维吾尔族宫颈鳞癌C/EBPα基因甲基化意义

目的探讨维吾尔族宫颈鳞癌C/EBPα基因（CCAAT/enhancer-binding proteinαgene）启动子区甲基化的意义。方法收集19例维吾尔族宫颈鳞癌组织和17例宫颈正常组织,提取基因组DNA,用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析技术（MALDI-TOF）检测C/EBPα基因启动子区CpG岛甲基化状态。结果 （1）C/EBPα基因启动子区CpG岛甲基化程度在19例维吾尔族宫颈鳞癌病例组与17例对照组中各为（0.137 1±0.088 36）与（0.115 6±0.087 28）,差异有统计学意义（Z=-2.840,P=0.005）;（2）维吾尔族宫颈鳞癌病例组C/EBPα基因启动子区CpG₁、CpG₅和CpG₁4.15甲基化程度各为（0.095 9±0.053 16）（、0.072 1±0.025 07）和（0.261 3±0.050 83）,明显高于对照组的（0.068 1±0.076 09）（、0.044 7±0.026 25）和（0.191 7±0.070 69）,差异有统计学意义（P<0.05）;（3）患者年龄、高危型人类乳头瘤病毒16（HPV16）感染与C/EBPα基因启动子区CpG岛高甲基化状态无关（P>0.05）。结论 C/EBPα基因启动子区CpG岛、尤其是CpG₁、CpG₅和CpG₁4.15的高甲基化状态可能导致该基因沉默,从而促进维吾尔族宫颈鳞癌的发生发展。     

c-myc与PCNA在哈萨克族食管癌组织中的表达及其临床相关性研究

目的：研究肿瘤相关基因c-myc和PCNA在哈萨克族食管癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法：采用逆转录聚合酶链式反应方法（RT-PCR）检测48例哈萨克族食管癌切除标本中癌组织与远端正常组织c-myc与PCNA mRNA表达水平,并分析两者与临床病理指标的关系。结果：癌组织中c-myc mRNA表达阳性率（79.2%）高于其远癌正常组织为（56.3%）,其差异具有统计学意义（P〈0.05）;癌组织中PCNA mRNA表达阳性率（100%）高于癌远端正常组织（47.9%）,其差异具有统计学意义（P〈0.05）;在临床早期病例中c-myc基因在癌组织及癌远端正常组织中的差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：c-myc及PCNA基因的mRNA水平升高可能是哈萨克族食管癌组织中的频发事件,c-myc可能参与了哈萨克族食管癌发生的早期过程。     

基于磁共振技术的应激性高血压大鼠模型血清代谢组学研究

目的建立应激性高血压(SIH)模型大鼠,探讨其血清代谢组分的变化。方法选取鼠龄在6～8周的Wistar大鼠(雄性)30只,随机分为SIH模型组(20只)与对照组(10只),适应性喂养7d后,SIH模型组每天制动、夹尾、间断足底电刺激、声光电刺激等进行SIH模型的构建,持续刺激9周后,SIH模型组最终造模成功6只,对照组同期进行正常喂养。通过采用磁共振(NMR)技术结合模型识别和正交偏最小二乘判别(OPLS-DA)分析方法检测SIH模型大鼠血清中代谢组分的变化。结果与对照组相比,SIH模型组大鼠血清中糖蛋白、β-葡萄糖、极低密度脂蛋白(VLDL)、乙酰乙酸、肉碱、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸含量升高(相关系数r分别为-0.71、-0.76、-0.80、-0.75、-0.82、-0.73、-0.82、-0.72;均P0.05)。结论 SIH模型大鼠存在脂代谢、糖代谢和氨基酸代谢异常。     

