华法林药物基因组学的发展及其临床应用前景

华法林是临床广泛使用的口服抗凝药物。由于自身狭窄的有效抗凝治疗范围以及个体间每日用药剂量的显著差异,困扰着许多患者和临床医生。近年来,许多研究均报道基因多态性是引起华法林个体间用药剂量差异的主要因素之一。部分学者建立基于药物基因组学的剂量方程,并在进行验证,评估其临床价值。本文综述了华法林相关药物基因组学的国内外最新进展,为进一步针对华法林的临床研究提供参考依据。     

利用多重数字PCR检测KRAS相关突变

 目的 建立多重数字PCR体系检测血浆细胞游离DNA(cell-free DNA, cfDNA)中KRAS第2外显子12、13密码子的7种突变。方法 构建7种KRAS突变型质粒用以建立多重数字PCR检测体系,以灵敏度、特异度和动态范围为主要参数评估体系的性能。利用该体系检测15例手术可切除的胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma, PDAC)患者血浆cfDNA中KRAS第2外显子12、13密码子突变情况,并与ARMs的检测结果进行比对。结果 自建的多重数字PCR在0.01%～10%的动态范围内线性良好。两个检测体系的灵敏度分别可达到0.025%和0.043%。15名PDAC患者组织中KRAS突变的阳性率达到100%。数字PCR检测血浆cfDNA所得的结果与组织结果的匹配率达到40%,ARMs检测组织和血浆cfDNA结果的匹配率为20%。15例样本中使用多重数字PCR检测到血浆cfDNA的最低丰度达到0.09%。结论 多重数字PCR具备高灵敏度和特异性,可用于准确定量外周血cfDNA中KRAS相关突变的水平。     

单核苷酸多态性与华法林初始抗凝疗效和维持剂量的研究

目的：筛选华法林初始抗凝治疗疗效和华法林维持剂量存在显著影响的基因因素。方法初始抗凝疗效组：选取进行心脏瓣膜置换的汉族患者212例,以术后4 d为观测期限,根据设立初始抗凝疗效的观测指标△INR4-1[即观测期结束时的国际标准化比值（ INR）与初始INR的差值],筛选出对于该指标存在显著影响的基因因素。同时观查上述因素与其它终点事件如INR＞3、INR＞4和3 d内是否入窗等是否相关。维持剂量组：选取服用华法林3个月以上的门诊患者266例,需满足相隔7 d以上、在服用相同剂量华法林的情况下,2次INR检测结果均在治疗窗内。筛选显著影响的基因因素。结果在初始抗凝疗效组中, CYP2C9（ rs1057910）、VKORC1（rs9923231）和VKORC1（rs2292566）对△INR4-1有明显影响;CYP2C9（rs1057910）和EPHX1（rs2292566）对3 d内INR是否进入治疗范围有明显影响（P＜0．001、P＜0．05）。在维持剂量组中,CYP2C9（rs1057910）和VKORC1（rs9923231）对每日及每周华法林剂量均有明显影响（P ＜0．001）。结论 CYP2C9（rs1057910）、VKORC1（rs9923231）和EPHX1（rs2292566）对于华法林初始抗凝疗效有明显影响。 CYP2C9（rs1057910）、VKORC1（ rs9923231）对华法林维持剂量有明显影响。     

华法林相关基因SNPs在心脏瓣膜置换汉族患者中的分布调查

目的:探索心脏瓣膜置换的汉族患者中华法林相关基因SNPs的分布。方法:入选2012年至2013年上海市在中山医院行心脏瓣膜置换手术后,需长期服用华法林进行抗凝治疗的汉族患者110例,通过阅读文献筛选得到华法林相关基因及相应SNPs位点(CYP2C9 rs1799853 C/T、CYP2C9rs1057910 A/C、VKORC1 rs9923231 G/A、VKORC1 rs9934438 C/T、CYP4F2 rs2108622 C/T、GGCX rs12714145 A/G、EPHX1 rs1877724 C/T、EPHX1 rs2292566 A/G、EPHX1 rs4653436 A/G)。使用直接测序法检测SNPs,采用Hardy-Weinberg遗传平衡检验验证群体代表性。结果:CYP2C9基因rs1799853、rs1057910等位基因频率分别为0.45%、5.00%;VKORC1基因rs9923231、rs9934438等位基因频率均为91.36%;CYP4F2基因rs2108622等位基因频率为28.64%;GGCX基因rs12714145等位基因频率为33.18%;EPHX1基因rs1877724、rs2292566和rs4653436等位基因频率分别为30.00%、24.55%、26.36%。结论:探索华法林相关基因CYP2C9、VKORC1、CYP4F2、GGCX、EPHX1的9个SNPs的频率在行心脏瓣膜置换术的患者人群中的分布,对建立和实施华法林个体化治疗具有重要意义。     

血浆ctDNA检测在结直肠癌诊疗中的应用

结直肠癌的发病率和死亡率逐年增加。一方面是因为缺乏合适的早期筛查手段,肠镜检查患者依从率并不理想;另一方面是由于治疗方式的局限性,部分患者的病灶无法通过手术根治,化疗、放疗效果存在不确定因素,而分子靶向治疗也有适应人群的限制。通过分子诊断技术检测患者血浆循环肿瘤DNA(ctDNA),可对患者的早期筛查、预后和对化疗药物的反应进行分析,从而指导临床治疗。文章围绕血浆ct DNA检测在结直肠癌诊疗中的应用作一综述。     

肿瘤细胞来源的外泌体在结直肠癌中的研究进展

外泌体(exosome)作为目前液体活检领域中研究的热点已被证实可参与多种生物学的过程。其所包含的大量核酸如DNA、RNA以及大分子如脂类和蛋白质等,均可以外泌体为载体通过控制微血管生成、调节基质细胞、重铸细胞外基质以及建立"预转移微环境"等多种途径,从而促进肿瘤的侵袭与转移。该文以肿瘤细胞来源的外泌体为主要对象,介绍外泌体及其分离技术,并对其在结直肠癌中的研究进展进行分析及论述。