胰腺源间充质干细胞对大鼠胰腺损伤的修复作用

目的：探讨从大鼠胰腺中分离出间充质干细胞（MSCs），并用于大鼠胰腺损伤的修复，为糖尿病治疗探寻新的细胞来源。方法：①取3日龄Wistar大鼠，无菌条件取出胰腺，通过Ⅴ型胶原酶消化获得细胞，常规培养传代、贴壁筛选法纯化细胞、Giemsa染色观察细胞形态、流式细胞仪测定表面标志CD34和CD44，同时与骨髓MSCs进行对照，观察两者在性质和作用上的异同。②实验大鼠随机分为实验组（20只）和对照组（20只）。结扎大鼠胰腺组织建立胰腺组织缺血性坏死模型，将分离、纯化的胰腺MSCs用DAPI（荧光）标记移植到实验组坏死胰腺，对照组移植稀释液。2周后统计两组生存率并做组织病理学检测。结果：①随培养时间延长，细胞形态驱于一致，增殖旺盛。形态学观察和表面抗原检测与骨髓MSCs具有相似性。②实验组大鼠存活率为75%，肉眼见坏死的胰腺组织外观基本恢复，组织病理学切片可见组织细胞结构完整。在荧光显微镜下可见到标记DAPI的蓝色细胞。对照组的大鼠存活率20％，解剖见腹腔大量渗水，组织粘连。实验组存活率大于对照组（P<0.05）。结论：胰腺中存在MSCs，可在体外培养、扩增并可用于修复损伤的胰腺组织。     

小鼠粒细胞成熟率的调节

本研究的目的是探讨粒细胞的成熟是否能由一般的抑制粒细胞产生的各种措施来予以加速。作者利用了密闭的体内培养体系进行了粒细胞成熟的研究。这种培养体系对粒细胞来说,培养条件是良好的,就象在骨髓的自然环境中一样能很快的增殖。     

自体骨髓基质细胞回输促进急性白血病病人化疗后骨髓造血恢复的研究

目的通过回输成纤维集落生成单位（CFU—F）促进骨髓实质细胞造血恢复。减轻白血病化疗的副作用，促进骨髓损伤早日恢复。方法选取经明确诊断的AML患者化疗回输组前后行自身对照，化疗回输前及后采骨髓行红系造血祖细胞（BFU-E）、粒、巨系集落生成单位（CFU—GM）培养，观察化疗回输前后的外周血象。结果化疗回输CFU-F后第3周。其BFU—E、CFU-GM数明显高于化疗回输前的水平（P〈0．05）。同时高于单纯化疗组第3周测得的BFU-E和CFU-GM数（P〈0．05）。结论体外扩增造血基质细胞于化疗自体回输方法，促进了病人造血恢复，对预防和减轻化疗药物造成的骨髓损伤，缩短化疗间期，加大化疗药物剂量，具有理论意义和应用价值。     

骨髓间充质干细胞移植对豚鼠皮肤深Ⅱ度烧伤的治疗作用

目的探讨骨髓间充质干细胞 (MSCs)治疗皮肤深Ⅱ度烧伤的机制。方法体外培养扩增的MSCs悬液 ,以 2× 10 6/ml(A组 )和 2× 10 7/ml(B组 )两种细胞密度移植给皮肤深Ⅱ度烧的受体鼠创面 ,观察创面愈合速度 ,用免疫组织化学检测因子Ⅷ的表达。细胞移植后的第 15、3 0、5 0天 ,通过PCR方法检测创面皮肤组织中移植供体鼠的Y染色体基因表达。结果A、B组治疗侧的创面愈合速度均快于对照侧 ,A、B组治疗侧间无显著性差异。因子Ⅷ检测示第 15、3 0天时 ,A、B两组的微血管密度均多于对照侧 ,A、B组治疗侧间无显著性差异。PCR检测结果表明 ,第 15、3 0、5 0天时在部分受体鼠恢复的创面上有供体鼠Y染色体基因表达。结论骨髓MSCs对皮肤深Ⅱ度烧伤具有明显的疗效。     

锌对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨锌预处理对脊髓缺血再灌注损伤的预防作用,为锌预防脊髓缺血再灌注损伤提供实验依据。方法：40只大鼠随机分为高锌组、低锌组、假手术组和模型组。锌处理组（高锌组,低锌组）每天腹腔注射硫酸锌（20和10 mg·kg^-1）1次,模型组和假手术组每天注射等量生理盐水1次,连续5 d。于第6天制备脊髓缺血再灌注损伤模型。缺血45 min再灌注24 h后进行神经功能评分以及HE和Fast blue 染色进行病理组织学观察。结果：模型组大鼠出现不同程度的下肢瘫痪。锌预处理组大鼠与模型组比较,后肢神经功能明显改善,神经功能评分比较显著增高（P<0.01）。病理组织学观察发现,模型组大鼠神经细胞固缩深染、形态异常,血管充血,并出现白质内髓鞘松散、脱失等病理改变;锌处理组大鼠病理组织学改变明显改善,细胞形态基本正常且高锌组优于低锌组。结论：一定剂量范围内的锌对大鼠脊髓缺血再灌注损伤具有保护作用。     

高、低正加速度耐力大鼠脑组织差异表达基因的分离

目的:分离高、低正加速度耐力大鼠脑组织差异表达的cDNA片段,以获得耐力相关基因.方法:雄性SD大鼠在离心机上处理后,选取耐受终点在高、低两个极端的动物,立即取全脑,分离mRNA.以高+Gz耐力大鼠脑组织mRNA为实验组,以低+Gz耐力大鼠脑组织mRNA为驱动组,采用抑制消减杂交技术分离高、低+Gz耐力大鼠脑组织中差异表达的cDNA片段混合物,然后将此混合物与pGEM-T easy载体连接,转化E.coli JM109感受态细胞.结果:初步获得了608个可能在高+Gz耐力大鼠脑组织中上调表达的cDNA片段.这些cDNA片段长度介于150～1 400 bp之间,集中于300～700 bp.结论:在高、低+Gz耐力大鼠脑组织中差异表达的cDNA片段所代表的基因为+Gz耐力相关基因,这些基因的上调表达可能与+Gz耐力的提高有关.     

