天花粉蛋白体外抗人白血病和淋巴瘤细胞的作用机制

本研究的目的是探讨天花粉蛋白（TCS）对人白血病和淋巴瘤细胞系的杀伤作用机制。用台盼蓝染色法检测TCS对细胞生长的影响,应用流式细胞术检测TCS诱导细胞凋亡的情况及对细胞生长周期的影响。结果表明：12.5μg/ml浓度的TCS可以显著抑制各种白血病细胞系的增殖,但对T淋巴细胞系和巨噬细胞细胞系表现为诱导细胞凋亡的作用,而对B淋巴瘤细胞系则表现为生长抑制效应。通过细胞周期检测发现,TCS可以将B淋巴瘤细胞系细胞阻滞在S期,从而抑制细胞增殖,但对T淋巴细胞系则无明显影响。结论：TCS以不同的作用机制杀伤白血病细胞,根据不同的细胞类型分别表现为诱导细胞凋亡和阻滞细胞生长周期的作用。     

日本血吸虫病家兔转移因子的抗感染实验观察

动物和人初次感染血吸虫后可产生伴随免疫,对血吸虫的再感染具有一定的保护作用。这种免疫力能否由免疫介质转移因子转移给受体动物?Mad-dison等曾报道感染曼氏血吸虫恒河猴转移因子的抗感染研究。为了探讨血吸虫病转移因子临床应用的可能性,我们对急性血吸虫病家兔脾脏制备转移因子(STF),进行了实验研究。     

HIV潜伏感染激活剂研究进展

艾滋病是由HIV病毒感染引起的一种死亡率较高的获得性免疫缺陷综合症,虽然高效抗逆转录病毒疗法(HAART)能够将血浆内病毒载量降至不可检测水平,但病毒并不能被彻底清除,主要原因是HIV感染后会通过在某些细胞内形成潜伏病毒存在于病毒库中,在停用HAART后潜伏病毒将大量复制。目前研究普遍认为HIV潜伏库是根除HIV感染的主要障碍,随之发展出的一种清除潜伏病毒的新策略为:使用HIV潜伏激活剂诱导潜伏病毒复制及其基因表达,然后通过HAART或自身免疫系统将激活的病毒及其宿主细胞杀灭。因此,寻找高效、安全、可行性高的激活剂成为清除潜伏病毒的关键。迄今为止,HIV潜伏感染激活剂有多种,分别作用于HIV转录的不同阶段并各有优缺点。该文将对潜伏感染的机制及其激活剂的最新研究进展做一介绍。     

澜沧江-湄公河次区域HIV-1分子流行病学及跨境传播研究进展简

澜沧江-湄公河次区域是全球人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）感染最为严重的地区之一,流行多种HIV-1病毒亚型,并且存在跨境传播的现象。该文总结了近年来澜沧江-湄公河次区域各个国家（省）的HIV-1感染情况和流行亚型。另外,对该区域流行的主要HIV-1亚型：B亚型、C亚型和CRF01_AE的跨境传播以及CRF07_BC和CRF08_BC在中国境内的跨省传播进行了介绍,希望能为该区域,特别是云南省和我国HIV-1的病毒起源、传播路线等研究提供一定的参考,也为该地区艾滋病（AIDS）疫情的预防控制提供科学依据。     

粉尘螨抗细菌活性物质的分离与鉴定

目的从粉尘螨丙酮提取液中分离抗细菌活性成分,并对其抗菌活性进行初步鉴定。方法用丙酮抽提粉尘螨,并用Sephadex G50分子筛层析进行对粉尘螨提取液中的抗细菌活性进行初步分离、纯化。对各组分的抗细菌活性进行初步鉴定。结果经Sephadex G50分子筛层析分离得到Ⅰ及Ⅱ两个峰。粉尘螨丙酮粗提物对绿脓假单胞菌无抑制作用,但对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌及短小芽孢杆菌均有抑制作用。峰Ⅰ及峰Ⅱ则对大肠埃希杆菌、枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌及金黄色葡萄球菌都有抑制作用。粉尘螨粗提液及第二个峰在加热及蛋白酶K处理后仍然保留抗细菌活性,但是第一个峰在同样处理后失去了抗菌活性。结论首次从粉尘螨分离纯化得到抗细菌成分。     

重组腺病毒载体vAd-tat的构建及其在细胞中的表达

目的 构建含HIV-1 tat基因重组腺病毒,观察在不同细胞中外源蛋白Tat的表达,作为DC抗HIV疫苗的基础.方法 通过PCR扩增,获得HXB2 tat的cDNA片段,定向克隆入腺病毒转移载体pTrack-CMV,线性化后转化含有腺病毒骨架pAd-easy-1的大肠杆菌BJ5183,获得同源重组的质粒prAd-tat,Pac Ⅰ酶切纯化后转染293细胞,包装成具有感染力的复制缺陷型重组腺病毒vAd-tat.结果 经PCR、酶切及DNA序列测定,插入片段大小、方向正确,获得具有感染力的含有HIV-1 tat基因的重组腺病毒;通过Western blot方法 检测,重组腺病毒在293细胞中表达出Mr,为15 000的蛋白.结论 成功构建了含有HIV-1 tat基因的腺病毒,并观察到该基冈在细胞中的表达.     

