慢性肾衰竭大鼠股骨cbfa1表达与骨密度关系的研究

目的探讨股骨核心结合因子-a1(cbfa1)对慢性肾衰竭大鼠股骨密度变化的影响。方法将12只大鼠随机分为空白对照组、慢性肾衰竭模型组。造模成功后测量各组大鼠股骨的整体骨密度(Whole-bone mineral density,W-BMD)、松质骨骨密度(Trabecular-bone mineral density,T-BMD)、皮质骨骨密度(Cortical-bone mineral density,C-BMD),留取血清测定钙、磷等生化参数,采用免疫组织化学和HE染色的方法分别检测大鼠股骨中Cbfa1蛋白的表达及松质骨和皮质骨的形态学改变。结果与空白对照组比较,慢性肾衰竭模型组W-BMD、C-BMD降低,T-BMD升高(P0.001);股骨松质骨Cbfa1表达增多,皮质骨Cbfa1表达减少(P0.001);相关分析显示W-BMD与皮质骨Cbfa1蛋白表达呈正相关(r=0.979,P0.001),与松质骨Cbfa1蛋白表达呈负相关(r=-0.974,P0.001),与血清钙浓度呈正相关(r=0.730,P0.001),与血清磷浓度呈负相关(r=-0.652,P0.001)。结论 Cbfa1是肾性骨病导致的骨密度改变的预测因素,可能是Cbfa1对骨形态的影响而导致骨密度的改变。     

BMP信号通路在华法林诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化中的作用

目的探讨骨形态发生蛋白(BMP)信号通路在华法林诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)钙化中的作用。方法体外分离培养大鼠胸主动脉VSMC,将其随机分为正常对照组、高磷组、华法林(10μmol/L)干预组及华法林(10μmol/L)+维生素K(10μmol/L)干预组。对细胞进行钙含量和碱性磷酸酶(ALP)活性检测,茜素红染色检测钙结节,Western blot检测细胞中Runx2蛋白的表达变化,RT-PCR检测细胞中骨形态发生蛋白2(BMP-2)、Smad1及Runx2的表达变化。结果茜素红染色结果显示,与正常对照组和高磷组相比,华法林干预组钙化结节明显增多;钙含量测定结果与茜素红染色结果基本一致。与正常对照组和高磷组相比,华法林干预组ALP活性明显增加(P0.05),Runx2 mRNA和蛋白表达水平及BMP-2、Smad1 mRNA表达明显增高(P0.05);与华法林干预组相比,华法林+维生素K干预组细胞钙含量、ALP活性及BMP-2、Smad1、Runx2的表达均明显降低(P0.05)。结论BMP信号通路参与了华法林促进的大鼠VSMC钙化,其可能的作用机制是介导了VSMC的表型转化。     

胞外pH值通过BMP-2信号通路影响高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化

目的 探讨骨形态发生蛋白2（bone morphogenetic protein 2,BMP-2）信号通路在不同pH值环境影响高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）钙化中的作用。方法 选取5～8周龄健康雄性SD大鼠,体外分离培养大鼠胸主动脉VSMCs,采用免疫细胞化学方法鉴定。将VSMCs用随机抽样法分为正常对照组(pH7.4)、pH7.4+高磷组、pH7.1+高磷组及pH7.7+高磷组。采用茜素红染色及邻甲酚酞络合酮比色法检测细胞钙化情况,酶联免疫吸附法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测BMP-2、Smad1及 Runt 相关转录因子2（Runx2） mRNA的表达。结果 与正常对照组相比,pH7.4+高磷组大鼠VSMCs的钙含量增加（P<0.05）、茜素红染色钙化结节增多,Runx2 mRNA表达及ALP活性均增高（P<0.05）;与pH7.4+高磷组相比,pH7.1+高磷组大鼠VSMCs的钙含量减低（P<0.05）、茜素红染色钙化结节减少,Runx2 mRNA表达及ALP活性均降低（P<0.05）,BMP-2、Smad1mRNA表达均降低（P<0.05）,pH7.7+高磷组大鼠VSMCs的钙含量增加（P<0.05）、茜素红染色钙化结节增多,Runx2 mRNA表达及ALP活性均增高（P<0.05）,BMP-2、Smad1mRNA表达均增高（P<0.05）。结论 胞外酸性环境（pH7.1）抑制高磷诱导的大鼠VSMCs钙化,胞外碱性环境（pH7.7）促进高磷诱导的大鼠VSMCs钙化,其机制可能是通过BMP-2信号通路介导了VSMCs的表型转化。     

