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,相关系数大于0.9972,方法检出限为0.041mg/L,相对标准偏差小于1.0%,加标回收率为82%～109%。本法操作简单,灵敏度较高,线性范围宽,不失为一种较好的测定方法。0牙膏工业Toothpas虻恼婧吮泶镌靥逯?构建重组质粒pEGFP-NGB表达载体。采用GeneJamer转染试剂和pEGFP-NGB重组子混合后转染至培养神经胶质细胞中,观察NGB在培养神经胶质细胞中mRNA以及蛋白表达。结果:阳性克隆测序结果显示所测序列与Genbank序列一致。RT-PCR和Western-blot结果表明转染重组质粒pEGFP-NGB培养神经胶质细胞NGBmRNA和蛋白均有较高的表达。荧光显微镜下观察发现,培养神经胶质细胞中有较多绿色荧光蛋白表达。结论:(1)成功构建pEGFP-NGB重组子;(2)构建的pEGFP-NGB重组子可在培养神经胶质细胞中表达。     

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目的观察难治性癫疒间患儿脑内病灶中脑红蛋白(NGB)的表达。方法选择2003年8~10月在北京天坛医院神经外科进行手术切除治疗的难治性癫疒间患儿7例,在对其临床资料分析的基础上,应用组织学染色观察手术切除标本(海马和颞叶)的病理改变;应用免疫组织化学方法,分别研究癫疒间患儿手术切除标本中海马和颞叶病灶NGB表达的变化情况,并进行半定量图像分析。结果7例标本中,均出现反应性胶质细胞的显著增生,具有难治性癫疒间共同的病理学特征。海马中NGB免疫反应阳性细胞明显少于颞叶病灶;且随发作年限增加而减少。结论难治性癫疒间患儿颞叶病灶NGB阳性细胞数多于海马,可能与发作时病灶处耗氧过度从而增加了对氧的需求有关。     

颅脑创伤后脑红蛋白表达变化的实验研究

目的 研究弥漫性颅脑创伤后大鼠脑组织中脑红蛋白的表达变化情况,探究脑红蛋白与颅脑创伤的关系.方法 选择Marmarou自由落体打击装置复制颅脑创伤模型,分别采用实时定量PCR技术及免疫组化技术检测伤后不同时间脑组织中脑红蛋白的核酸、蛋白表达情况,并对所得数据进行统计学分析.结果 (1)核酸表达:在伤后0.5 h,脑组织中脑红蛋白核酸表达出现首个高峰,此后逐渐下降,至6 h恢复至正常水平;伤后12 h再次升高,于伤后48 h达高峰,此后下降,至伤后120 h仍高于正常水平;(2)蛋白表达:致伤区皮层神经元脑红蛋白表达分别于伤后2 h、72 h呈现出两次高峰表达.结论 弥漫性颅脑创伤后脑组织中脑红蛋白表达呈"双峰",提示脑红蛋白可能与创伤后神经元保护相关.     

Neuroglobin and myoglobin in non-small cell lung cancer: expression, regulation and prognosis