Atg2基因敲除对人骨肉瘤U2OS细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨自噬相关基因2(Autophagy-related gene 2,Atg2)对人骨肉瘤U2OS细胞增殖和迁移的影响。方法 蛋白质免疫印迹法鉴定两组细胞，即腺病毒介导CRISPR/Cas9系统靶向剪切AAVS1位点的基因未敲除组(AAVS1细胞)和Atg2ab基因双敲除组(Atg2ab DKO细胞);细胞划痕实验和Transwell小室法检测两组细胞的迁移能力；CCK-8法和细胞平板克隆形成实验检测两组细胞的增殖能力。结果 Atg2ab DKO细胞在24、48及72 h的光密度值(OD值)均较对照AAVS1细胞有所降低，但在72 h时，两种细胞的OD值差异有统计学意义(P<0.01)。Atg2ab DKO细胞形成的克隆数量少于对照组AAVS1细胞(6.33±2.31 vs15.00±1.00),差异有统计学意义(P<0.01)。Atg2ab DKO细胞创面愈合率(0.22±0.05)%显著低于对照组AAVS1细胞(0.82±0.05)%,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组AAVS1细胞相比，Atg2ab DKO细胞穿过Transwell小室的细胞数量显...     

甲状腺乳头状癌与基质金属蛋白酶抑制因子3（TIMP3）基因启动子甲基化的关系研究

目的 研究基质金属蛋白酶抑制因子3（TIMP3）基因启动子甲基化水平与甲状腺乳头状癌发生的内在联系,建立基于启动子高甲基化抑癌基因的甲状腺乳头状癌早期诊断方法 。方法 收集甲状腺手术切除的组织标本共46例,其中甲状腺乳头状癌（Papillary thyroid carcinoma,PTC）29例,结节性甲状腺肿（nodular goiter）17例。经提取DNA,设计并合成BSP引物,PCR扩增,采用亚硫酸氢盐法克隆测序（bisulfite sequencing）和Sequenom Mass ARRAY甲基化DNA定量分析法检测甲状腺乳头状癌组织TIMP3基因启动子CpG片段的甲基化水平。结果 亚硫酸盐修饰测序结果 显示TIMP3基因在甲状腺乳头状癌组织中的高甲基化克隆百分比为70％,显著高于结节性甲状腺肿的0％（P〈0．05）。TIMP3基因启动子区5个CpG位点在甲状腺乳头状癌组织中的甲基化有呈较高的甲状腺乳头状癌特异性。Sequenom Mass ARRAY提供的单一CpG位点甲基化定量数据显示TIMP3基因在甲状腺乳头状癌组织的甲基化率均值（0．28）高于结节性甲状腺肿的甲基化率均值（0．15）,差异有统计学意义（P〈0．05）。TIMP3基因启动子3个CpG位点在甲状腺乳头状癌组织中的甲基化率均值高于结节性甲状腺肿甲基化率,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 TIMP3基因CpG-16及CpG-17位点可能为甲状腺乳头状癌的启动子甲基化检测的关键位点,有望成为甲状腺癌早期诊断的分子标志物。     

STAT3基因在异常黑胆质型肝癌病证大鼠模型肝脏中的表达及意义

目的：建立维吾尔医异常黑胆质型肝癌病证大鼠模型,探讨信号转导及转录活化因子3（STAT3）基因在异常黑胆质型肝癌病证发生发展中的作用及意义。方法利用异常黑胆质证造模法及二乙基亚硝胺诱导建立异常黑胆质型肝癌病证模型组、肝癌对照组,同时设立正常对照组。应用半定量PCR（RT-PCR）检测各组肝脏组织中STAT3基因的 mRNA水平的表达,免疫组织化学 SP法和蛋白免疫印记法（Western blot）检测各组肝脏组织中STAT3基因的蛋白水平的表达。结果肝癌对照组与正常对照组相比,STAT3基因的 mRNA水平明显上调,差异有统计学意义（P ＜0．01）,异常黑胆质型肝癌病证模型组与肝癌对照组相比,STAT3基因的 mRNA水平明显上调,差异有统计学意义（P ＜0．01）。免疫组化 SP法及 Western blot结果显示肝癌对照组 STAT3蛋白表达水平高于正常对照组,差异有统计学意义（P ＜0．01）,异常黑胆质型肝癌病证模型组 STAT3蛋白表达水平高于肝癌对照组,差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论在异常黑胆质型肝癌的发生过程中,二乙基亚硝胺（DEN）是肝癌发生的主要原因,异常黑胆质体液起了促进作用。异常黑胆质体液可能通过对 STAT3肝癌基因的影响,促进异常黑胆质型肝癌的发生、发展。     

