40岁以上高龄女性体外受精-胚胎移植妊娠结局分析

目的：探讨40岁以上高龄女性体外受精-胚胎移植（IVF-ET）的妊娠结局，旨在为高龄女性提供生育咨询以及为改善高龄女性个体化辅助生殖治疗结局提供临床依据。方法：选择我院生殖中心2015年1月—2017年12月女方年龄≥40岁且使用自身卵子行体外受精的共2 467个治疗周期资料，对各项临床数据进行回顾性分析。结果：40岁及以上行辅助生殖治疗的患者，随着女性年龄增加获卵数明显减少（40～48岁女性平均获卵数分别为2.97、 2.69、2.17、2.01、1.77、1.61、1.68、1.29和1.00，44～48岁与40～43岁依次组间比较均P＜0.05），尤其是44岁以上女性胚胎发育潜能明显降低（40～48岁囊胚形成率分别为48.90%、43.72%、33.67%、34.29%、24.39%、21.14%、26.32%、16.67%和0%，44～48岁与40～43岁组间依次比较均P＜0.05）。共有518个周期行新鲜胚胎移植，结果显示，随女性年龄增加，临床妊娠率（40～48岁临床妊娠率分别为26.92%、21.15%、20.79%、10.96%、18.87%、11.11%、5.88%、0%和0%，43～48岁与40～42岁组间依次比较均P＜0.05）、种植率（40～48岁种植率分别为23.65%、19.51%、17.70%、8.54%、7.49%、10.81%、5.56%、0%和0%，43～48岁与40～42岁组间依次比较均P＜0.05）和活产率均显著降低（40～46岁活产率分别为18.46%、10.58%、9.90%、5.48%、5.66%、2.78%和5.88%，43～46岁与40～42岁组间依次比较均P＜0.05），43岁以上者结局更差。44岁以上女性自然流产率明显增高（40～45岁流产率分别为31.43%、50.00%、52.38%、50.00%、70.00%和75.00%，44～45岁与40～43岁组间依次比较均P＜0.05）。46岁女性仅1例妊娠并分娩，47岁和48岁女性均无成功妊娠。与抗苗勒管激素（AMH）＞1.0 ng/mL组相比，AMH≤1.0 ng/mL组妊娠率、种植率及活产率均显著下降（27.04% vs. 14.74%，22.99% vs. 13.50%，15.88% vs. 7.37%；均P＜0.05），流产率明显升高（41.27% vs. 50.00%，P＜0.05）。结论：≥40岁高龄女性随年龄增长生育力逐渐降低。40～43岁年龄段女性助孕仍有一定的价值，尤其是卵巢仍有一定储备者（AMH＞1.0 ng/mL），但44岁以上女性原则上不再建议ART助孕，对于46岁以上卵巢功能衰竭的女性强烈建议卵子捐赠或收养。     

JAK2/STAT3通路参与过氧化氢抑制小鼠原代颗粒细胞增殖的研究

目的通过过氧化氢(H2O2)处理体外培养的小鼠原代颗粒细胞(mGC),探讨JAK2/STAT3信号通路在H2O2抑制mGC增殖中的作用。方法应用H2O2、JAK2抑制剂AG490(不同浓度、不同作用时间)处理mGC;用CCK-8、增殖细胞核抗原蛋白(PCNA)水平检测细胞增殖情况,RT-PCR检测JAK2mRNA水平,Western blot检测JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、Cyclin D1的蛋白表达水平。结果 H2O2与AG490均以剂量和时间依赖方式降低mGC活率。750μmol/L的H2O2处理mGC 24h明显降低细胞活率(P0.01),降低PCNA蛋白水平(P0.01),并下调JAK2mRNA和蛋白表达水平(P0.01);80μmol/L的JAK2抑制剂AG490可降低细胞活率(P0.01),且使细胞中的p-JAK2、JAK2、STAT3、p-STAT3、PCNA、Cyclin D1表达均下降(P0.05)。结论 H2O2抑制mGC增殖可能与JAK2/STAT3信号通路有关。     