Globins are respiratory proteins involved in oxygen metabolism, which is a critical factor in tumor growth and progression. The status of neuroglobin and myoglobin is largely unknown in human malignancies, including lung cancer. The aim of this study was to explore mRNA expression profiles, potential regulatory mechanisms and clinicopathological associations of neuroglobin and myoglobin in non-small cell lung cancer (NSCLC). We screened 208 surgically resected NSCLC specimens and a panel of lung normal and cancer cell lines. The mRNA expression of neuroglobin, myoglobin and hypoxia markers (HIF1α and VEGFa) was measured with qRTPCR, while neuroglobin promoter methylation was assessed with Pyrosequencing. Neuroglobin and myoglobin were upregulated in the tumor samples compared to normal tissue (p = 1.3 × 10⁻²² and p = 1.9 × 10⁻⁹, respectively). Neuroglobin was more frequently overexpressed in squamous cell carcinomas (SqCCL) than adenocarcinomas. Overexpression of myoglobin was more profound in adenocarcinomas, which correlated with poor survival (p = 0.013). Neuroglobin promoter was hypermethylated in 30.8% of NSCLC cases, which correlated with neuroglobin mRNA downregulation. The epigenetic regulation of neuroglobin was confirmed by treating lung cell lines with 5′azadeoxycytidine and/or trichostatin A. Expression of both genes correlated with the expression of HIF1α (neuroglobin: p = 3.8 × 10⁻⁵, myoglobin: p = 1.1 × 10⁻¹¹). Myoglobin expression was also associated to that of VEGFa (p = 2.1 × 10⁻⁷). Hypoxia-dependent upregulation of both globins was validated in vitro. In summary, neuroglobin and myoglobin overexpression in NSCLC is associated with histological subtype, hypoxia and, in case of neuroglobin - epigenetic regulation. Myoglobin expression may have potential significance in the prognostication of lung adenocarcinomas.     

急性缺血性脑卒中发病早期血清脑红蛋白和HIF-1α水平变化及意义

目的 检测急性缺血性脑卒中患者早期血清NGB和HIF-1水平,并评估两者与患者神经损伤程度及预后的关系。方法 研究纳入2011年6月~2015年6月期间的60例急性缺血性脑卒中患者及60例健康对照组志愿者。于发病后24、48、72、96h血清NGB及HIF-1α水平进行检测,并与健康对照组志愿者进行比较。同时分析急性缺血性脑卒中患者血清NGB及HIF-1α水平峰值与脑梗死体积、NIHSS评分及预后的关系。结果 AIS患者发病后24h可见血清NGB水平（16.43±1.09μg/ml）和HIF-1α水平（233.90±26.30μg/ml）显著高于对照组（NGB：10.18±1.01μg/ml,HIF-1α：121.00±35.5μg/ml）,之后持续升高,NGB水平于发病后72h达峰（20.50±1.83μg/ml）,HIF-1α水平于发病后48h达峰（411.67±50.46μg/ml）。AIS患者血清NGB及HIF-1α峰值与脑梗体积及NIHSS评分均呈正相关。预后良好组血清NGB峰值及HIF-1α峰值（NGB：23.68±1.51μg/ml,HIF-1α：387.63±38.23μg/ml）均显著低于预后不良组（NGB：26.29±1.09μg/ml,HIF-1α：463.55±30.64μg/ml）。ROC曲线分析显示,血清NGB和HIF-1α峰值均可较好的预测预后不良事件。结论 NGB和HIF-1α血清水平均与AIS患者梗死体积和神经损伤程度呈正相关,且可较好的预测AIS患者预后情况。提示NGB和HIF-1α血清水平具有作为分子标志物,评价缺血性脑卒中患者神经功能损伤严重程度及预后的潜在可能性。     

高压氧对缺血再灌注损伤大鼠脑红蛋白表达的影响

h HBO组脑红蛋白表达高于48 h I/R组,脑组织含水量低于48 h I/R组(P<0.05).结论 高压氧可提高对缺血再灌注损伤大鼠脑组织脑红蛋白的表达,也是其对大鼠脑组织保护作用的机制之一.     

