靶向VEGFR2光声/超声双模态造影剂的制备及体外寻靶实验研究

目的制备一种特异性靶向新生血管内皮细胞的光声/超声双模态造影剂,探讨其体外寻靶能力及双模态显影效果。方法采用多步乳化法制备载有印度墨水和液态氟碳的高分子造影剂,用碳二亚胺法将造影剂与抗血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)单克隆抗体相偶联,制备出靶向VEGFR2高分子造影剂(Vi-PFH-PLGA)。检测该造影剂的一般特性、体外寻靶能力及双模态显影效果,并与非靶向高分子造影剂进行比较。结果所制备的靶向高分子造影剂的平均粒径为(565.5±15.6)nm,间接免疫荧光法观察到抗体成功的连接到造影剂表面,流式细胞仪测得抗体微球连接率为99.72%,体外寻靶能力实验显示较多的靶向造影剂呈花环状牢固的聚集在人脐静脉内皮细胞HUVEC表面,而非靶向组和抗体干预组未见造影剂与HUVEC的特异性结合。体外光声/超声显影实验显示,经脉冲激光辐照后,靶向造影剂组可检测到明显的光声信号和超声信号,与非靶向造影剂相比差异无统计学意义(P均0.05)。结论成功制备出靶向VEGFR2的光声/超声双模态造影剂,该造影剂在体外与HUVEC细胞具有较强的靶向结合能力且具备较好的光声/超声双模态显影效果。     

超声造影定量评价肾血流灌注研究进展

目前肾脏CEUS不再局限于对局灶性病变的研究,日渐倾向于肾脏血流灌注的定量评价。CEUS定量分析技术可用于评估肾脏的血流灌注情况。CEUS具有更高的时间和空间分辨率,可较灵敏地检出肾脏血流及灌注改变,为评价肾脏血流灌注提供了一种便捷、无创、有效、重复性好的新方法。本文就CEUS定量评价肾灌注的原理、方法、临床应用及研究进展进行综述。     

正常脾脏的声像图定量分析

正常脾脏的声像图定量分析廖翠蓉，邹建中，王志刚，刘宪随着超声诊断学的不断发展，Ｂ型超声显像诊断通常根据回声的强度、密度以自身各组织间内部回声强度的比较来识别组织的性质，从而做出正确的超声诊断，如何将声像图进行定量诊断分析，使由经验性判断为基础的诊断方...     

纳米抗体:一种潜力巨大的超声造影剂靶向分子

Gramiak等于1968年提出超声造影的概念，给超声诊断带来了新的希望，近年来超声造影剂的研究和开发取得了快速发展。第一代超声造影剂只能在右心系统显影；第二代造影剂经静脉注射后可通过肺循环达左心，使左心腔显影；第三代造影剂使用低弥散度、高分子量的氟烷类气体成分，提高了在循环中的稳定性，可达到冠脉循环使心肌显影，已用于体内许多重要器官（如心、肝、肾、子宫、卵巢等）和多种疾病（肿瘤、血管性疾病等）的检查。近年来，又设计出针对特定组织的靶向超声造影剂，通过改变造影剂外壳的组成成分或在外壳上连接针对组织特异性抗原的抗体及特异受体的配体，使造影剂更好地应用于显像和治疗。但目前的靶向超声造影剂尚存在一些不足，寻找高效、特异性强、稳定、穿透力强的靶向超声造影剂已成为超声分子成像领域最为重要的研究方向。最近研究发现的纳米抗体是构建理想靶向超声造影剂的良好靶向分子。     

脉冲超声辐照微泡增强脂质体介导基因转染的体外实验研究

目的 探讨脉冲超声辐照微泡超声造影剂提高脂质体介导增强型绿色荧光蛋白质粒在肝癌,细胞(HepG2)中转染率的可行性.方法 将HepG2接种在24孔板中,随机分为以下6组:①空白对照组;②质粒+脂质体组;③超声+质粒组;④超声+质粒+微泡组;⑤超声+质粒+脂质体组;⑥超声+质粒+脂质体+微泡组.荧光显微镜及流式细胞仪检测增强型绿色荧光蛋白表达及转染效率;MTT法检测此转染方法对HepG2生长活性的影响.结果 超声+质粒+脂质体组的转染效率最高,并对细胞活性无明显影响;而超声+质粒+脂质体+微泡组转染效率与超声+质粒+脂质体组比较差异无统计学意义(P＞0.05),但细胞活性与空白组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 脉冲超声辐照可介导基因转染,并能提高脂质体基因转染效率.同时,在一定条件下,超声微泡造影剂可提高超声介导基因转染效率,此方法可为基因转染提供新的思路.     

超声微泡介导绿色荧光蛋白基因在视网膜神经节细胞表达的实验研究

目的探讨超声微泡介导绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因在视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)中的转染效率、优化转染的条件及毒性。方法体外培养RGCs,以GFP基因为报告基因,微泡造影剂(声诺维)为载体,用超声辐照介导质粒pEGFP-N1转染RGCs。实验组为质粒组、微泡+质粒组、超声+质粒组、超声+微泡+质粒组,超声+微泡+质粒组根据转染条件不同分成亚组;对照组为空白对照。荧光显微镜和流式细胞仪测定GFP的表达,MTT法检测RGCs的活性。结果与超声+质粒组相比,超声+微泡+质粒组RGCs转染率增加约5倍。优化转染条件后,频率300kHz,声强1.25W/cm2,连续波,辐照时间60s,微泡浓度45μg/ml,质粒浓度50μg/ml时,24孔板培养的RGCs转染率为(26.87±3.12)%。毒性实验证明超声微泡在该条件下进行基因转染对RGCs无毒副作用。结论在一定条件下,超声破裂微泡能增强基因的转染与表达,有望成为一种安全、有效的基因载体。     