甲型血友病胚胎植入前遗传学诊断成功一例

1临床资 育龄夫妇（女方29岁）因甲型血友病（HaemophiliaA）生育风险，于2011年11月1日到南京医科大学第一附属医院生殖医学科门诊咨询。女方弟弟患有甲型血友病，基因检测发现F8 c.3385 C＞T半合子突变，女方及其母亲为F8 c.3385 C＞T杂合突变携带者，家系图及突变位点见图1。     

体外受精子代小鼠性成熟期心血管功能的评估

目的探讨体外受精(IVF)子代心血管系统的安全性。方法利用C57BL/6J小鼠建立IVF子代小鼠模型(IVF组,n=12),以C57BL/6J自然妊娠子代小鼠为对照组(n=12),观察比较小鼠性成熟期的体质量、血压,并利用彩色超声评估其心脏结构及功能。结果 12周龄IVF组子代小鼠的体质量[(26.13±4.58)g]高于对照组[(22.50±2.37)g],差异有统计学意义(P0.05);仔鼠的血压组间无统计学差异(P0.05)。彩色超声显示仔鼠心血管功能的主要指标(对照组,IVF组),左心室射血分数(65.41%±5.26%,65.77%±6.71%)、左室短轴缩短率(35.41%±4.05%,35.81%±4.84%)、颈动脉中内膜厚度[(0.05±0.01)mm,(0.05±0.01)mm]等无统计学差异(P0.05);左房内径[(2.13±0.12)mm,(2.25±0.10)mm]、左心室质量指数[(8.24±0.46)g/m~2,(11.87±2.03)g/m~2]、主动脉内径[(1.33±0.06)mm,(1.45±0.11)mm]3项指标IVF组显著高于对照组(P0.05)。结论 IVF子代小鼠与自然妊娠小鼠相比,部分心血管指标存在差异,提示IVF对性成熟期子代小鼠的心血管结构与功能可能存在潜在的影响,需要更多的远期随访。     

拮抗剂方案中应用促性腺激素释放激素激动剂诱发卵母细胞成熟后不同黄体支持方案对妊娠结局的影响——一项提前终止的前瞻随机临床对照研究

目的 (1)在促性腺激素释放激素拮抗剂(GnRH-ant)方案中应用促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)诱发卵母细胞最终成熟后,在黄体支持方案中比较孕激素+人绒毛膜促性腺激素(HCG)和孕激素+雌激素两种不同的黄体支持方案对妊娠结局的影响;(2)在GnRH-ant方案中比较添加高纯度人绝经期促性腺激素(HP-HMG)和添加人重组黄体生成素(rLH)对妊娠结局的影响.方法 前瞻随机对照的临床实验.对照组32例,添加rLH,GnRH-a诱发卵母细胞最终成熟后12h添加1,000 IU、35 h添加500 IU HCG,取卵后应用孕激素;实验Ⅰ组37例,添加HP-HMG,黄体支持方案同对照组;实验Ⅱ组33例,添加HP-HMG,取卵后应用孕激素和雌激素.结果 对照组、实验Ⅰ组和实验Ⅱ组的新鲜周期胚胎移植周期临床妊娠率分别是38.10％、23.08％和8.70％,实验Ⅱ组新鲜周期临床妊娠率明显低于本中心质控标准,该临床实验提前终止.对照组、实验Ⅰ组和实验Ⅱ组未妊娠者已有33例进行了冷冻胚胎移植周期,其临床妊娠率分别为50.00％,63.64％和57.14％.三组均无中重度卵巢过度刺激综合征(OHSS)发生.结论 拮抗剂方案中应用GnRH-a诱发卵母细胞成熟可以避免中重度OHSS的发生,且不影响胚胎质量.GnRH激动剂诱发卵母细胞成熟对黄体功能和内膜容受性存在不利影响,单纯补充雌孕激素无法替代HCG的作用.     

