MIB2对HepG2肝癌细胞恶性生长的影响

目的：探讨Mindbomb E3泛素蛋白连接酶2（MIB2）对HepG2肝癌细胞恶性生长的影响,并分析其可能机制。方法：以HepG2肝癌细胞为研究对象,首先筛选过表达MIB2稳定株,利用细胞软琼脂克隆实验观察集落形成情况;使用炎性细胞因子TNF-α和RNA病毒SEV处理MIB2过表达稳定株和阴性对照4 h,免疫印迹法检测Notch1的表达水平;同时收取细胞培养上清,ELISA检测IL-6及TNF-α的分泌情况。其次通过小干扰RNA(siRNA)转染HepG2细胞,48 h后通过免疫印迹法验证MIB2敲低情况;同样使用TNF-α和SEV处理4 h,收取细胞培养上清,ELISA检测IL-6及TNF-α的分泌情况。结果：过表达MIB2对HepG2细胞的克隆形成有明显的抑制作用;过表达MIB2导致HepG2细胞IL-6本底水平的分泌和TNF-α及SEV诱导的分泌均下降,在上述各条件下均未检测到TNF-α的分泌,Notch1表达水平无显著变化。MIB2敲低后,HepG2细胞IL-6本底水平的分泌和TNF-α及SEV诱导的分泌均增强,反向验证上述效应。结论：MIB2能够明显抑制肝癌细胞的恶性生长,该效应可能和IL-6的表达下降有关。     

绞股蓝皂苷减轻脂多糖诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系PC12损伤

目的 探讨绞股蓝皂苷对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞损伤的保护作用及其机制。方法 LPS处理PC12细胞建立神经元炎性损伤模型;实时定量PCR检测炎性因子表达,CCK-8法检测细胞活力,蛋白印迹检测NF-κB蛋白。结果 不同剂量(0、100、300和1 000 ng/mL)的LPS刺激PC12细胞12 h后,TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA水平随剂量的增加而逐渐升高。LPS导致细胞活力下降到85.7%,不同浓度绞股蓝皂苷(30, 100μg/mL)预处理细胞6 h后,30和100μg/mL绞股蓝皂苷能够使细胞活力分别恢复至96.2%和97.9%。绞股蓝皂苷预处理后,LPS诱导的TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA水平升高都受到不同程度的抑制。LPS刺激导致NF-κB通路信号蛋白p65的磷酸化(p-p65)水平上调,但绞股蓝皂苷预处理能够使升高的p-p65下调。结论 绞股蓝皂苷通过抑制NF-κB信号通路减轻LPS诱导的PC12细胞炎性反应,从而起到保护神经元损伤的作用。     

去泛素化酶MYSM1调控人B细胞向浆细胞的分化

目的:探讨去泛素化酶MYSM1对人B细胞向浆细胞分化的调控作用。方法:构建去泛素化酶MYSM1的干扰载体和过表达载体,包装相应慢病毒及对照慢病毒;经人外周血磁珠分选出的CD19~+B细胞;经慢病毒感染48 h后,LPS刺激诱导感染后的CD19~+B细胞向浆细胞分化。流式细胞术检测CD138表达,荧光定量PCR检测B细胞及分化过程中重要转录因子的表达变化。结果:干扰MYSM1表达后,B细胞向浆细胞分化比例显著升高(P0.01),抑制浆细胞分化的转录因子Pax5和Bach2的表达水平显著下降(P0.01),而促进浆细胞分化的转录因子Prdm1和Xbp1的表达水平显著升高(P0.01)。相反,过表达MYSM1后,B细胞向浆细胞分化比例显著下降(P0.01),抑制浆细胞分化的转录因子Pax5和Bach2的表达水平显著升高(P0.01),而促进浆细胞分化的转录因子Prdm1和Xbp1的表达水平显著下降(P0.01)。结论:去泛素化酶MYSM1负调控人B细胞向浆细胞的分化。     

人胚胎发育过程中间充质干祖细胞与造血细胞间的起源关系探讨

目的探讨人胚胎发育过程中间充质干祖细胞(MSPCs)与造血细胞间的起源关系。方法取发育不同时间药流胚胎,分离不同造血组织消化成单个细胞,于高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)培养体系培养10~14 d,倒置显微镜下挑取直径大于0.5 mm的HPP-CFC集落于液体培养体系进行二次培养,对二次培养中出现的贴壁细胞进行扩增并鉴定其细胞表面分子的表达,于不同分化体系鉴定其是否具有MSPCs的分化特性。结果本研究总结了胚胎发育不同时期主动脉-性腺-中肾(AGM)区、卵黄囊、胎肝等不同部位包括HPP-CFC在内的各类造血前体细胞的发育动态,发现从28体节开始,一定比例的AGM区HPP-CFC除能够分化产生造血细胞外,其来源的贴壁细胞具有MSPCs的分化功能,贴壁细胞在淋巴母细胞转化实验中可抑制T细胞的增殖。结论人胚胎AGM区内,部分MSPCs和造血细胞起源于共同前体。     

小鼠ACADL对巨噬细胞表达炎症因子的影响

目的探讨长链酰基辅酶A脱氢酶(Acyl-CoA dehydrogenase,long chain,ACADL)对巨噬细胞分泌炎症因子的影响。方法在体外诱导的小鼠骨髓来源巨噬细胞中加入脂多糖(LPS)以及白细胞介素4(IL-4)分别诱导M1和M2极化,在极化0、12、24、36、48 h时用Western blot检测ACADL在M1和M2极化中的蛋白表达量。构建ACADL-pEGFP-N1质粒,使用G418筛选和鉴定过表达ACADL的RAW264.7细胞稳定株。LPS刺激过表达ACADL稳定株和对照组细胞4 h后,通过ELISA和qRTPCR检测TNF-α、IL-6、IL-10的表达情况。在RAW264.7细胞中加入beta氧化抑制因子etomoxir预处理,ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-10的表达情况。结果在巨噬细胞极化过程中ACADL蛋白量先减少再增加;过表达ACADL的细胞中,IL-6和IL-10分泌量及mRNA水平均显著高于对照组(P0.001):beta氧化抑制因子etomoxir能够减少RAW264.7细胞分泌炎症因子。结论 ACADL能增强巨噬细胞IL-6和IL-10的分泌,其作用机制可能是通过beta氧化影响炎性细胞因子的表达。