Aβ1-42抑制少突胶质前体细胞增殖与分化的实验研究

目的 探讨在离体细胞培养条件下,Aβ1-42对SD乳鼠少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)增殖与分化的影响.方法 采用条件培养液原代培养获得高纯度SD乳鼠OPCs,分为正常组、加入无菌水的对照组、加入Aβ1-42的实验组,采用CCK-8检测存活细胞数量和增殖水平,Western blot检测细胞凋亡蛋白含量,免疫细胞化学染色观察细胞形态变化及分化情况.结果 与对照组相比,实验组OPCs存活率显著降低(P＜0.01),具体表现为:Aβ1-42作用OPCs 1 h后,细胞增殖明显受到抑制(P＜0.01);药物浓度1 moL/L作用于OPCs时,增殖也受到影响(P＜0.05),当Aβ1-42剂量增加至2.5 mol/L时,细胞增殖明显受到抑制(P＜0.01),而对照组与正常组无显著差异(P＞0.05).对凋亡蛋白Caspase-3的检测发现,它们在对照组与正常组的表达水平基本相当(P＞0.05),而在实验组明显升高(P＜0.01),且呈现时间和浓度依赖性,具体表现为:Aβ1-42作用OPCs 2 h后,Caspase-3表达水平明显上调(P＜0.01);药物浓度2.5 mol/L作用于OPCs时,蛋白表达水平有所升高(P＜0.05),当Aβ1-42剂量增加至5 mol/L时,Caspase-3表达水平明显上调(P＜0.01).对成熟少突胶质细胞标记物髓鞘碱性蛋白的免疫染色发现,与对照组相比,实验组的细胞体积明显变小,突起明显减少.结论 Aβ1-42可能通过促使细胞凋亡而抑制OPCs增殖,并抑制了OPCs向成熟少突胶质细胞分化,从而影响中枢神经系统的髓鞘形成.     

细胞因子信号抑制因子-2在成年大鼠喙侧神经干细胞迁移流通道的表达

目的明确SOCS2在成年大鼠脑内喙侧神经干细胞迁移流内的表达模式1方法用RT-PCR和原位杂交组织化学技术观察SOCS2在成年大鼠喙侧神经干细胞迁移流的SVZa、RMS、OB 3个区域的表达情况.结果成年大鼠脑内SVZa、RMS、OB 3个区域SOCS2均有不同程度的表达,且在这3个部位中SOCS2在OB区表达最强,在SVZa表达次之,RMS表达较弱.结论SOCS2在成年大鼠SVZa、RMS、OB 3个区域均有表达但强度不同,提示SOCS2可能对成年SVZa神经干细胞的发育、迁移和定向分化起到一定的调节作用.     

Id2在成年大鼠喙侧神经干细胞迁移流通道的表达

目的明确Id2在成年大鼠脑内室管膜前下区(SVZa)、喙侧迁移流(RMS)、嗅脑(OB) 3个不同区域内的表达模式.方法用RT-PCR和免疫荧光染色的方法观察成年大鼠SVZa、RMS、OB 3个区域Id2的表达情况.结果成年大鼠脑内SVZa、RMS、OB 3个区域Id2均有不同程度的表达,且在这3个部位中Id2在OB区表达最弱,在SVZa表达较强, 在RMS表达最强.结论确立Id2在成年大鼠SVZa、RMS、OB 3个区域的表达模式,提示Id2可能对成年SVZa神经干细胞的增殖和定向分化起到一定的调节作用.     

骨形态发生蛋白-2在大鼠脑内嘴侧迁移流中的发育学表达

目的了解骨形态发生蛋白2（BMP-2）在大鼠脑的不同发育阶段，嘴侧神经干细胞迁移流中的表达模式。方法用RT—PCR和免疫荧光染色的方法观察大鼠SVZa、RMS、OB三个区域在不同发育阶段BMP-2的表达情况。结果在不同的发育时期，大鼠脑内SVZa、RMS、OB这三个不同的区域BMP-2 mRNA都有不同程度的表达，但是显然表达量均不是很高。其时空变化趋势为：（1）在大鼠SVZa、RMS和OB三个部位，BMP-2的表达水平在胚胎14d都明显高于出生后0d和7d两个时间点，在出生7d这个时相点上，BMP-2的表达水平最低。（2）在三个时相点上，BMP-2在嗅球的表达水平都相对较高，在SVZa区的表达也较高，而在RMS表达量相对较低。结论在大鼠脑发育过程中，BMP-2在SVZa、RMS、OB三个区域的具有时空表达模式的差异性，提示BMP-2可能对SVZa神经干细胞（NSCs）的增殖、迁移和分化起重要的调控作用。     

