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1.
目的用几种高度精细灵敏的方法检测氧糖剥夺再复氧(OGD/R)后神经元自噬流不同阶段的变化。方法原代皮质神经元细胞经过OGD/R后将实验分为OGD/R组及OGD/R+bafilomycin A1 (BafA1)组,用RFP-GFP串联荧光标记LC3基因转染检测自噬小体和溶酶体的融合情况,透射电子显微镜(TEM)观察自噬的超微结构,SQSTM1/p62结合LC3蛋白翻转实验检测p62与LC3蛋白的定量,p62免疫染色观测其分布与含量。结果荧光显微镜下OGD/R组自噬溶酶体与自噬小体比值明显增高;TEM可观测到不同阶段的自噬结构变化;可溶性p62的比值结合LC3Ⅱ/Ⅰ的比值共同反映了自噬流的活化;p62荧光染色后在BafA1组中分布居多。结论每种方法各有其优点,不同方法和指标能够精准地反映神经元OGD/R后自噬流在不同阶段的具体变化,掌握并应用好这些方法能有效从自噬角度探索中枢神经系统疾病。 相似文献
2.
3.
目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素对肝癌细胞增殖凋亡是否存在影响,及该抑制作用是否与自噬相关。方法 采用MTT法检测不同浓度曲古霉素作用于肝癌HepG2细胞24 h、48 h、72 h以后肝癌细胞的增殖能力;使用流式细胞术检测不同浓度曲古霉素对HepG2肝癌细胞周期及凋亡的影响;蛋白印迹法(Western blot, WB)检测不同浓度曲古霉素对肝癌HepG2细胞中Beclin1和Bcl-2蛋白的表达;实时荧光定量PCR(Real-time PCR, RT-PCR)检测不同浓度曲古霉素对肝癌HepG2细胞中Beclin1和Bcl-2 mRNA的表达。结果 曲古霉素对肝癌HepG2细胞具有增殖抑制作用,与对照组相比较,其差异有统计学意义(P<0.05);通过流式细胞术检测结果显示,曲古霉素作用于肝癌HepG2细胞后,随着浓度的增加,细胞凋亡率显著上升,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);RT-PCR及WB实验观察到,Beclin1蛋白和mMRA的表达随着曲古霉素浓度的增加而逐渐升高,Bcl-2蛋白和mMRA的表达随着曲古霉素作用浓度的增加而逐渐降低,且与对照... 相似文献
4.
目的 探究酸浆苦味A(Physalin A,PA)对骨关节炎的保护作用及作用机制。方法 取5日龄的C57BL/6乳鼠膝关节原代软骨细胞进行传代培养,使用5 ng/mL的白细胞介素-1β(IL-1β)刺激原代软骨细胞以模拟骨关节炎的软骨细胞炎性模型,并使用不同浓度的PA(2.5 μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L)进行干预,具体分组为对照组、IL-1β组、IL-1β+PA(2.5 μmol/L)组、IL-1β+PA(5 μmol/L)组、IL-1β+PA(10 μmol/L)组。Western blot法检测不同组间蛋白聚糖(ACAN)、二型胶原(COL2A1)、基质金属蛋白酶13(MMP13)、Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS5)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)、白细胞介素6(IL-6)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平。结果 与对照组比较,IL-1β组ACAN、COL2A1蛋白表达水平明显下调(P<0.05),而MMP13、ADAMTS5和iNOS、COX-2、IL-6蛋白表达水平显著升高(P<0.05);相比于IL-1β组,IL-1β+PA(2.5 μmol/L)组、IL-1β+PA(5 μmol/L)组、IL-1β+PA(10 μmol/L)组中ACAN、COL2A1蛋白表达水平逐渐升高(P<0.05),MMP13、ADAMTS5蛋白和iNOS、COX-2、IL-6蛋白表达水平逐渐下降(P<0.05)。此外,相比于对照组,IL-1β组Bcl-2/Bax比值下降(P<0.05);相比于IL-1β组,IL-1β+PA(2.5 μmol/L)组、IL-1β+PA(5 μmol/L)组、IL-1β+PA(10 μmol/L)组中,Bcl-2/Bax比值升高(P<0.05)。结论 PA能通过抗炎和抗凋亡途径发挥保护关节软骨的作用。 相似文献
5.
