高同型半胱氨酸血症对 ApoE －／－鼠心脏内质网应激的影响

目的：探讨高同型半胱氨酸血症（ HHcy）对ApoE－／－鼠心脏内质网应激（ ERS）的影响及其可能机制。方法取5周龄雄鼠12只作为正常对照组;另取5周龄雄性ApoE－／－小鼠36只,随机分为3组,ApoE－／－对照组：ApoE－／－小鼠饲以普通饲料配方饮食;高蛋氨酸组：ApoE－／－小鼠饲以高蛋氨酸饮食;干预组：ApoE－／－小鼠饲以高蛋氨酸饮食同时加0.006％叶酸和0.0004％维生素B12。喂养20周后处死,行主动脉病理切片HE染色观察主动脉是否有斑块形成;取心脏,采用实时荧光定量PCR法检测GRP78、CHOP、Caspase－12 mRNA的变化;巢式降落式甲基化特异性PCR检测GRP78和CHOP启动子区DNA甲基化水平。结果正常对照组及ApoE－／－对照组斑块不明显,高蛋氨酸组动脉粥样硬化斑块面积明显增大,主动脉内膜可见灶性病变部位隆起突入动脉腔内,干预组动脉粥样硬化斑块面积较高蛋氨酸组有所减轻。与ApoE－／－对照组比较,高蛋氨酸组GRP78、CHOP、Caspase－12 mRNA水平明显升高（P＜0.05,P＜0.01）,干预组GRP78、CHOP mRNA水平较高蛋氨酸组降低（P＜0.05）。与ApoE－／－对照组比较,高蛋氨酸组GRP78、CHOP启动子区DNA甲基化水平降低（P＜0.01）,干预组GRP78、CHOP甲基化水平较高蛋氨酸组有所升高（ P＜0.05）。结论 HHcy可能通过影响DNA甲基化程度引起ERS相关基因表达改变,进而导致心肌细胞凋亡,补充叶酸与维生素B12可有效缓解HHcy所引起的ERS和凋亡。     

宁夏回族动脉粥样硬化患者外周血LCAT基因DNA甲基化与血脂水平的关系

目的探讨宁夏回族动脉粥样硬化(AS)患者外周血中卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)基因启动子区甲基化水平及与血脂的关系。方法选择经颈部多普勒超声确诊的AS患者35例及正常者42例作为对照组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测外周血LCAT mRNA的表达,巢式降落式甲基化特异性PCR(nt-MSP)检测外周血LCAT基因DNA启动子区甲基化程度,全自动生化分析仪检测血脂水平。结果 AS组血清TC、TG和LDL水平显著高于对照组(P0.001,P0.001,P0.05);HDL水平低于对照组;与对照组相比,AS组外周血LCAT mRNA表达降低了61.2%(P0.01),同时LCAT基因甲基化程度升高了1.3倍(P0.05)。结论回族AS患者外周血中LCAT DNA高甲基化与AS的发生发展和血脂变化相关。     

EC-SOD在同型半胱氨酸致单核细胞源性巨噬细胞氧化应激中的作用研究

目的探讨细胞外超氧化物岐化酶(EC-SOD)在同型半胱氨酸(Hcy)致巨噬细胞氧化应激中的作用及机制。方法将THP-1单核细胞用佛波酯刺激48 h后演变成巨噬细胞,用0、50、100、200、500μmol/L Hcy作用细胞72 h,并加设叶酸+维生素B12(Vit B12)干预组(100μmol/L Hcy+30μmol/L叶酸+30μmol/L Vit B12)。微板法检测氧化应激指标(H_2O_2、O_2~-、OH-)的变化;实时荧光定量PCR检测巨噬细胞中EC-SOD的mRNA表达水平;Western blot检测巨噬细胞中EC-SOD的蛋白表达水平;EC-SOD测定试剂盒检测EC-SOD活性。分别构建EC-SOD重组质粒和干扰质粒转染细胞,检测EC-SOD的mRNA及蛋白的表达水平以及超氧阴离子的表达。结果与对照组相比,100、200、500μmol/L Hcy组H_2O_2、OH-活性显著增高(P0.01),EC-SOD mRNA和蛋白表达明显降低(P0.01)。与对照组相比,100、200、500μmol/L Hcy组EC-SOD活性分别下降了13.92%、8.62%、10.32%(P0.05,P0.01)。与100μmol/L Hcy组相比,叶酸+Vit B12干预组EC-SOD mRNA的表达升高了47%。分别转染EC-SOD重组质粒和干扰质粒后,与100μmol/L Hcy组相比,EC-SOD重组组O_2~-含量降低了63.89%,干扰片段-596组O_2~-含量则增加了33.59%(P0.05,P0.01)。结论 EC-SOD参与了Hcy导致的单核细胞源性巨噬细胞的氧化应激。在抑制Hcy诱导动脉粥样硬化的过程中,EC-SOD可能发挥着重要的作用。