40岁以上高龄女性体外受精-胚胎移植妊娠结局分析

目的:探讨40岁以上高龄女性体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的妊娠结局,旨在为高龄女性提供生育咨询以及为改善高龄女性个体化辅助生殖治疗结局提供临床依据。方法:选择我院生殖中心2015年1月—2017年12月女方年龄≥40岁且使用自身卵子行体外受精的共2 467个治疗周期资料,对各项临床数据进行回顾性分析。结果:40岁及以上行辅助生殖治疗的患者,随着女性年龄增加获卵数明显减少(40～48岁女性平均获卵数分别为2.97、2.69、2.17、2.01、1.77、1.61、1.68、1.29和1.00,44～48岁与40～43岁依次组间比较均P0.05),尤其是44岁以上女性胚胎发育潜能明显降低(40～48岁囊胚形成率分别为48.90%、43.72%、33.67%、34.29%、24.39%、21.14%、26.32%、16.67%和0%,44～48岁与40～43岁组间依次比较均P0.05)。共有518个周期行新鲜胚胎移植,结果显示,随女性年龄增加,临床妊娠率(40～48岁临床妊娠率分别为26.92%、21.15%、20.79%、10.96%、18.87%、11.11%、5.88%、0%和0%,43～48岁与40～42岁组间依次比较均P0.05)、种植率(40～48岁种植率分别为23.65%、19.51%、17.70%、8.54%、7.49%、10.81%、5.56%、0%和0%,43～48岁与40～42岁组间依次比较均P0.05)和活产率均显著降低(40～46岁活产率分别为18.46%、10.58%、9.90%、5.48%、5.66%、2.78%和5.88%,43～46岁与40～42岁组间依次比较均P0.05),43岁以上者结局更差。44岁以上女性自然流产率明显增高(40～45岁流产率分别为31.43%、50.00%、52.38%、50.00%、70.00%和75.00%,44～45岁与40～43岁组间依次比较均P0.05)。46岁女性仅1例妊娠并分娩,47岁和48岁女性均无成功妊娠。与抗苗勒管激素(AMH)1.0 ng/mL组相比,AMH≤1.0 ng/mL组妊娠率、种植率及活产率均显著下降(27.04%vs. 14.74%,22.99%vs. 13.50%,15.88%vs. 7.37%;均P0.05),流产率明显升高(41.27%vs. 50.00%,P0.05)。结论:≥40岁高龄女性随年龄增长生育力逐渐降低。40～43岁年龄段女性助孕仍有一定的价值,尤其是卵巢仍有一定储备者(AMH1.0 ng/mL),但44岁以上女性原则上不再建议ART助孕,对于46岁以上卵巢功能衰竭的女性强烈建议卵子捐赠或收养。     

促甲状腺激素(TSH)水平对IVF/ICSI妊娠结局的影响

目的:探讨在IVF/ICSI-ET周期中患者基础促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)水平与临床妊娠结局的关系。方法:回顾性分析第1次行IVF/ICSI-ET不孕患者的促排卵结局与TSH的相关性。结果:①在1 832个IVF/ICSI周期中,TSH与PRL水平呈正相关(r=0.080,P=0.002),而与获卵数、受精卵子数、受精率、可移植胚胎数、优质胚胎数、孕囊与心芽搏动数、种植率、生化妊娠率、流产率、活产率无明显相关性(P>0.05);PRL与获卵数呈正相关(r=-0.050,P=0.032),但不影响后期的受精、可移植胚胎数、优质胚胎数、着床及后期的生化妊娠率、临床妊娠率及活产率。控制PRL后对TSH本身与获卵数行相关性分析,结果两者间无相关性(r=0.004,P=0.874)。②分别比较不同TSH界值下高于界值与低于界值组的获卵数、受精卵子数、受精率、可移植胚胎数、优质胚胎数、孕囊与心芽搏动数、种植率的情况,结果界值上、下组间实验室及临床相关指标无明显差异。但当TSH界值分别为2.7 mIU/L、3.3 mIU/L、3.9 mIU/L时,低、高组间的活产率分别为83.1%和81.0%,82.3%和78.9%,83.9%和70.3%,流产率分别为16.1%和19.0%,17.7%和21.1%,16.1%和19.7%,虽未达到统计学差异,但低水平TSH组的流产率较高水平TSH组相对较低,活产率较高,并随着界值的增大,界值上、下组间的活产率与流产率差距增大。结论:在0.3~4.2 mIU/L区间,TSH水平对于IVF/ICSI-ET的妊娠结局无明显影响。当基础TSH水平>2.7 mIU/L时,流产率有上升趋势,活产率有下降趋势,需对孕妇孕期情况进行密切随访。     

