内皮祖细胞分泌SDF-1及其抗内皮祖细胞凋亡作用

目的探讨内皮祖细胞（EPC）能否分泌基质细胞衍生因子-1（SDF-1）,及SDF-1能否抑制紫杉醇、AMD3100（特异性阻断SDF-1与其受体CXCR4结合）等诱导的EPC凋亡。方法取不同时间段的EPC培养液上清,采用ELISA检测上清中SDF-1a浓度。用不同浓度的紫杉醇、AMD3100及无血清培养诱导EPC凋亡;或在上述基础上加不同浓度的SDF-1a处理;48 h后采用TUNEL法和流式细胞仪检测各组EPC凋亡率。结果EPC培养液上清中SDF-1a浓度显著高于对照组（P<0.01）。紫杉醇、AMD3100和无血清培养一样,均可显著增高EPC凋亡率（P<0.01）;加入外源性SDF-1a可显著降低紫杉醇组、无血清培养组EPC凋亡率（P<0.01）,却不能降低AMD3100组EPC凋亡率。结论体外培养的EPC可分泌SDF-1a,采用AMD3100阻断其作用可诱导EPC凋亡;SDF-1a可对抗紫杉醇和无血清培养诱导的EPC凋亡,但对AMD3100诱导的凋亡无效。     

血友病甲致新生儿颅内出血2例

1 病例报告 例1:男,20日龄.因阵发性哭闹1 d,于1999年急诊入院,G1P1,足月顺产,纯母乳喂养,生后一般情况良好.查体:发育及营养较好,反应较差,轻度贫血貌,皮肤粘膜未见出血点及淤血斑.前囟门饱满,张力较高,颈部有抗感,余查体无异常发现.腰穿脑脊液呈血性,压力较高.血常规:Hb9 g/L,WBC 9.8×109/L,N0.63,临床诊断为晚发性维生素K 缺乏症并颅内出血,失血性贫血.给予对症处理,静注各种止血药,但病情不见好转,仍有针刺部位出血不止,给予输注鲜血后病情好转,住院12 d痊愈出院.于2002年患儿因睾丸肿块手术治疗.术后仍出血不止,曾两次因手术室重新缝合而出血不止,输注鲜血后出血停止.肿块病理报告为极化组织.住院2周痊愈出院.于2001-02患儿因踝关节肿胀及皮下淤血,再次来院就诊.诊断为血友病甲,查血第8因子重度缺乏,于入院后第2天突然抽风昏迷,抢救无效死亡.     

SDF-1对小鼠骨髓源性内皮祖细胞数量及功能的影响

目的:观察基质细胞衍生因子-1(SDF-1)对体外培养的小鼠骨髓源性内皮祖细胞(EPC s)数量及功能的影响。方法:以密度梯度离心法获取小鼠骨髓单个核细胞(M NC s),由BS-1和D iI-acLDL荧光双染鉴定。加入不同浓度SDF-1 a培养48 h,然后分别采用M TT法、改良的Boyden小室和粘附能力测定来观察EPC s的增殖、迁移和粘附能力;采用血清饥饿法和紫杉醇诱导EPC s凋亡,TUNEL法和流式细胞仪检测SDF-1a对EPC s凋亡率的影响。结果:SDF-1a剂量依赖性增加EPC s数量(P<0.01),并显著改善了EPC s的粘附、迁移和增殖能力(P<0.01),显著降低EPC s凋亡率(P<0.01)。结论:SDF-1a可增加小鼠骨髓源性EPC s的数量并改善EPC s功能。     

基质细胞衍生因子1α介导小鼠内皮祖细胞修复损伤血管内膜

目的探讨损伤血管局部表达的基质细胞衍生因子1α是否能介导内皮祖细胞参与损伤血管的再内皮化,抑制新生内膜的增生。方法培养、获取小鼠骨髓源性内皮祖细胞,采用改良的Boyden小室测定基质细胞衍生因子1α诱导的内皮祖细胞迁移及AMD3100(CXCR4的拮抗剂)对其的影响。分别将内皮祖细胞培养基、内皮祖细胞及AMD3100孵育过的内皮祖细胞经心脏穿刺注射给颈动脉损伤小鼠,在14天后取损伤血管检测内皮祖细胞募集情况、再内皮化情况及新生内膜增生情况。结果基质细胞衍生因子1α能诱导内皮祖细胞迁移(与对照组比较P<0.01),AMD3100能有效阻断该作用(AMD3100组与对照组比较P>0.05)。较多注射的内皮祖细胞成功归巢到损伤血管处(14.2±3.6个/切片),AMD3100孵育过的内皮祖细胞仅少量可成功归巢(4.0±2.5个/切片);内皮祖细胞注射能加速损伤血管的再内皮化(内皮祖细胞移植组比对照组:83.45%±5.44%比66.46%±6.16%,P<0.01),AMD3100孵育过的内皮祖细胞注射则无效(68.02%±6.68%,与对照组比较P>0.05);内皮祖细胞移植组新生内膜增生厚度(19237±1875μm2)和内膜中膜比值(0.94±0.12)均小于对照组(34676±2412μm2和1.77±0.18)及AMD3100组(32451±2081μm2和1.60±0.17)(P<0.01)。结论基质细胞衍生因子1/CXCR-4在介导移植的内皮祖细胞修复损伤血管内膜中起重要作用。     

SDF-1对内皮祖细胞增殖迁移的影响及AMD3100对其的干预

目的 探讨基质细胞衍生因子-1(stromal cell derived factor-1,SDF-1)对小鼠骨髓源性内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)增殖迁移的影响及AMD3100对其的干预效应.方法 分别用不同浓度的SDF-1α刺激EPCs,观察SDF-1α的促增殖效应再用不同浓度的AMD3100干预5 ng/ml SDF-1α的促增殖效应及单用AMD3100与EPCs孵育,观察AMD3100对EPCs增殖的影响.MTT比色法检测EPCs的增殖情况.用1、10 ng/ml SDF-1α诱导EPCs迁移,或先用10ng/ml AMD3100与EPCs孵育,再做SDF-1α诱导的/无SDF-1α诱导的迁移实验.用改良的Boyden小室测定EPCs迁移能力.结果 SDF-1α剂量依赖性增强EPCs增殖能力,10 ng/ml AMD3100即完全阻断5 ng/ml SDF-1α的促进EPCs增殖效应,单用AMD3100孵育可抑制EPCs增殖,与阴性对照组比较差异显著(P＜0.01);单用AMD3100孵育抑制EPCs迁移,与阴性对照组比较差异显著(P＜0.01).结论 SDF-1α可增强EPCs增殖迁移能力,AMD3100可完全阻断其促增殖和诱导迁移效应,单用AMD3100抑制EPCs增殖迁移.