医学发育生物学课程的构建与实践

发育生物学已成为一门迅猛发展的重要学科。其作为21世纪的前沿学科之一已得到广泛认同，医学发育生物学则是发育生物学在医学领域的一个分支，然而，在我国大多数医学院校既没有开设医学发育生物学专业课程，也缺乏合适的教材。最近，我校尝试开设了医学发育生物学课程，通过对发育生物学的发展简史、一些基本概念和理论知识的了解和认识，特别是结合人体早期胚胎发育的过程和机制、畸形的发生及其机制等，使学员对医学发育生物学有了一些基本的了解。为培养医学领域中跨学科跨层次、适应新世纪需求的高素质医学人才打下良好的基础。     

转录因子EN2在小鼠胚胎组织中的分布

目的观察转录因子EN2在小鼠胚胎发育过程中的时空分布规律。方法利用Western blot技术检测EN2在小鼠胚胎E8.5~E17.5的表达强度;利用免疫组化技术观察EN2在胚胎发育不同时期各组织器官中的分布。结果Western blot:E8.5未检测到明显的阳性蛋白条带,E9.5~E15.5在相对分子质量为41×103处检测到清晰的EN2蛋白条带,表达水平从E9.5~E12.5逐渐增强,E13.5之后逐渐减弱,至E16.5消失。②免疫组化:在胚胎不同时期,EN2蛋白在中后脑交界部、Rathke囊周围、下颌弓、视交叉、嗅球、椎间盘、轴旁肌和一些间充质组织中都有不同程度的表达。结论EN2蛋白可能参与了神经系统、骨骼肌、椎间盘和一些间充质组织的发育与分化。     

转化生长因子β对大鼠神经干细胞增殖和分化的调控作用

目的:研究转化生长因子β对新生(P0天)大鼠脑室管膜前下区(anteriorsubventricularzone,SVZa)神经干细胞增殖、迁移和分化的调控作用。方法:应用地高辛标记的cRNA探针核酸分子原位杂交技术显示新生大鼠脑内转化生长因子β(transforminggrowthfactor-β,TGF-β)的mRNA表达。结果:新生大鼠的脑内广泛表达TGF-βmRNA,尤以SVZa区经喙侧迁移流(rostralmigratorystream,RMS)至嗅球的通路上最为明显,其强度又以SVZa区最强,阳性细胞数量最多,密度最大,RMS区域相对较弱,嗅球又见增多。细胞核和细胞质内均可见到阳性产物,但阳性产物主要沉积在胞核内。结论:SVZa区神经干细胞表达了较高含量的TGF-β,提示TGF-β参与了维持SVZa区神经干细胞的增殖状态,使SVZa区的神经干细胞处于适度稳定的增殖状态,而嗅球区表达量较高的TGF-β则可能主要参与促进细胞分化。     

DNA结合抑制因子2在大鼠脑室管膜前下区神经干细胞发育中的表达

目的探讨DNA结合抑制因子2(Id2)在大鼠脑室管膜前下区(SVZa)神经干细胞(NSCs)发育分化中的作用。方法运用RT-PCR、Western blotting、免疫组织化学技术,观察Id2在不同发育阶段SVZa-喙侧迁移流(RMS)-嗅脑(OB)流通道中的时空表达模式。结果从空间上看,Id2在RMS表达始终最高,SVZa次之,在OB表达最弱;从发育的时间来看,Id2在各区域胚胎时期表达均比刚出生时强;在OB和RMS区,成年比刚出生时表达强,老年仍有较强表达;在成年SVZa表达比刚出生时弱。结论Id2在SVZa神经干细胞的发育学表达模式提示,Id2可能有促进SVZa神经干细胞增殖和抑制其在RMS迁移区分化的作用。