儿童肺炎克雷伯菌血流感染临床特征及菌株药物敏感性分析

摘要：目的 探讨儿童肺炎克雷伯菌血流感染(Klebsiella pneumoniae bloodstream infection, KPBSI)临床特征及肺炎克雷伯 菌(Klebsiella pneumoniae, KP)对常用抗菌药物的敏感性，为儿童KPBSI合理治疗提供参考。方法 回顾性分析2014年1月至2019 年12月在重庆医科大学附属儿童医院住院的KPBSI患儿临床资料。结果 共纳入110例患儿，64例(58.2%)为院内感染，72例 (65.5%)有基础疾病，以血液系统肿瘤最多见。110例患儿PRISM Ⅲ评分为16.0(7.0~20.8)，其中74例(67.3%)发生脓毒症，15例 (13.6%)发生脓毒性休克，18例(16.4%)发生呼吸衰竭，15例(13.6%)需有创机械通气，院内死亡共13例(11.8%)。KP菌株对阿米卡 星、碳青霉烯类抗菌药物敏感率＞90%，对头孢噻肟、头孢曲松和头孢他啶的敏感率分别为58.3%、60.9%和70.9%，对头孢哌 酮/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦的敏感率分别为59.5%和82.7%。检出ESBLs+菌株39株(39/86，45.3%)，耐碳青霉烯类肺炎克雷 伯菌(CRKP)菌株10株(10/110，9.1%)，ESBLs+KP菌株和CRKP在各年龄组间分布无统计学差异。结论 儿童KPBSI多见于有基 础疾病的患儿，脓毒症、脓毒性休克和呼吸衰竭发生率高；KP菌株对头孢他啶和哌拉西林/他唑巴坦敏感性较高，可经验性治 疗轻症KPBSI患儿。     

miRNA-325-3p通过下调细胞角蛋白13 的表达降低鼻咽癌细胞CNE1 的放疗敏感性

目的：探究miRNA-325-3p 及其靶基因细胞角蛋白13（cytokeratin 13，CK13）对鼻咽癌细胞CNE1 的放疗敏感性的影响。方法：通过miRBase、Targetscan 及Microcosm 三大数据库预测miRNA-325-3p 的潜在靶基因，并通过双荧光素酶活性检测实验进行验证，qPCR检测不同放射剂量下鼻咽癌细胞CNE1 中miRNA-325-3p 及其靶基因的表达水平变化，通过克隆形成实验观察不同放射剂量下过表达miRNA-325-3p 及敲低靶基因后CNE1 细胞克隆形成率的变化，流式细胞术验证过表达miRNA-325-3p及敲低靶基因后CNE1 在不同放射剂量下凋亡水平的变化，MTT法检测miRNA-325-3p 过表达和CK13 敲低组鼻咽癌细胞CNE1在不同放射剂量下的细胞存活率以验证其放疗敏感性的变化。结果：CK13 确认为miRNA-325-3p 的潜在靶基因，鼻咽癌细胞CNE1 经放射处理后，miRNA-325-3p 的表达水平显著升高、CK13 的表达水平显著降低（均P<0.05）。miRNA-325-3p 表达量上调和CK13 基因沉默均显著提高CNE1 细胞的存活率[miRNA上调时：（60.14±3.55）% vs（19.23±3.42）%，t=14.37、P<0.01；CK13 沉默时：（76.15±5.13）% vs（28.53±3.68）%，t=13.06、P<0.01]和克隆形成率，降低了凋亡率[miRNA 上调时：（27.95±2.67）% vs（51.68±3.47）%，t=9.39、P<0.01；CK13 沉默时：（20.31±2.62）% vs（38.14±3.83）%，t=6.66、P<0.01]。结论：miRNA-325-3p 能够通过下调靶基因CK13的表达降低鼻咽癌细胞CNE1 对放疗的敏感性。     