摘要:目的 研究红树林植物大红树内生真菌Phomopsis asparagi DHS-48发酵提取物中的化学成分及其对肝癌HepG2细胞
的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法 通过反复硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱等方法进行分离纯化,根据理化性
质、波谱数据并结合参考文献鉴定化合物DD-38的结构;用不同浓度DD-38处理HepG2细胞,采用MTT比色法检测其对HepG2
细胞增殖的抑制作用;平板克隆形成实验检测HepG2细胞克隆形成能力;细胞划痕实验观察HepG2细胞细胞的体外迁移能力;
Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测β-catenin的表达水平。结果 通过1H NMR、13C NMR及MS等波谱
学方法,结合相关文献数据,鉴定化合物结构为:dicerandrol A(DD-38);MTT实验显示,DD-38对HepG2细胞的增殖具有明显
抑制作用,存在时间和剂量依赖性(P<0.05,P<0.01);根据细胞增殖率得出24 h时HepG2细胞的IC50为(4.8273±0.2216) μmol/L;
平板克隆形成实验显示,DD-38明显降低了HepG2细胞的克隆形成能力,具有剂量依赖性(P<0.01);细胞划痕实验表明DD-38可
以显著降低HepG2细胞的迁移能力(P<0.01),加药24 h后,细胞迁移率从77.09%±2.16%降低到12.14%±5.32%;流式细胞术检
测实验显示,DD-38可促进HepG2细胞凋亡,凋亡率存在剂量依赖性;Western blot实验显示,DD-38可抑制β-catenin蛋白在细胞
质和细胞核中的表达(P<0.05和P<0.01)。结论 DD-38可抑制HepG2细胞的增殖、迁移和克隆形成,促进细胞凋亡,其机制可能
与抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关。 相似文献
6.
目的 探讨恩格列净(EMPA)在心肌缺血再灌流(MI/R)损伤中的作用及机制。方法 利用大鼠离体心脏缺血40 min再灌流2 h模型,40只雄性SD大鼠随机分为:对照组(Control)、MI/R组、2.5 mol/L EMPA+MI/R组(EMPA+MI/R)以及EMPA+10 mol/L沉默信息调节因子1(SIRT1)抑制剂EX527+MI/R组(EMPA+EX527+MI/R),记录心脏功能、心肌纤维形态、心肌梗死面积,ELISA检测心肌中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和琥珀酸脱氢酶(SDH)活性,Western blot检测Cytochrome c、Cleaved caspase-3、SOD2、gp91phox和SIRT1蛋白表达,DHE染色检测ROS的含量。结果 和对照组比较,MI/R组心脏功能降低,心肌纤维断裂,心肌梗死面积、Cytochrome c和Cleaved caspase-3以及gp91phox表达、MDA含量均增加,而SOD和SDH活性以及SOD2和SIRT1表达减少,ROS含量增加;和MI/R组比较,... 相似文献
7.
目的 研究轻型颅脑爆炸冲击伤后大鼠不同时间脑组织星形胶质细胞、小胶质细胞和神经元损伤反应的病理改变和过程。同时探讨富含鱼油饮食对轻型颅脑爆炸冲击伤大鼠的神经保护作用。方法 收集54只刚断乳SD大鼠,随机均分为对照组、模型组、治疗组,模型组及治疗组大鼠分别在喂养普通饲料和富含鱼油的饲料33 d后建立由冲击波诱导的轻型颅脑爆炸冲击损伤模型,对照组大鼠在喂养普通饲料33 d后不建立爆炸冲击波损伤模型。结果 与对照组相比,模型组和治疗组的大鼠体质量在致伤后出现一定程度的减轻,随后恢复至致伤前水平;轻型爆炸伤后6 h、24 h、3 d,模型组和治疗组大鼠大脑海马区GFAP阳性染色星形胶质细胞数量及海马区锥体细胞数量均减少。反之,模型组和治疗组大鼠脑组织中海马区的激活态小胶质细胞和皮层区域凋亡神经元数量均增加,且具有时间依赖性。此外,与模型组相比,治疗组可增加伤后星形胶质细胞和海马区锥体细胞数量,并降低激活态小胶质细胞和皮层区域凋亡神经元数量。结论 富含鱼油饮食可通过减轻颅脑爆炸伤后神经细胞损伤,抑制神经炎性反应等方面发挥其神经保护作用。 相似文献
8.
