中的应用

随着腹腔镜技术的成熟与发展以及临床经验的积累,腹腔镜胆囊切除术(LC)已成为胆囊良性疾病外科治疗的“金标准“.但是,由于LC的特殊性,对于并存心血管系统疾病、糖尿病、慢性支气管炎等疾病的老年患者,仍有一定的风险.我院于2000年12月～2002年12月对92例70岁以上老年胆囊炎患者实施开腹胆囊切除术(OC),2003年1月～2004年1月对90例70岁以上老年胆囊炎患者实施LC,并进行临床对比分析,报告如下.……     

血栓性浅静脉炎的综合治疗73例

血栓性浅静脉炎(superficial vein thrombophlebitis,SVT)是一种常见的血管病,下肢多发,躯体其他部位也可发生,多与静脉曲张伴发,11％的浅静脉血栓可蔓延至深静脉引起深静脉血栓,甚至发生肺动脉栓塞.治疗主要为抗无菌性炎症和抗凝治疗[1-4].天津医科大学第二医院自2007年7月至2009年7月收治SVT患者73例,现报道如下.     

非喉源性声带麻痹90例病因分析

<正>声带麻痹临床常见。除了喉部疾病,喉外因素引起声带麻痹(非喉源性声带麻痹)较常见,且病因复杂。本文总结分析笔者所在科2002-03～2006-12诊治的90例非喉源性声带麻痹患者的临床资料,以探讨声带麻痹的病因。     

乳腺囊性增生病与乳腺癌

乳腺囊性增生过去曾有许多名称,2003年WHO乳腺肿瘤组织学新分类取消了这些病名,采用各种病变单独命名的方案。本文从不同角度阐述了乳腺囊性增生与乳腺癌的关系,而目前临床上仍在使用乳腺囊性增生一词。     

益气养阴活血方治疗糖尿病周围神经病变的临床观察

为观察益气养阴活血方对糖尿病周围神经病变（DPN）的临床疗效。28例糖尿病周围神经病变患者,用益气养阴活血方治疗3周,观察治疗前后症状以及神经电生理变化。结果：治疗后肢端疼痛、麻木、无力改善率分别达80.9%、73.3%、76.0%,感觉神经传导速率增快,与治疗前比较,有显著差异（P＜0.05）。提示益气养阴活血方能改善糖尿病周围神经病变的临床症状,增快神经传导速度。     

大鼠血管平滑肌细胞中bFGF及其受体FGFR-1的基因表达

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及其受体FGFR-1在大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)的表达情况。方法：建立大鼠血管平滑肌细胞原代培养并鉴定；使用原位杂交检测VSMCs中bFGF及其受体FGFR-1的mRNA表达；用免疫组织化学和Western Blot技术鉴定bFGF蛋白表达情况。结果：通过光镜和免疫组织化学技术从细胞形态和结构上使VSMCs得到鉴定；原位杂交证实大鼠VSMCs表达bFGF及其受体FGFR-1的mRNA；免疫组织化学表明VSMCs的胞核和胞浆中有bFGF蛋白表达，Western Blot显示bFGF有18KDa、22KDa、22．5KDa3种异构体形式。结论：大鼠血管平滑肌细胞表达bFGF及其受体FGFR-1 mRNA，bFGF有多种异构体形式并分布在VSMCs的胞核和胞浆中。     

肝门部胆管癌的外科治疗

肝门部胆管癌切除率很低,作者在1991年前收治17例中仅切除1例,切除率5.9%。此后,采用了附加肝叶的扩大切除,9例病人切除4例,切除率为44.4%,较前明显提高。本组无围术期死亡,存活期明显延长。作者强调B超在诊断上的重要作用。对梗阻性黄疸鉴别诊断时要充分考虑该病的可能性。主张早期手术,认为术前PTBD弊多利少。作者改进了胆肠吻合的缝合方法,避免了吻合口胆漏,同时指出提高切除率的另一关键是施术者的决心和经验。应多争取一期切除。