GH/tPA双转基因小鼠的制备及其表达分析

目的 旨在获得GH/tPA双转基因小鼠,并比较分析小鼠乳腺中人组织纤溶酶原激活剂（tPA）的表达水平和个体生长发育状况。方法 利用2只tPA单转基因雄性小鼠（P03、P05）与经超数排卵处理的正常非转基因雌性小鼠交配,受精卵显微注射线性化的GH质粒、胚胎移植而获得后代小鼠,PCR检测基因整合情况,ELISA和Western blotting检测比较单、双基因表达tPA水平,监测转基因小鼠不同生长阶段的体质量来分析GH基因对小鼠生长发育的影响。结果 P03系小鼠共获得286枚受精卵,移植受体母鼠后,顺利产仔77只,经PCR检测获得16只tPA单转基因小鼠（7♂,9♀）,13只GH/tPA双转基因小鼠（8♂,5♀）,双基因整合率为16.9%;P05系小鼠共获得175枚受精卵,移植受体母鼠后,顺利产仔34只,经PCR检测获得12只tPA单转基因小鼠（5♂, 7♀）,7只GH/tPA双转基因小鼠（3♂,4♀）,双基因整合率为20.6%。单、双转基因小鼠乳腺中表达tPA的最高量分别为82.5 μg/mL、674 μg/mL,GH/tPA双转基因小鼠乳腺中表达tPA的量明显高于tPA单转基因（P<0.05）。在小鼠的整个生长周期内,单、双转基因与正常非转基因小鼠的体质量增长均没有显著的差异（P>0.05）。结论 本实验成功地制备了GH/tPA双转基因小鼠,结果表明GH基因导入小鼠体内能够显著地提高目的基因tPA的表达水平,且不会对转基因小鼠的生长发育造成任何明显的影响,这为将来制备高表达转基因动物生产医药蛋白及其育种奠定了基础。     

miR⁃16/15a-/-小鼠NK细胞功能及其对结肠癌移植瘤敏感度分析

目的：观察miR?16是否通过调节NKG2D表达而影响自然杀伤（natural killer,NK）细胞的生物学功能及其抗肿瘤活性。方法：miR?16/15a-/-小鼠和对照小鼠经皮下注射MC38细胞制备结肠癌移植瘤模型,观察两组小鼠皮下实体瘤生长情况;比较普通小鼠生理或荷瘤状态下NK1.1+NKG2D+细胞和NK1.1+NKG2D?细胞内miR?16的表达;分析生理及荷瘤状态下miR?16/15a-/-小鼠NK细胞NKG2D表达、γ干扰素（interferon?γ,IFN?γ）分泌及细胞毒性作用。结果：与同品系小鼠比较,miR?16/15a-/-小鼠中MC38结肠癌移植瘤的生长受到显著抑制,生理状态小鼠NK1.1+NKG2D+细胞miR?16的表达明显低于NK1.1+NKG2D?细胞,而在荷瘤小鼠来源的两组细胞中无明显差异;与野生型小鼠相比,生理及荷瘤状态下的miR?16/15a-/-小鼠NK1.1+NKG2D+细胞的比例及NK细胞活性无明显变化。结论：miR?16/15a敲除抑制MC38结肠癌移植瘤生长,而miR?16/15a敲除小鼠体内NK细胞的比例及功能及荷瘤状态下NK细胞活性并无明显变化,提示miR?16/15a缺失并非通过NK细胞抑制MC38结肠癌移植瘤生长。     

南蛇藤素抗动脉粥样硬化机制的研究进展

动脉粥样硬化(As)是心血管系统疾病中的常见疾病。As的病理生理基础为内膜的脂质累积、纤维组织增生、钙质沉着,继发斑块内出血、斑块破裂、局部血栓形成,最终导致急性心脑血管事件。而在抗As方面,中药的某些成分较西药有更低的毒性和更好的药物耐受性,其中南蛇藤素作用显著。南蛇藤素是一种具有多种生物活性的天然物质,有良好的药理活性。其主要从抑制炎症反应、调节脂质代谢、保护血管内皮细胞等方面发挥作用。未来,对南蛇藤素进行深入研究有利于开发更有针对性的As药物靶点。     