不同胚胎移植策略对体外受精临床结局的影响

目的:比较人类胚胎体外培养第3天4种胚胎移植策略的临床结局。方法:回顾性分析了本中心2010年1月—2012年12月收治的≤35岁患者的第3天胚胎移植周期,均为第一次促排卵周期,采用控制性促排卵长方案和短方案,排除供精周期和遗传性疾病患者,获卵数≥2个。根据移植胚胎数及评分(评为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级,Ⅰ、Ⅱ级为高评分胚胎,Ⅲ、Ⅳ级为低评分胚胎)分为4组:A组移植1枚高评分胚胎,B组移植2枚高评分胚胎,C组移植1枚高评分胚胎和1枚低评分胚胎,D组移植2枚低评分胚胎。比较4组的临床妊娠率、胚胎着床率、双胎率、流产率和活产率。结果:4组的流产率分别为8.67%、10.34%、13.54%、20.00%,差异无统计学意义(χ2=4.146,P=0.246);B组的每周期临床妊娠率和活产率分别为55.94%、49.38%,均高于A组(32.05%、28.63%)和C组(42.86%、37.72%),差异有统计学意义(P<0.000 1),C组的每周期临床妊娠率和活产率高于A组,差异有统计学意义(P<0.01);然而,B组的双胎率(36.31%)高于A组(0.67%)和C组(27.60%),差异有统计学意义(P<0.01)。结论:选择1枚高评分胚胎与1枚低评分胚胎协同移植,可获得可接受的每周期临床妊娠率和活产率,亦未提高双胎率。     

测序技术在无创产前筛查中的应用及进展

测序技术是现代分子生物学研究中的重要技术,1977年桑格测序技术（一代测序技术）出现。30年后,二代测序技术也应用于科研及临床;近年国外出现了以单分子测序为特点的第三代测序技术。测序技术促进了无创产前筛查技术的进步。相对于传统的羊膜腔穿刺术和绒毛活检,高通量测序技术通过对妊娠妇女血浆中胎儿游离DNA进行测序而获得胎儿的染色体信息,避免直接接触和伤害生长中的胎儿。研究人员利用大规模并行测序技术发现无创产前筛查技术相对于标准筛查技术拥有较高敏感度和特异度。多国卫生机构相继公布了产前检测的指导意见。2013年,单细胞测序开始应用于产前辅助生殖技术的临床试验。国内外通过对单个卵细胞的测序有望大幅度提高辅助生殖的活产率。高通量测序技术在产前诊断领域具有广阔的应用前景。     

不同发育阶段大鼠睾丸中Calretinin的表达

目的:Calretinin(CALB2)是一种钙结合蛋白.前期研究表明,CALB2可表达于人睾丸组织,推测其参与睾丸功能的调节.本研究观察不同发育阶段大鼠睾丸中CALB2的表达水平,探讨其在调节雄激素生成中的作用.方法:3～4周龄SD雄性大鼠作为性发育前组(相当于人类的青春期前,n=35),16周龄SD鼠作为性成熟组(相当于人类的成年期,n=16),12个月以上的作为老年组(相当于人类男子的中老年,n=10).放射免疫法测定各组血清睾酮浓度;免疫组织化学法观察CALB2的定位表达;定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)分别检测睾丸中CALB2 mRNA和蛋白水平的表达.结果:CALB2表达定位于睾丸的间质细胞,细胞内定位于细胞质中.性发育前组大鼠血清睾酮水平最低,性成熟组最高,差异有统计学意义(P＜0.05).性成熟组大鼠睾丸CALB2的表达水平较性发育前组和老年组均升高(P＜0.05).结论:睾丸组织中,CALB2表达于间质细胞的细胞质;在不同发育阶段,睾丸间质细胞CALB2表达水平与血清睾酮水平呈正相关,表明CALB2参与调节雄激素生成.