超声辐照载腺病毒靶向微泡增强报告基因在小鼠颅内胶质瘤中的转染效果

目的探讨低频聚焦超声辐照携载腺病毒靶向微泡增强基因转染颅内胶质瘤的效果。方法原位接种U251胶质瘤细胞制备小鼠颅内胶质瘤模型25只;制备可以携载腺病毒载体和偶联RGD肽的脂质体微泡,并检测其性状。筛选颅内胶质瘤直径3.0～4.0 mm的小鼠分为3组,Ⅰ组注射未携带腺病毒的非靶向微泡(对照组),Ⅱ组注射载腺病毒的非靶向微泡,Ⅲ组注射载腺病毒的靶向微泡,各组注射微泡后均接受超声辐照,频率1 MHz,强度0.7 W/cm~2,时间5 min;使用小动物活体荧光成像系统观察各组小鼠颅内荧光强度。结果制备的脂质体微泡直径为1.10～1.20μm,平均浓度(7.8±0.43)×10~8/ml,其可携带腺病毒,还可偶联RGD肽。MRI筛选颅内肿瘤直径3.0～4.0 mm的荷瘤小鼠15只,分为3组(每组5只),小动物活体荧光成像显示,与Ⅰ组和Ⅱ组比较,Ⅲ组小鼠颅内荧光强度显著增强(均P0.01)。结论静脉注射偶联RGD肽的载腺病毒靶向微泡可以将携载的目的基因有效地转染至颅内胶质瘤,为胶质瘤的基因治疗提供了一种新思路。     

低强度脉冲超声保护MPP+诱导的N2a细胞损伤的实验研究

目的 观察低强度脉冲超声（LIPUS）能否减弱1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP⁺）诱导的N2a细胞毒性，对帕金森病（PD）细胞模型发挥保护作用。方法 以MPP⁺作用于N2a细胞24 h，建立PD细胞模型，并对N2a细胞进行超声辐照（1 MHz，50 mW/cm²，脉冲重复频率1 kHz，辐照10 min）。将细胞分为对照组、超声对照（LIPUS）组、MPP⁺组和超声处理（MPP⁺+LIPUS）组，并给予相应处理。采用CCK8法测定细胞活力，DCFH-DA染色法检测细胞内活性氧簇（ROS）水平，JC-1染色法检测线粒体膜电位变化，Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况；以实时荧光定量PCR检测瞬时受体电位M7（TRPM7）的mRNA表达水平。结果 与对照组相比，MPP⁺组细胞存活率及线粒体膜电位显著降低，细胞内ROS水平和细胞凋亡明显增加（P均<0.01）；LIPUS辐照后，经MPP⁺诱导的细胞存活率和线粒体膜电位显著上升，细胞内ROS水平及细胞凋亡明显降低（P均<0.01）。MPP⁺组TRPM7的mRNA表达下降，MPP⁺+LIPUS组TRPM7表达显著升高（P均<0.01）。结论 LIPUS可增加MPP⁺诱导的N2a细胞存活率，减少线粒体膜电位损伤和ROS生成，抑制细胞凋亡，对MPP⁺的神经细胞毒性具有保护作用。     

载Fe3O4及液态氟碳高分子纳米粒的制备及其体外相变与双模态显影

目的探讨载Fe3O4同时包裹液态全氟己烷(PFH)的高分子造影剂的制备并评价其体外相变与双模态显影能力。方法采用乳化法制备可相变的磁性造影剂,检测其粒径、电荷、表面形态及内部结构,对不同浓度的纳米粒溶液行MR扫描并用原子吸收光谱法测量各样品中Fe浓度;用加热法激发纳米粒相变,显微镜观察相变后产生的微泡,在造影模式下观察造影剂相变后增强超声显影能力。结果成功制备出可相变磁性Fe3O4/聚乳酸/羟基乙酸[PLGA]/PFH纳米粒。体外MR显像表明其能明显降低T2*WI信号强度。当加热5min温度升高至55~65℃,纳米粒相变产生微泡,且可明显增强超声显影。结论制备的可相变磁性造影剂能明显降低T2*WI信号强度,加热可发生相变,增强超声显影,可为多模态成像技术的发展奠定一定的实验基础。     

超声心动图评价 慢性肾功能衰竭患者血液透析前后右心室功能

目的应用超声心动图评价慢性肾功能衰竭患者血液透析前后右心室容量和心肌力学参数变化情况。方法选取经临床确诊为慢性肾功能衰竭并行血液透析的患者100例,于血液透析前后行超声心动图检测三尖瓣侧壁瓣环收缩期位移(TAPSE)、右心室面积变化分数(RV FAC)及收缩期二维右心室游离壁峰值应变(2D RVFWLS);组织多普勒测量舒张期三尖瓣环运动速度(e、a)和收缩期三尖瓣反流峰值速度(TRmax)。比较透析前后上述各参数的变化情况;分析上述参数与透析超滤量的相关性。结果血液透析后患者体质量较透析前明显减低,差异有统计学意义(P0.05);透析后肱动脉收缩压和舒张压与透析前比较差异均无统计学意义。透析后TAPSE为(21.36±2.35)mm,较透析前(20.23±2.30)mm增加,差异有统计学意义(P0.05);透析前后RV FAC、2D RVFWLS、e/a及TRmax比较,差异均无统计学意义。透析后仅肱动脉舒张压与透析超滤量具有相关性(r=0.304,P=0.002)。结论 TAPSE与右心室容量负荷(前负荷)改变有关,提示血液透析可增强右心室游离壁纵向收缩功能,但与血液透析超滤量无关;透析超滤量影响肱动脉舒张压。