IGF-Ⅱ对小鼠2-细胞胚胎体外发育的影响

目的研究胰岛素生长因子-Ⅱ对小鼠2-细胞胚胎体外发育的影响。方法在mKSOM培养液中添加不同浓度的IGF—Ⅱ（insulin—like growth factor—Ⅱ）对小鼠2-细胞胚胎进行体外培养,观察囊胚发育率、孵化率和囊胚细胞数的变化。结果（1）培养到72h,实验组囊胚率显著高于对照组。（2）培养到96h,0．1、1、10ng／ml IGF-Ⅱ添加组的孵化率显著高于对照组和100ng／ml IGF—Ⅱ添加组。（3）进行囊胚细胞计数,实验组与对照组比较,差异无显著性;四个实验组之间比较,差异亦无显著性。结论IGF-Ⅱ浓度为0．1、1、10ng／ml时,能促进小鼠2-细胞胚胎的体外发育。     

恒河猴CD1d基因的克隆及其组织表达差异性分析

目的:克隆非人灵长类疾病动物模型-恒河猴的CD1d基因并检测其在不同组织中的表达差异情况.方法:提取恒河猴血液及各组织的RNA, 以反转录得到的cDNA为模板, 用特异性引物扩增CD1d;以管家基因GAPDH为内参, 用半定量RT-PCR的方法对CD1d的组织表达差异性进行分析.结果:成功扩增了恒河猴CD1d基因的编码区序列;首次用半定量RT-PCR的方法检测了CD1d mRNA在恒河猴部分组织中的表达情况, 发现其表达水平存在明显的组织差异性, 其中, 在肝脏、脾脏和心脏中的表达水平较高, 在血液、小肠和肺中次之, 在脑中表达最少.结论:研究结果为今后表达恒河猴CD1d蛋白并制备其四聚体进而研究恒河猴NKT细胞在众多疾病中的作用奠定了基础;组织表达差异的研究结果提示其在相关疾病的发生发展过程中可能扮演着重要的角色, 具体作用还有待深入研究.     

人胎脑神经生长因子4基因与质粒载体重组体的体外构建

BACKGROUND： Neurotrophin-4 （NT-4） can promote neuronal growth, development, differentiation, maturation, and survival. NT-4 can also improve recovery and regeneration of injured neurons, but cannot pass through the blood-brain barrier, which limits its activity in the central nervous system. Delivering NT-4 into the central nervous system v/a cells or vectors may have therapeutic benefit. OBJECTIVE： To construct a recombinant vector with a human embryonic brain-derived NT-4 gene and pEGFP-NI. DESIGN, TIME AND SETTING： Neural genetic engineering experiment. The study was performed at the Neuroscience Institute of Kunming Medical College between October 2007 and March 2008. MATERIALS： The pEGFP-N1 plasmid vector was provided by Kunming Institute of Zoology, Chinese Academy of Sciences; embryonic brain tissues were provided by the First Affiliated Hospital of Kunming Medical College. TRIzol RNA extraction Kit was purchased from Sigma （USA）, One Step RNA PCR Kit （AMV） etc. were from Takara （Dalian, China）. METHODS： Total RNA was extracted from human embryonic brain tissues using Trizol. The agarose gel electrophoresis showed two bands： 18 S and 28 S, which were essential subunits of total RNA. The human NT-4 DNA was obtained via RT-PCR and inserted into the pEGFP-N1 vector using ligation and transformation reaction. MAIN OUTCOME MEASURES： The sequencing results of the DNA in the recombinant of NT-4- pEGFP-NI. RESULTS： The NT-4-pEGFP-N1 vector was sequence-verified and showed the expected molecular weight. CONCLUSION： The recombinant of NT-4-pEGFP-N1 was constructed successfully in vitro.     

CD3／CD28协同刺激诱导抵抗和清除HIV-1感染的检验研究与细胞亚群分析

目的通过CD3／CD28抗体协同刺激活化原代CD4^＋ T细胞,以复制具有抵抗和清除HIV-1能力的“Levine现象”,建立相关机理研究的实验模式,分析效应细胞的亚群特征。方法从外周血单个核细胞中分选高纯度的CD4’T细胞,以PHA／IL-2为对照,经CD3／CD28抗体刺激培养后,以CD45RO、CD62L和CCR7进行单细胞流式分析,鉴定细胞亚群及CCR5、CXCR4表达水平,以实时荧光定量法测定培养上清中的病毒载量。结果CD3／CD28抗体刺激下CD4^＋ T细胞明显增殖活化,原态细胞减少,明显转为记忆细胞表型,特别是M2亚群和TCM亚群细胞增多,未发现典型的TEMRA亚群。与PHA／IL-2相反,CD3／CD28抗体明显下调CCR5,并使早期感染者的病毒载量始终维持低于检出线水平（〈50IU／m1）。结论本研究以“Levine现象”为线索,验证和复制了诱导靶细胞抵抗和清除HIV-1感染的研究体系,为进一步探索新的防治HIV／AIDS的细胞分子机理奠定了基础。