人类β3-糖基转移酶β3GnT8/β3GalT7在恶性血液系统肿瘤细胞中的表达差异及其原核表达和鉴定

目的研究一种新的人类β3-糖基转移酶β3GnT8/β3GalT7在恶性血液系统肿瘤细胞中mRNA水平的表达情况,并在原核体系中克隆和表达。方法运用半定量RT-PCR方法研究人β3GnT8/β3GalT7在13种恶性血液系统肿瘤细胞中的表达谱,以其中表达该基因最高的THP-1细胞的cDNA为模板,克隆目的基因,构建重组表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达。经超声裂菌,尿素溶解包涵体,过Ni-NTA琼脂糖层析柱纯化,透析复性浓缩后进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western blot验证。结果 K562、U937、THP-1和NB4细胞株均较高效表达β3GnT8/β3GalT7,其中THP-1细胞株表达最高;并成功构建原核表达载体pQE30-β3GnT8/β3GalT7,表达出相应的重组蛋白。结论人β3GnT8/β3GalT7在13株细胞中表达有显著差异,并获得大量较纯的目的蛋白,其分子量与预测相符,为单克隆抗体制备及进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础。     

高泌乳素血症中泌乳素成分分析及其临床价值

目的探讨巨泌乳素测定在高泌乳素血症诊断中的价值。方法对160例高泌乳素血症患者和110名健康体检者的皿清进行泌乳素值测定，然后用聚乙二醇（PEG）处理，再次测定其泌乳素水平，根据其回收率来区分真高泌乳素血症和巨泌乳素血症。结果高泌乳素血症患者中巨泌乳素血症检出率[22．50％（36／160）]明显高于健康体检者中巨泌乳素血症的检出率[0．91％（1／110）]（P〈0．01）。真高泌乳素患者经溴隐亭治疗后，泌乳素水平有所下降，临床症状有好转。结论用PEG沉淀法区分真高泌乳素血症和巨泌乳素血症对其治疗有重要意义。     

细胞表面α2,3唾液酸结构与胃癌细胞AGS增殖、迁移的关系及相关基因表达的初步研究

目的 检测6个α2,3唾液酸转移酶基因在胃癌细胞AGS的表达,以及AGS细胞表面的α2,3唾液酸结构对增殖、迁移能力的影响.方法 通过RT-PCR分别检测6个基因在胃癌细胞AGS mRNA水平的表达情况.以不同活性浓度的α2,3唾液酸酶处理AGS细胞,通过MTT法检测其生长曲线的改变,通过划痕试验检测其迁移能力的改变.结果 在胃癌细胞AGS中,α2,3唾液酸转移酶家族的6个成员有两个在mRNA水平表达.分别是ST3Gall和ST3Ga14;α2,3唾液酸酶处理后,AGS生长周期缩短,迁移能力显著增强.结论 AGS细胞表面的α2,3唾液酸结构可能通过影响细胞之间的识别、改变信号通路,延长AGS细胞的生长周期,抑制其迁移能力.     

小鼠多肽：N一乙酰氨基半乳糖转移酶家族分子进化的初步研穷

目的探讨小鼠多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族成员间的同源性，揭示其进化规律。为多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族各成员间结构相似但功能不同的特征提供一定的依据。方法采用生物信息学软件和网上数据库对核酸、蛋白质序列进行同源比较，结构域分析和进化树绘制。结果小鼠多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族一级结构、二级结构均有较高的同源性，系统进化树显示各成员来源于同一祖先并在不同时期分野。结论各成员来自于同一祖先的同一家族，结构相似，但其进化方式属于趋异性进化。     

胃癌中β3GnT8的表达及临床意义

目的探讨β3GnT8在胃癌中的表达及临床意义。方法制作胃癌组织芯片,采用免疫组化En Vision法检测β3GnT8、MMP-2、PCNA在胃癌及癌旁正常组织中的表达,并分析各蛋白之间表达的相关性及其与临床病理特征的关系。结果β3GnT8、MMP-2、PCNA在胃癌组织中的表达均高于癌旁正常组织(P=0. 001)。β3GnT8表达与胃癌临床分期(P=0. 001)、浸润深度(P=0. 011)、淋巴结转移(P=0. 003)呈显著正相关。β3GnT8表达与MMP-2(r=0. 703,P=0. 001)、PCNA的表达(r=0. 231,P=0. 024)呈显著正相关,β3GnT8阳性组的总体生存时间较阴性组显著缩短(χ2=3. 957,P=0. 047)。结论β3GnT8在胃癌中的表达增高,具有促进胃癌侵袭、转移的作用,与胃癌患者的不良预后有关。     

c-jun siRNA的构建及其对胃癌细胞株SGC7901中β3GnT8基因表达的影响

目的 构建c-jun干扰载体,有效沉默胃癌SGC7901细胞株中的c-jun基因表达,研究其对胃癌SGC7901细胞株中β3GnT8基因表达的影响.方法 ①利用互联网资源针对c-jun基因的靶序列设计合成四条siRNA,将四条siRNA插入到RNA干扰载体pGPU6/GFP/Neo中构建成四条干扰载体.②将构建好的c-jun siRNA载体质粒pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1949、pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1050、pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1111、pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1276通过阳离子脂质体将表达质粒分别转染SGC7901细胞,48h后荧光显微镜下观察不同浓度质粒的转染效率,通过RT-PCR法检测c-jun和β3GnT8基因mRNA的表达.结果 ①成功构建了四条正确的c-jun siRNA表达质粒;②成功筛选出一条对c-jun有明显抑制作用的siRNA干扰质粒,阻断c-jun表达后,糖基转移酶β3GnT8的表达受到明显抑制.结论 构建的c-jun siRNA表达质粒可以有效抑制胃癌SGC7901细胞株的c-jun基因表达,同时抑制糖基转移酶β3GnT8的表达,为研究胃癌的分子机制提供了一定的理论基础.     