miR-513a-5p慢病毒载体的构建及其对人骨肉瘤细胞放疗敏感性的影响

目的:构建miR-513a-5p慢病毒过表达载体，转染人骨肉瘤细胞株，观察miR-513a-5p对人骨肉瘤细胞放疗敏感性的影响。方法:PCR法扩增人miR-513a-5p基因，克隆入pLentis-CMV-GFP-MCS-PGK-PURO载体获得重组质粒pLentis-miR513a，双酶切鉴定并测序后将正确的重组质粒和对照质粒转染293FT细胞制备慢病毒，分别转染骨肉瘤HOS和U2OS细胞，qRT-PCR法及荧光显微镜鉴定转染结果。克隆形成实验、MTT法检测miR-513a-5p高表达HOS和U2OS细胞在X射线照射下细胞存活情况。结果:双酶切及测序结果确定成功构建miR-513a-5p慢病毒载体pLentis-miR513a。qRT-PCR结果提示，转染骨肉瘤细胞株后miR-513a-5p表达显著升高。克隆形成实验结果显示miR-513a-5p高表达后骨肉瘤细胞在X射线照射下细胞增殖减慢。MTT结果提示miR-513a-5p高表达骨肉瘤细胞经X射线照射后细胞存活减少。结论:成功构建了miR-513a-5p慢病毒载体，建立了高效稳定表达miR-513a-5p的骨肉瘤细胞株，高表达miR-513a-5p能显著增加X射线照射后骨肉瘤细胞的放疗敏感性。     

LncRNA UCA1对肺癌细胞放射敏感性影响及机制研究

目的 研究长链非编码RNA (LncRNA) UCA1对肺癌细胞增殖、凋亡及放射敏感性影响及其机制。方法 运用qRT-PCR法检测肺癌细胞A549、H1299和人正常肺细胞HBE中UCA1、miR-513a-5p表达。将si-con组(转染si-con)、si-UCA1组(转染si-UCA1)、miR-513a-5p组(转染miR-513a-5p mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、IR+si-con组(转染si-con+照射)、IR+si-UCA1组(转染miR-NC+照射)、IR+miR-513a-5p组(转染miR-513a-5p mimics+照射)、IR+miR-NC组(转染miR-NC+照射)、IR+si-UCA1+anti-miR-513a-5p组(共转染si-UCA1和anti-miR-513a-5p+照射)均用脂质体法转染至A549、H1299细胞,然后部分组进行4Gy照射。MTT法检测各组细胞增殖,克隆形成实验检测细胞增敏比,流式细胞术检测各组细胞凋亡,双荧光素没报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果 与HBE细胞相比,A549、H1299细胞中UCA1表达显著升高(P<0.05),miR-513a-5p表达显著降低(P<0.05)。抑制UCA1、过表达miR-513a-5p均可明显抑制A549、H1299细胞增殖、促进凋亡、提高放射敏感性(放射增敏比为1.897、2.146和1.615、1.872)。miR-513a-5p可抑制野生型UCA1细胞的荧光活性,且UCA1可负向调控miR-513a-5p的表达。抑制miR-513a-5p可逆转抑制UCA1对细胞的放射敏感性的增强作用。结论 抑制LncRNA UCA1可增强放射对肺癌细胞敏感性,其机制可能与靶向抑制miR-513a-5p有关。     