目的:研究延龄草总皂苷对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞A549增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:将不同浓度的延龄草总皂苷作用于A549细胞,应用实时定量PCR检测hsa_circ_0025033和miR-149的表达,应用双荧光素酶基因系统验证hsa_circ_0025033与miR-149的靶向关系。分析干扰hsa_circ_0025033表达对A549细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结果:延龄草总皂苷可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,下调hsa_circ_0025033表达,上调miR-149表达(P<0.05)。干扰hsa_circ_0025033可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡(P<0.05)。hsa_circ_0025033可靶向结合miR-149,干扰hsa_circ_0025033表达可上调miR-149表达(P<0.05)。过表达hsa_circ_0025033逆转延龄草总皂苷对A549细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。结论:延龄草总皂苷能够抑制NSCLC细胞A549增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,可能与调节hsa_circ_0025033/miR-149通路有关。 相似文献
9.
目的:探索甲基转移酶抑制剂DCG066对人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞TMD-8的有效杀伤浓度,进而对其作用机制进行研究。方法:通过CCK-8实验探索DCG066对TMD-8细胞的有效杀伤浓度,通过免
疫荧光实验分析DCG066处理后TMD-8活细胞及死细胞的分布,通过流式细胞术检测DCG066对TMD-8细胞凋亡的诱导、细胞周期的抑制及胞内活性氧簇水平,Western Blot及转录组测序分析细胞凋亡及铁死亡相关基因的表达情况。结果:与对照组相比,低浓度DCG066可有效杀伤TMD-8细胞,且成剂量依赖关系。DCG066可以诱导TMD-8细胞凋亡及细胞周期抑制,Bax及DDIT等凋亡相关蛋白表达显著上调,Cyclin E1及Cyclin A2等细胞周期相关蛋白表达下调。此外,TMD-8细胞经DCG066处理后,活性氧水平升高,HOMX1及NOX2等铁死亡相关基因mRNA表达水平上调。结论:甲基转移酶抑制剂DCG066可通过诱导细胞铁死亡及凋亡、抑制细胞周期的方式,发挥杀伤弥漫大B细胞淋巴瘤的作用。 相似文献
10.
目的:探究木犀草素(Lut)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠是否具有神经保护作用及其作用机制。方法:将7日龄新生大鼠分为假手术组、模型组(HIBD组)和Lut治疗组(HIBD+Lut组)。用Rice-Vannucci法建立新生大鼠HIBD模型。HIBD+Lut组在造模后即刻通过腹腔注射给予50 mg/kg Lut,连续3 d,模型组和假手术组同时腹腔注射等体积生理盐水。3 d后,用氯化三苯基四氮唑(TTC)染色评估脑梗死范围;用干/湿重脑含水量法评估缺血脑半球的脑水肿情况;用苏木精-伊红(HE)染色以及原位末端转移酶标记(TUNEL)和神经元核抗原(NeuN)荧光双标共定位法观察缺血脑半球海马和皮质中神经元损伤情况;用商用试剂盒检测缺血脑半球中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)水平;用Western blot法检测缺血脑半球的海马和皮质中核因子E2相关因子2(NRF-2)和血红素加氧酶1(HO-1)的蛋白表达水平。取35日龄大鼠,用水迷宫实验评估大鼠的认知功能情况。结果:与假手术组比较,HIBD组大鼠脑梗死、脑... 相似文献