维吾尔族妇女宫颈癌及癌前病变组织中 EGR1和 ID4基因表达下调与 HPV 感染的关系

目的：探讨宫颈癌及癌前病变组织中基因下调表达调控与人乳头状瘤病毒（human papillomavirus, HPV）感染的依存关系,为建立 HPV 筛查预警的宫颈癌辅助诊断指标提供依据。方法收集维吾尔族妇女宫颈鳞癌（cervical squamous cell carcinoma,CSCC）、宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia,CIN）Ⅱ～Ⅲ及宫颈炎患者的新鲜宫颈上皮组织标本共100例,提取组织 DNA 和 RNA,鉴定 HPV 阳性和型别,选择 HPV 阳性CSCC 和 CINⅡ～Ⅲ及 HPV 阴性宫颈炎组织 RNA,利用荧光定量 RT-PCR 方法鉴定早期生长反应基因-1（EGR1）、DNA 结合抑制因子4（ID4）、FBJ 鼠科骨肉瘤病毒原癌基因（FOS）和早期应急蛋白2（IER2）基因的转录表达水平。结果通过 HPV 阳性鉴定和分型,鉴别出 HPV16、18、45、31等8种 HPV 感染型别,宫颈癌、CIN 和宫颈炎组织的 HPV 阳性率分别为94．4％、75．0％和31．3％,其中 HPV16阳性率为66．6％、68．7％和31．3％;HPV 阳性的 CSCC 组织中 EGR1、ID4、FOS 和 IER2基因的 mRNA 表达水平低于 HPV 阳性的 CIN 和 HPV 阴性宫颈炎,且 CSCC 与 CIN 或 NC 比较差异均有统计学意义（P ＜0．05）,而 HPV 阳性的 CIN 组织中4种基因的表达水平均低于 HPV 阴性的宫颈炎组织,两者 EGR1和 ID4基因表达水平差异有统计学意义（P ＜0．05）;从 HPV16感染的角度分析,CSCC 或 CIN 与宫颈炎 EGR1和 ID4表达水平差异有统计学意义（P ＜0．05）,但是 CSCC 与 CIN 相比较,只有 EGR1基因表达水平差异有统计学意义（P ＜0．05）,而 ID4基因差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论宫颈癌及癌前病变与依赖于 HPV 感染的 EGR1和 ID4基因表达下调有关,其中 EGR1基因表达水平变化可能与癌前病变和 HPV16感染的关系更为密切,可能成为 HPV 筛查预警的宫颈癌辅助诊断指标,并为揭示 HPV感染的致病和致癌分子机制提供了重?     

糖康对糖尿病大鼠视网膜组织中NF-κB信号通路的影响

目的从视网膜微血管形态学和细胞分子两个水平,观察糖康对糖尿病大鼠视网膜病变的影响并探讨其具体作用机制,为糖康防治糖尿病视网膜病变提供理论依据。方法采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ）复制糖尿病模型并随机分为正常组、模型组、糖康高、中和低剂量组和达纳康组,每日灌胃,定期检测大鼠体重和非空腹血糖。第12周末,消化铺片法观察视网膜微血管病理和形态学改变。Western blot检测NF-κB亚基P65在细胞核内的含量。RT-PCR检测其下游靶基因Bax和IL-1β的表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠视网膜呈现较多的无细胞毛细血管条索数（约为正常组的12.16倍）。与模型组比较,各治疗组无细胞毛细血管条索数明显减少（P〈0.01）。与正常对照组比较,模型组NF-κB蛋白表达明显上调（P〈0.01）,各治疗组NF-κBP65蛋白在视网膜组织的表达不同程度降低,以糖康高剂量组最为显著。与正常组比较,模型组大鼠视网膜Bax和IL-1β的mRNA表达明显上调（P〈0.01）。与模型组比较,各治疗组大鼠视网膜Bax和IL-1β的mRNA表达均不同程度降低,以糖康高剂量组最为显著。结论糖康能够明显抑制糖尿病大鼠视网膜组织NF-κB活性及其下游靶基因Bax和IL-1β的表达水平,通过多途径、多靶点拮抗视网膜细胞凋亡和炎症反应,保护视网膜组织,延缓了糖尿病视网膜病变的发生、发展。