盐霉素对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响

目的:体外实验研究盐霉素对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响。方法:通过CCK-8法检测盐霉素作用后鼻咽癌CNE-2细胞的增殖情况。利用克隆集落形成实验观察鼻咽癌细胞成活情况，单击多靶模型拟合剂量存活曲线，计算放射增敏指数（SER）；Chou-Talalay数学模型绘制联合指数（CI）曲线，判断盐霉素和放射的作用关系。利用γ-H2AX焦点形成检测DNA分子损伤情况。结果:盐霉素能够抑制鼻咽癌细胞的增殖，并且具有明显的时间和剂量依赖性；盐霉素作用鼻咽癌细胞的IC50值在24 h时为17.81 μmol/L，48 h时为3.98 μmol/L。根据单击多靶模型拟合细胞的存活曲线，可知在鼻咽癌细胞CNE-2中盐霉素浓度为0.1 μmol/L和0.5 μmol/L时SER分别为1.19和1.21，均大于1.0，表明盐霉素对鼻咽癌细胞具有明显的放射增敏作用。制作联合指数（CI）曲线，可知在盐霉素浓度为0.1 μmol/L时，放射剂量为2 Gy时，CI值≈1，盐霉素和放射对CNE-2的作用接近相加作用，放射剂量为4、6、8 Gy时，CI值均＜1，二者为协同作用；在盐霉素浓度为0.5 μmol/L时，放射剂量为2、4、6、8 Gy时，CI值均＜1，二者均为协同作用。相对于照射组，盐霉素+照射组能增加DNA损伤数目。结论:盐霉素能提高鼻咽癌细胞的放射敏感性，为一种潜在的放射增敏药物。     

长链非编码RNA FAM201A靶向miR-488-3p对胃癌细胞生物学行为及放射敏感性的影响

  目的  探讨长链非编码RNA（lncRNA）序列相似性家族201-成员A（family with sequence similarity 201-member A，FAM201A）靶向miR-488-3p对胃癌细胞生物学行为及放射敏感性的影响。  方法  选取2014年1月至2017年1月间于莱阳中心医院确诊并进行胃癌根治性切除手术（术前均未经过放疗和化疗治疗）的胃癌患者的肿瘤组织标本和配对的非癌性黏膜标本63例，采用qRT-PCR检测63例胃癌组织和与其对应的癌旁组织中FAM201A及miR-488-3p的表达水平。构建抑制FAM201A表达的MGC803胃癌细胞株。四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法检测细胞增殖活力，流式细胞术检测细胞凋亡，Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力。用不同辐射强度（0、2、4、6和8 Gy）射线照射抑制FAM201A表达的MGC803细胞，克隆形成实验检测细胞存活分数，绘制单击多靶模型拟合曲线。双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR验证FAM201A和miR-488-3p的靶向关系。  结果  与癌旁组织相比，胃癌组织中FAM201A的表达水平显著升高，miR-488-3p的表达水平显著降低。抑制FAM201A可显著抑制MGC803细胞增殖、迁移和侵袭，促进其凋亡，增加MGC803细胞的放射敏感性。FAM201A可靶向负性调控miR-488-3p表达。抑制miR-488-3p能够逆转抑制FAM201A对细胞MGC803增殖、凋亡、迁移侵袭和放射敏感性的影响。  结论  抑制lncRNA FAM201A通过靶向miR-488-3p可抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭，促进胃癌细胞凋亡，并增加其放射敏感性。FAM201A有望成为胃癌的新型分子靶点。      

厄洛替尼联合TP方案化疗治疗晚期敏感性EGFR突变肺腺癌患者的疗效观察

目的：探究厄洛替尼联合TP方案化疗治疗晚期敏感性EGFR突变肺腺癌患者的疗效。方法：选取2018年1月~2019年12月治疗的92例晚期敏感性EGFR突变肺腺癌患者，按照随机数字表法分为研究组46例和对照组46例。对照组采用TP方案化疗治疗，研究组采用厄洛替尼联合TP方案化疗治疗。比较两组临床疗效、不良反应发生率及治疗前后干扰素-γ、白介素-2、肿瘤标志物（癌胚抗原、糖类抗原125）。结果：研究组疾病控制率84.78%高于对照组63.04%（P＜0.05）；治疗后两组血清干扰素-γ、白介素-2水平均较治疗前升高，且研究组高于对照组（P＜0.05）；治疗后两组血清癌胚抗原、糖类抗原125水平均较治疗前降低，且研究组低于对照组（P＜0.05）；研究组不良反应发生率与对照组比较无明显差异（P＞0.05）。结论：厄洛替尼联合TP方案化疗治疗晚期敏感性EGFR突变肺腺癌效果显著，可有效降低肿瘤标志物水平，提高血清干扰素-γ、白介素-2水平，且安全性高。