腹泻型肠易激综合征小鼠三种造模方法的比较*

目的：分别采用单纯番泻叶灌胃法和两种束缚应激方法联合番泻叶灌胃制备腹泻型肠易激综合征(irritable bowel syndrome with diarrhea, IBS-D)小鼠模型,以探讨高效、简便的造模方法。方法：将ICR小鼠随机分为4组,分别为空白对照组(N)、单纯灌胃组(F)、四肢捆绑组(S)及离心管组(L),每组10只。单纯灌胃组直接灌服番泻叶水煎剂(质量浓度为0.5 g/mL,剂量为10 mL/kg);四肢捆绑组小鼠灌服番泻叶水煎剂后用棉绳捆绑四肢于鼠笼上1 h;离心管组小鼠灌服番泻叶水煎剂后用50 mL离心管固定1 h;空白对照组小鼠灌服同等体积的生理盐水。每日观测各组小鼠的体质量变化、采食、排便和存活情况并于第7天观测其免疫器官萎缩情况。结果：3组造模小鼠均无死亡。与空白对照组小鼠相比,单纯灌胃组、离心管组和四肢捆绑组出现了体质量下降(P＜0.01)、采食量下降(P＜0.05)、稀便率增加(P＜0.01);离心管组和四肢捆绑组小鼠的脏体指数降低,说明其免疫器官萎缩,与单纯灌胃组与空白对照组差异有统计学意义(P＜0.05)。结论：四肢捆绑法和离心管固定法均较好地复制了IBS-D小鼠模型。离心管固定法更简单易行,是3种方法的首选。     

虚拟现实技术在神经系统疾病功能康复中的应用现状

虚拟现实技术是一种通过计算机进行场景模拟的新兴技术,近年来逐步运用于神经系统功能康复领域并取得了显著疗效。本文主要介绍虚拟现实技术在帕金森病、脑卒中、多发性硬化、脑瘫和创伤性脑损伤中的研究进展,并就虚拟现实康复目前的优势、局限性及研究发展方向进行综述。     

鸡精原干细胞分离培养的影响因素

目的:比较不同分离方法和培养体系对鸡精原干细胞(SSCs)生长的影响。方法:采用3种分离方法、6种培养体系对SSCs进行分离培养。结果:胶原酶 胰蛋白酶组合消化睾丸后获得的平均活细胞率显著地高于其余两种方法。在有和无饲养层细胞存在的条件下,SSCs在DMEM培养液中存活的时间分别为6.5 d和45.5 d,显著地长于在TCM199和RRMI1640中。在6种培养体系中,SSCs在有饲养层体系Ⅳ中存活时间和碱性磷酸酶(AKP)阳性克隆率分别为(45.5±3.2)d和31%±16%,显著地高于其他5种培养体系。SSCs在有饲养层体系Ⅳ中传代传至1、2和3代时,AKP阳性克隆率分别为31.6%、20%和18%。SSCs形成的克隆,经SSEA-1免疫染色,均为阳性。传代至第3代的SSCs,其染色体组型保持不变。结论:采用二酶组合法分离获取SSCs,而以DMEM为基础液形成的有饲养层体系Ⅳ较为适宜。     

炎症性疾病中细胞色素P450表达调控的研究进展

细胞色素P450(cytochrome P450,CYPs)是人体内催化外源化合物氧化反应的主要代谢酶,参与了近90％药物的代谢.在炎症性疾病过程中,CYPs家族某些成员的表达可能会下降从而改变药物的代谢表型,对CYPs的诱导或抑制可能改变药物代谢速度,进而影响体内药物的浓度.而在此过程中影响CYPs的机制可能与Th1细胞分泌的IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-y,Th2细胞分泌的IL-4、IL-5、IL-10、IL-13、TGF-β,核受体和microRNA有关.本文综述炎症性疾病中CYPs的调节作用及相关机制,为炎症性疾病临床用药提供参考.