人骨髓造血基质干细胞体外增殖方法

目的 :探讨使骨髓造血基质干细胞 ( HSSC)体外稳定增殖的方法。方法 :取开胸术剪下的人肋骨 (正常血象 ,非血液系统及恶性肿瘤病 ) ,常规制备骨髓细胞悬液 ,从胎牛血清及人 AB型血清中选择最佳血清 ,人 AB型血清浓度分别为 5 %、1 0 %、1 5 %、2 0 %、30 %、35 %、40 %。培养液分别为 RPMI1 640、DMEM、IMDM以选择最佳培养液。加入人重组碱性成纤维细胞生长因子 ( b FGF)进行最佳浓度测定。培养物置 CO2 孵箱中培养 2周后行 HE染色 ,计数基质细胞集落数。结果 :选择出最佳培养体系为 30 %人 AB型血清、1μg· L-1 b FGF、Penicillin 1 0 0 KU· L-1 、Streptomycin5 0 KU· L-1 、氢化考的松 1 0 -6mol· L-1 和 IMDM培养液。结论 :选择最佳的培养体系可增加HSSC增殖数量 ,最宜体外培养时间 ( 1 4～ 2 1 d) ,最大限度增加回输时的 HSSC数量 ,使自体回输治疗急性白血病 ( AML)成为可能     

小鼠骨髓来源的树突状细胞体外诱导分化的实验研究

目的　研究小鼠骨髓树突状细胞体外诱导分化、成熟及对T细胞增殖的影响 ,为进一步研究树突状细胞的功能及临床肿瘤治疗的应用提供技术方法。方法　应用IL 4、GM CSF培养小鼠骨髓细胞 5～ 7d ,镜下观察细胞形态学变化 ;培养至第 5～ 6d ,加入黑色素瘤 (B16 )冻融抗原继续培养 1～ 2d ,流式细胞仪检测细胞表面分子CD83、CD86 ,并与同种异体T细胞混合培养 72h ,终止培养前 16h加入 3H TdR(0 .5 μCi 孔 ) ,γ 液体闪烁仪测定cpm值。 结果　IL 4、GM CSF培养 3d可见细胞形态发生改变 ,细胞形状不规则 ,培养 5～ 6d时 ,有刺状突起、拉长 ,为典型树突状细胞形态学特征 ;抗原装载后流式细胞仪检测CD83、CD86表达 ,IL 4 +GM CSF +TNF α组 (6 1.6 8% ,71.2 5 % )及IL - 4 +GM -CSF +冻融抗原组 (6 3.11% ,76 .88% )明显高于对照组 (2 .4 1% ,3.88% )及单纯IL - 4 +GM -CSF培养组 (2 1.86 % ,2 8.6 9% ) (P <0 .0 0 1) ,IL - 4 +GM -CSF +TNF -α组与IL - 4 +GM -CSF +冻融抗原组比较CD83、CD86表达没有显著性差异 ;液闪仪检测结果显示 ,IL - 4 +GM -CSF +冻融抗原组刺激T细胞增殖的能力明显强于其他组 ,且有显著性差异(P <0 .0 0 1,P <0 .0 5 )。结论　小鼠骨髓细胞体外培养可以成功诱导扩增出足够量树突状细胞     

骨髓间充质干细胞对大鼠肝脏缺血-再灌注损伤的修复作用

目的研究大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养方法，建立大鼠肝脏缺血．再灌注损伤动物模型，观察骨髓间充质干细胞对大鼠肝脏缺血．再灌注损伤的修复作用。方法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞，建立大鼠肝脏缺血．再灌注损伤的模型。动物模型制备后，将30只大鼠随机分为实验组（即尾静脉注入骨髓间充质干细胞0．5ml，约10^6个）10只，阴性对照组（尾静脉注入生理盐水0．5ml）10只。以正常大鼠作为空白对照组10只。结果各组大鼠于1周，2周，4周进行采血，取脏器进行各项指标检测。肝脏缺血．再灌注损伤大鼠在第1周实验组和阴性对照组的丙氨酸转移酶（ALT）、门冬氨酸转移酶（AST）和丙二醛（MDA）均明显高于空白对照组，差异显著，P〈0．05。第2周时，实验组大鼠ALT、AST和MDA与阴性对照组比较，明显低于阴性对照组P〈0．05，但SOD明显高于阴性对照组P〈0．05。第4周时，实验组大鼠ALT、AST和MDA与阴性对照组比较，明显低于阴性对照组P〈0．05。但实验组与空白对照组MDA和SOD有差异P〈0．05。结论大鼠骨髓间充质干细胞对大鼠肝脏缺血-再灌注损伤的修复可起促进作用。