NGB基因转染拮抗庆大霉素耳毒性作用的实验研究

目的验证阳离子脂质体介导脑红蛋白(neuroglobin,NGB)基因转染对庆大霉素致豚鼠耳毒性的保护作用。方法将ABR反应阈均不超过40dB SPL的120只健康花色豚鼠随机分为5组,每组24只:Ⅰ组:空白对照组;Ⅱ组:人工外淋巴液对照组(经左耳注入人工外淋巴液);Ⅲ组:人工外淋巴液实验组(经左耳注入人工外淋巴液后肌肉注射庆大霉素);Ⅳ组:空质粒转染组(经左耳注入空质粒pEGFP-C1后肌肉注射庆大霉素);Ⅴ组:NGB基因转染组(经左耳注入pEGFP-NGB后肌肉注射庆大霉素),庆大霉素均经后腿肌肉注射120mg.kg-1.d-1,共给药14天。停止给药后喂养14天,各组均行ABR检测,耳蜗基底膜铺片、免疫组化观察各组豚鼠耳蜗基底膜毛细胞形态学及NGB蛋白表达的变化。结果给药后Ⅰ组ABR反应阈平均为37.22dB SPL(左耳)和36.94dB SPL(右耳),Ⅱ组阈值平均为37.22dB SPL(左耳)和37.50dB SPL(右耳),Ⅲ组阈值平均为119.44dB SPL(左耳)和122.22dB SPL(右耳);Ⅳ组阈值平均为119.72dB SPL(左耳)和120.83dB SPL(右耳);Ⅴ组阈值平均为83.89dB SPL(左耳)和100.56dB SPL(右耳)。Ⅴ组ABR反应阈较Ⅰ组和Ⅱ组显著升高(P<0.05),较Ⅲ组和Ⅳ组显著降低(P<0.05)。Ⅴ组中手术耳ABR反应阈较非手术耳降低(P<0.05)。耳蜗基底膜铺片示Ⅰ组和Ⅱ组内外毛细胞排列整齐,无缺失,Ⅲ组和Ⅳ组内外毛细胞极少量残存,其中ABR阈值大于135dB SPL的豚鼠耳蜗毛细胞几乎消失殆尽,Ⅴ组毛细胞部分缺失,且主要是外毛细胞;免疫组织化学染色示Ⅴ组耳蜗毛细胞NGB蛋白表达量较其余各组均显著增高(P<0.05),其余各组几乎均未见明显阳性表达。结论本研究成功验证了阳离子脂质体介导NGB基因转染对庆大霉素致豚鼠耳毒性具有有效的保护作用。     

脑红蛋白在内毒素脑损伤大鼠模型中的表达变化

目的 了解内毒素脑损伤大鼠额叶皮质、脑脊液(CSF)和血清中脑红蛋白(Ngb)的表达变化并分析其意义.方法 选用SD大鼠70只,随机分为对照组10只和内毒素干预组60只.内毒素干预组大鼠于脑池内注射0.1 mg/kg LPS,对照组注入等体积等渗盐水.内毒素干预组大鼠于注射后3、6、12、24、48、72 h收集血清和CSF,并处死大鼠留取额叶皮质,每时相点10只大鼠.应用酶联免疫吸附测定(ELISA)法和蛋白质印迹法测定Ngb含量,干燥法测定额叶皮质含水量;并对各样本中Ngb含量与额叶皮质含水量行相关性分析.采用生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶(SP)法检测Ngb在额叶皮质中的表达.对照组大鼠亦进行上述检测.结果 ELISA结果 显示,内毒素干预组大鼠注射后各时相点额叶皮质、CSF、血清中Ngb含量高于对照组,其中48 h达峰值[分别为(35.4±3.9)、(22.7±3.1)、(14.4±2.8)ng/mL,P<0.01].蛋白质印迹法显示,各组均表达相对分子质量约为17×103的Ngb蛋白,Ngb表达变化与ELISA检测结果 相似.注射后6～72 h,内毒素干预组大鼠额叶皮质含水量明显高于对照组(P<0.01),其中48 h达峰值(83.3±1.9)%.内毒素干预组大鼠各时相点血清、CSF、额叶皮质Ngb含量与额叶皮质含水量4项指标两两比较,均呈正相关(γ为0.631～0.719,P<0.01).SP法显示.Ngb免疫反应阳性细胞主要位于神经元的细胞质.结论 LPS所致脑损伤中Ngb表达的上调与LPS的注入时间相关.