EphrinA1-Fc对人肾透明细胞癌786-O细胞EphA2和ERK表达影响的研究

  目的  探讨EphrinA1-Fc对人肾透明细胞癌786-O细胞系促红细胞生成素产生肝细胞受体A2（EphA2）和细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）磷酸化程度的影响。  方法  应用可溶性配体EphrinA1-Fc干预人肾透明细胞癌786-O细胞系,采用Wsternblot方法分析不同时间点细胞内EphA2和ERK1/2的磷酸化程度。  结果  EphrinA1-Fc干预5、10、30、60 min后,p-EphA2、p-ERK的相对表达量逐渐增加（F=9.392,P=0.025;F=4.428,P=0.041）,p-EphA2、p- ERK在EphrinA1-Fc干预前均未见表达。  结论  EphrinA1-Fc抑制肿瘤转移复发的可能机制之一是其促使肾透明细胞癌786-O细胞EphA2磷酸化而导致其降解实现。      

中心静脉压联合生物电阻抗评估血液透析患者干体重

目的联合应用临床评估法和生物电阻抗分析评估血液透析患者的容量状态,探讨中心静脉压(CVP)对评估容量状态的诊断标准。方法选择行维持性血液透析并带有中心静脉置管的的稳定患者16例,按照临床评估法评价均达到干体重;并根据透析结束后测量的生物电阻抗结果 ,总水含量占体重的百分比(TBW%)、细胞外液占总体水含量的百分比(ECW/TBW%)等数值是否达到健康人群标准分为2组:A组:达正常人群标准(n=8),为达到干体重组;B组:未达正常人群标准(n=8),为未达到干体重。对B组逐渐下调干体重,每次0.2～0.5kg,直至当再次测量透析结束后30min时生物电阻抗TBW%、ECW/TBW%,结果达正常人群标准时,定为B`组(n=8),利用6个月时间观察记录单次血液透析(HD)前及透后1hCVP、超滤量设定等指标的相关数值并记录。比较2组透后1h的中心静脉压。结果 A组中心静脉压低于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。单次透析过程中,CVP下降值与校正超滤量呈正相关(r=0.528,P<0.05),CVP每下降1cmH2O对应矫正超滤量为(11±7)ml·kg-1·cmH2O-1。结论监测CVP有助于维持性血液透析(MHD)患者的容量状态评估和校正超滤量,达到干体重,在无心力衰竭的稳定透析患者中,当透后1h中心静脉压≤(7.8±1.9)cmH2O时提示到达干体重。     

慢性肾脏病大鼠血管收缩张力与血管钙化的关系

目的通过检测慢性肾脏病(CKD)大鼠血管收缩张力,探讨其与血管钙化的关系。方法 30只雄性SD大鼠随机分为3组:正常对照组、慢性肾脏病组(CKD组)及慢性肾脏病血管钙化组(CKD+VC组),第4周留取血清学及血管标本,采用离体血管环灌流方法测定胸主动脉张力,硝酸银染色(Von Kossa染色)、钙含量测定和EVG染色检测血管钙化和弹性纤维变化情况,电镜观察平滑肌细胞(VSMCs)的超微结构。结果①CKD+VC组的血管收缩张力与正常对照组比较,最大值(Emax)下降(P=0.001),半数有效浓度(EC50)差异无统计学意义(P>0.05);与CKD组相比,Emax与EC50均无统计学意义(P>0.05)。②光镜结果显示,CKD+VC组可见弹性纤维严重断裂和钙盐沉积,CKD组可见弹力纤维排列紊乱、变细,未见钙盐沉积;电镜结果显示,模型组均可见凋亡VSMCs。结论 VSMCs凋亡和弹性纤维断裂共同参与CKD大鼠胸主动脉张力的下降,而血管钙化对张力的变化无影响。     

维持性血液透析患者血清ADMA水平影响因素分析

目的 分析影响维持性血液透析(MHD)患者血清非对称性二甲基精氨酸(ADMA)水平的因素.方法 选择行MHD的终末期肾脏病(ESRD)患者126例,记录年龄、性别、吸烟、糖尿病、透析龄、透前收缩压、舒张压.采用高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)测定血清ADMA浓度.提取全血DNA,用Snapshot基因测序法确定DDAH-2(-449G/C)单核苷酸基因多态性.将血清ADMA水平与各变量之间进行统计分析.结果 DDAH-2(-449G/C)基因型GG、CG、CC患者血清ADMA浓度差异无统计学意义(P＞0.05);血压升高、长透析龄、透前收缩压升高、胆固醇升高患者的ADMA水平较高(P均＜0.05).经多元线性回归分析,透析龄、透前收缩压及血清总胆固醇水平是影响血清ADMA水平的独立危险因素.结论 透析龄、透前收缩压及血清总胆固醇水平是影响行MHD患者血清ADMA水平的独立危险因素.DDAH-2(-449G/C)单核苷酸基因的多态性可能对中国行MHD患者的ADMA水平无影响作用.     