人类β3GnT8/β3GalT7对人4IgB7-H3蛋白的翻译后糖基化修饰作用

目的探讨人类β1,3N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶8/β3半乳糖基转移酶7（β3GnT8/β3GalT7）与人4IgB7-H3蛋白的相互作用,以期阐明该糖基转移酶对人4IgB7-H3蛋白的翻译后糖基化修饰作用。方法在线预测软件预测人4IgB7-H3蛋白氨基酸序列上潜在的糖基转移酶作用位点;免疫共沉淀探讨β3GnT8/β3GalT7与人4IgB7-H3蛋白的相互结合作用;细胞免疫荧光化学技术研究两种蛋白质在细胞内的空间定位。结果人4IgB7-H3蛋白氨基酸序列上潜在的N-糖基化位点共有8个,O-β-GlcNAc的附着位置共有18个;β3GnT8/β3GalT7与人4IgB7-H3蛋白能相互结合而被共沉淀;两种蛋白质能在人肺癌A549细胞中共定位。结论人类β3GnT8/β3GalT7可能对人4IgB7-H3蛋白有糖基化修饰作用。     

人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶-2对胶质瘤细胞U251中MMP-2、TIMP-2 mRNA表达及细胞迁移能力的影响

目的探讨多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶-2（ppGalNAc-T2）对胶质瘤细胞侵袭转移的作用。方法将ppGalNAc-T2的真核表达正义载体、RNA干扰载体通过脂质体稳定转入胶质瘤细胞U251;通过荧光显微镜观察及RT-PCR检测ppGalNAc-T2的表达来确定载体正确转入细胞;细胞分为以下5组：U251转染正义载体组与空载体组、U251转染干扰载体组与对照载体组、U251未转染组,通过RT-PCR方法检测各组细胞基质金属蛋白酶（MMP）-2、基质金属蛋白酶抑制剂（TIMP）-2mRNA表达的变化;通过划痕法检测各组细胞的迁移差异。结果荧光显微镜观察及RT-PCR检测结果表明,载体成功转入细胞;RT-PCR检测结果发现,随着ppGalNAc-T2的增高,MMP-2的表达降低,而TIMP-2的表达升高（P〈0.05）;划痕结果显示,正义组细胞迁移能力随ppGalNAc-T2的上调而减弱（P〈0.05）,干扰组划痕修复较快（P〈0.05）,其他对照组相近（P〈0.05）。结论 ppGalNAc-T2的上调可抑制细胞的划痕修复,由此推测ppGalNAc-T2可能与胶质细胞的侵袭转移密切相关。     

ppGalN Ac-T1和-T2在乳腺癌相关药物敏感性、细胞凋亡及侵袭中的作用

目的 探讨N-乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAc-T )1和-T2对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231恶性表型的影响.方法 分别将 siRNA-ppGalNAc-T1(A组)、siRNA-ppGalNAc-T2 (B组)和空载体对照(C组)转染MDA-MB-231细胞.采用荧光定量PCR检测ppGalNAc-T1和-T2 mRNA表达 ,MTT法和 Hoechst 33258染色分别检测各组对多西他赛和吉西他滨的药物敏感性及细胞凋亡率的变化 ,T ransw ell实验检测各组细胞的侵袭能力.结果 M DA-M B-231细胞中ppGalNAc-T1和-T2 mRNA表达水平均高于正常乳腺细胞(P＜0 .05).与C组相比 ,A组、B组药物敏感性和细胞凋亡率升高(P＜0 .05) ,而细胞侵袭能力受到抑制(P＜0 .05).结论 ppGalNAc-T1和-T2可能是潜在预测和治疗三阴性乳腺癌的有效靶点.     

博来霉素致C57小鼠肺纤维化分子靶点的探寻

目的探寻博来霉素（BLM）致C57小鼠肺纤维化分子靶点。方法应用BRB-ArrayTools软件中justR-MA算法分析BLM（实验组）和生理盐水（对照组）作用于C57小鼠1、3、14d后肺组织基因表达谱数据集GSE485,找出差异表达基因;应用DAVID在线工具对这些基因进行功能聚类,结合《京都基因与基因组百科全书》和BioCar-ta进行生物学通路分析;应用MSigDB搜寻[-2kb,2kb]区域富集的转录因子结合位点。结果分别筛选出190、345、527个差异表达基因;按功能显著聚集的有趋化因子、膜蛋白、血清蛋白、补体成分、免疫球蛋白、钙黏蛋白、基质金属蛋白酶、前胶原类;受调控的有Toll样受体、CCR5、ECM受体、补体途径、TGF-β生物学通路;富集度较高的有AP1、SRF、NFKAPPAB转录因子。结论 AP1、SRF和RhoA可能是BLM致C57小鼠肺纤维化的分子靶点。