人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1双顺反子表达载体的构建及其在293T细胞中的表达

目的尝试构建人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)基因双顺反子表达载体并检测其在293T细胞中的表达情况和生物学活性,为深入探讨LOX-1在动脉粥样硬化中的作用和以LOX-1为靶点建立干预机制治疗动脉粥样硬化奠定基础。方法首先根据Primer5.0软件设计引物,采用聚合酶链反应法以LOX-1 c DNA片段为模板扩增LOX-1基因完整编码区,克隆至T载体,经测序成功后亚克隆到双顺反子真核表达载体p IRES2-Ac GFP1-Nuc。利用脂质体转染法将双顺反子重组表达质粒转染至293T细胞,倒置荧光显微镜检测质粒转染情况。采用逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法鉴定LOX-1基因在核酸和蛋白水平的表达,采用激光共聚焦检测LOX-1基因在293T细胞膜上的表达,激光共聚焦和流式细胞术检测表达在293T细胞膜上的LOX-1结合氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的生物学活性。结果成功构建p IRES2-LOX-1双顺反子重组表达载体,将其转染293T细胞后,观察到绿色荧光蛋白基因的表达,初步表明LOX-1基因转染至293T细胞。进一步分子水平鉴定结果表明LOX-1基因在293T细胞核酸和蛋白水平均得到表达,激光共聚焦结果证明LOX-1基因在293T细胞膜上表达。最后激光共聚焦和流式细胞术结果证实表达在293T细胞膜上的人LOX-1基因可以结合氧化型低密度脂蛋白。结论成功构建人LOX-1基因双顺反子表达载体,在此基础上证明其在293T细胞膜上得到表达,并且具有结合ox-LDL的生物学活性,为后续体外研究其在动脉粥样硬化中的作用以及以此为靶点建立干预机制奠定了基础。     

健脾冲剂治疗脾胃虚弱型小儿厌食症的临床研究

目的 观察健脾冲剂治疗脾胃虚弱型小儿厌食症的临床疗效.方法 将100例小儿厌食症患儿随机分为两组,治疗组60例口服健脾冲剂治疗,对照组40例口服用适贝高颗粒治疗,疗程结束后统计疗效.结果 治疗组总有效率为90.0%,对照组为77.5%,两组总有效率比较,差异有统计学意义(P=0.035).结论 健脾冲剂治疗脾胃虚弱型小儿厌食症有效.     

小儿多发性抽动症肝风内动夹痰证的临床研究

目的评定理气健脾、熄风化痰法在治疗小儿多发性抽动症肝风内动夹痰证的有效性和安全性。方法将66例符合诊断标准的多发性抽动症患儿随机分为观察组和对照组,每组各33例。试验组采用理气健脾、熄风化痰法,给予止抽片治疗;对照组给予氟哌啶醇口服治疗。两组均以12周为1疗程,共2个疗程。随访病例以研究结束6个月为期。通过耶鲁综合抽动症严重程度量表（YGTSS）观察两组治疗前后总疗效、抽动分类疗效、远期疗效、中医证候改善、不良反应与安全性。结果①试验组和对照组总有效率分别为100%、93.9%,两组中医证候改善率分别为90.9%、84.8%,两组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。随访后,两组总有效率分别为84.0%、38.1%,远期疗效比较差异有统计学意义（P〈0.05）。②试验组运动性抽动疗效优于对照组（P〈0.05）。两组发声性抽动疗效、总疗效差异无统计学意义（P〉0.05）。③试验组无不良反应,对照组有6例出现不良反应,不良反应发生率为18.2%,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。表明了中医药在治疗该病方面具有显著优势和开发应用前景。结论理气健脾、熄风化痰法是治疗小儿多发性抽动症肝风内动夹痰证的有效方法 。     

缺乏葡萄糖和谷氨酰胺对黑色素瘤A375细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨体外培养条件下,缺乏葡萄糖(No-Glu)或谷氨酰胺(No-Gln)对黑色素瘤细胞生长和凋亡的影响.方法:分别利用MTT、流式细胞术、化学发光、Western blotting以及免疫荧光染色等方法检测No-Glu和No-Gln对人恶性黑色素瘤A375细胞初级纤毛形成、增殖、ATP含量、细胞周期以及细胞凋亡等多方面的影响.结果:在No-Glu或No-Gln培养液中培养,A375细胞的细胞增殖率显著低于对照组(正常培养液)[(21.0±1.9)％或(46.2±9.8)％ vs 100％,P＜0.01或P＜0.05].No-Gln培养液使A375细胞纤毛形成阳性细胞率显著高于对照组[(16.8±2.3)％vs(6.2±1.0)％,P＜0.01],G1期细胞减少(14.4±6.7)％(P＜0.05)、S期细胞增加(75.0±1.9)％(P＜0.05).No-Glu培养液对A375细胞纤毛形成与G1和S期细胞比例均无显著影响.此外,No-Gln使A375细胞内ATP含量下调了(64.5±4.9)％(P＜0.01),而No-Glu仅使ATP含量下降了(11.1±2.1)％(P＞0.05).No-Glu使A375细胞的凋亡率显著高于对照组[(26.1±1.5)％vs(6.1±7.1)％,P＜0.01],并上调促凋亡蛋白Noxa、降低抗凋亡蛋白Mcl-1的表达水平.No-Gln对细胞凋亡率、Noxa和Mcl-1蛋白表达无明显影响.结论:No-Glu或No-Gln均可抑制A375细胞增殖,但No-Gln导致S期细胞周期阻滞、抑制ATP合成的作用更明显,而No-Glu诱导细胞凋亡的作用更强.