镁离子对高磷诱导的大鼠胸主动脉血管环钙化的影响

目的探讨不同浓度镁离子对高磷诱导的大鼠胸主动脉血管环钙化的影响。方法体外分离大鼠胸主动脉血管环,将其随机分为正常对照组(含10%胎牛血清DMEM培养基)、高磷组(含10 mmol/Lβ-甘油磷酸高磷培养基)和镁干预组(高磷培养基加不同浓度硫酸镁,使镁离子终浓度分别为1、2、3 mmol/L,镁干预组Ⅰ~Ⅲ)。给予14天干预后,采用von Kossa染色及邻甲酚酞络合酮比色法检测胸主动脉血管环钙化情况;免疫组织化学方法检测胸主动脉血管环L型钙通道α1c(LTCCα1c)、LTCCβ3亚基、Runt相关转录因子2(Runx2)和平滑肌22α(SM22α)表达情况。结果与正常对照组比较,高磷组钙沉积增加,镁干预组随镁离子浓度增大棕黑色颗粒沉积逐渐减少,钙含量测定结果与之相一致(P0.05)。Runx2、LTCCα1c、LTCCβ3亚基的表达除镁干预组Ⅲ与正常对照组差异无统计学意义外,其余各组均高于正常对照组(P0.05);镁干预组随镁离子浓度增大,Runx2、LTCCα1c、LTCCβ3亚基的表达水平均逐渐降低,且均低于高磷组(P0.05)。SM22α表达除镁干预组Ⅲ与正常对照组差异无统计学意义外,其余各组均低于正常对照组(P0.05)。相关性分析显示,LTCCβ3、LTCCα1c亚基均与Runx2表达呈正相关(r=0.692,P0.001;r=0.716,P0.001),Runx2与SM22α表达呈负相关(r=-0.671,P=0.001)。结论镁离子在一定程度上可以抑制高磷诱导的大鼠胸主动脉血管环钙化,其可能通过下调LTCCα1c、LTCCβ3亚基表达,抑制VSMCs向成骨/成软骨表型转化,进而抑制血管环钙化的发生。     

细胞凋亡在维生素K2抑制高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化中的作用

目的探讨维生素K2对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响及细胞凋亡在其中所起的作用。方法选取8~10周龄健康雄性SD大鼠6只,分别体外分离培养大鼠胸主动脉VSMCs,采用免疫细胞化学方法鉴定。将VSMCs采用随机数字表法分为正常对照组、高磷组、维生素K2组1(10μmol/L)、维生素K2组2(25μmol/L)及维生素K2组3(50μmol/L)。检测VSMCs钙含量、Axl mRNA和Bcl-2 mRNA表达、细胞凋亡率。结果5组大鼠VSMCs钙含量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。高磷组、维生素K2组1、维生素K2组2、维生素K2组3均高于正常对照组(P<0.05);维生素K2组1、维生素K2组2、维生素K2组3均低于高磷组(P<0.05);维生素K2组2、维生素K2组3均低于维生素K2组1(P<0.05);维生素K2组3低于维生素K2组2(P<0.05)。5组大鼠VSMCs中Axl mRNA表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。高磷组、维生素K2组1 Axl mRNA表达水平低于正常对照组,维生素K2组3 Axl mRNA表达水平高于正常对照组,维生素K2组2、维生素K2组3 Axl mRNA表达水平高于高磷组(P<0.05)。5组大鼠VSMCs中Bcl-2 mRNA表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。5组大鼠细胞凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。高磷组、维生素K2组1细胞凋亡率高于正常对照组,维生素K2组1、维生素K2组2、维生素K2组3细胞凋亡率低于高磷组(P<0.05)。结论维生素K2能够抑制高磷诱导的大鼠VSMCs钙化,其机制可能是通过上调生长停滞特异基因6(Gas6)/Axl的表达而抑制了VSMCs的凋亡。     

γ干扰素对高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响研究

目的探讨γ干扰素(IFNγ)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响,为临床治疗血管钙化提供新的线索。方法大鼠胸主动脉VSMCs原代培养,采用免疫细胞化学方法鉴定。将VSMCs随机分为阴性对照组、高磷组、IFNγ干预组(在高磷培养基的基础上加入100 U/L重组大鼠IFNγ),刺激3 d后RT-PCR对各组细胞内核心结合因子α1(Cbfα1)、骨形态发生蛋白2(BMP2)、Smad 1以及Smad 7的mRNA进行检测,刺激14 d后,对各组细胞进行钙化染色,钙含量及碱性磷酸酶(ALP)活性测定。结果与阴性对照组比较,高磷组及IFNγ干预组VSMCs均有钙盐沉积,ALP活性及Cbfα1的mRNA及蛋白表达均增高,BMP 2、Smad 1 mRNA表达也增高(均为P<0.05),与高磷组比较,IFNγ干预组VSMCs的钙盐沉积、ALP活性及Cbfα1 mRNA和蛋白表达均显著降低(均为P<0.05),BMP 2、Smad 1 mRNA表达也降低,而正常组和IFNγ干预组的VSMCs中Smad 7 mRNA表达均高于高磷组(均为P<0.05)。结论 IFNγ对高磷诱导的VSMCs钙化有抑制作用,其可能机制之一是通过抑制了VSMCs Cbfα1的表达,进而抑制了VSMCs的转分化来实现的。