恶性肿瘤患者外周血淋巴细胞高效体外扩增的方法

探讨从恶性肿瘤患者外周血单个核细胞（PBMCs）中高效扩增淋巴细胞的方法,取3例恶性肿瘤患者的PBMCs,每例患者重复3次,在GMP实验室体系下,经淋巴细胞刺激因子体外诱导扩增淋巴细胞和观察扩增情况,应用流式细胞仪分析扩增前后总CD3^＋、CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋淋巴细胞、CD3^＋CD16＋56^＋（NK细胞）、CD3^＋CD16＋56^＋（NKT细胞）以及CD4^＋和CD8^＋T细胞比值的变化,分析培养前后各淋巴细胞亚群的扩增情况和重复性,同时观察淋巴细胞体外扩增培养后回输患者的生物安全性。结果表明,CD3^＋、CD3^＋CD8^＋、CD3^＋CD16＋56^＋细胞比例较培养前明显增加（P〈0．01）,而CD3^＋CD^＋、CD3^-CD16＋56^＋细胞比例、CD^＋和CD8^＋T细胞比值则明显的降低（P〈0．01）。CD3^＋、CD3^＋CD8^＋、CD3^＋CD16＋56^＋细胞增殖倍数的中位数分别为487．9、832．5和2540．6;而CD3^＋CD4^＋和CD3^＋CD16＋56^＋则分别为159．6和155．5。细胞体外扩增培养前后亚型和扩增倍数的重复性较差,在本研究中只有CD3^＋T细胞在体外培养前后、CD3^＋CD16＋56^＋细胞在培养后的CV值在10％以内。培养扩增后淋巴细胞细菌、真菌、支原体、外来病毒及内毒素检查后无阳性发现,所有患者细胞回输治疗后无明显的毒副反应。在本研究体系下体外诱导扩增培养肿瘤患者自体外周血NK细胞及致敏淋巴细胞效率较高,细胞毒性细胞比例增高较大,具有良好的生物安全性,为恶性肿瘤患者应用NK细胞进行过继免疫治疗提供了一种简单有效的扩增NK细胞的方法。     

扩增活化的自体淋巴细胞过继性细胞免疫治疗小细胞肺癌

目的:研初步探讨扩增活化的自体淋巴细胞(expanded activated autologous lymphocytes,EAAL)过继性细胞免疫治疗在小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)的疗效。方法:在层流实验室体系下,由SCLC患者外周血单个核淋巴细胞体外诱导扩增EAAL细胞,应用流式细胞术检测其细胞表型。然后回顾性分析2008年5月~2010年10月在本院接受过EAAL免疫治疗以及未接受过EAAL免疫治疗的各16例SCLC患者的临床资料,分析比较EAAL治疗组和对照组总生存期(OS)的差异。结果:经过体外培养和扩增,EAAL细胞表型与培养前外周血淋巴细胞相比,CD_3~+、CD_3~+CD_8~+、CD_(45)RO~+、CD_(25)~+、CD_(29)~+以及CD_3~+CD_(16)~+/CD_(56)~+细胞的比例明显增加(P<0.05)。EAAL治疗组和对照组的OS分别为17.4个月和10.0个月,两者差异无统计学意义(P=0.060,HR=0.487,95%CI 0.228~1.037)。EAAL治疗组1~3年生存率分别为81.25%、25.0%和18.75%,而对照组1~3年生存率则分别为43.75%、6.25%和0%,两者差异也无统计学意义(P>0.05)。COX多因素回归分析结果显示EAAL细胞免疫治疗是SCLC患者总生存时间延长的独立预后风险因素之一。亚组分析结果显示女性及化疗≤6周期SCLC患者的OS经EAAL免疫治疗后得到了延长(P<0.05)。结论:EAAL过继性细胞免疫治疗可能能够延长SCLC患者的OS。     

86例小细胞肺癌脑转移临床研究

目的对小细胞肺癌脑转移患者的临床治疗进行分析。方法选取86例小细胞肺癌脑转移患者,对治疗情况进行回顾性分析,并对治疗效果进行分析调查。结果完全缓解15例(17.4%);部分缓解43例(50.0%);疾病稳定15例(17.4%);疾病进展13例(15.1%);客观有效率为67.4%。平均生存期为(1.3±0.8)年。最常见的不良反应为胃肠道反应(67例,77.9%)及骨髓抑制(34例,39.5%)。结论及时有效的临床治疗能够改善小细胞肺癌脑转移患者的症状并延长生存期。     

原始神经外胚层肿瘤化疗相关因素的研究

目的评价原始神经外胚层肿瘤患者化疗的客观疗效，分析影响预后的因素。方法总结2000年3月～2008年9月我院收治的23例接受化疗的原始神经外胚层肿瘤患者的临床特点及化疗效果，用COX生存模型回顾性分析年龄、性别、是否手术、是否放疗、是否有远处转移、CD99的表达强度及是否接受新辅助化疗对其生存预后的影响。结果23例患者中女性11例，男性12例，中位年龄27岁，化疗后CR0例，PR11例，客观有效率55％，有效率与CD99表达强度不相关（P=0．843），中位生存期为12个月。年龄（P=0．024）、远处转移（P=0．032）和放疗（P=0．044）对死亡风险有显著性影响，CD99表达强度在模型中P值为0．067。结论本组研究中原始神经外胚层肿瘤患者男女比例相当，多为年轻患者，化疗有效率较高，但生存期不长。接受放疗、年龄小、无远处转移、CD99表达强度低的患者死亡的风险小，CD99表达强度越高死亡的风险越大。     

恶性肿瘤合并高钙血症22例临床特点及预后分析

目的：分析恶性肿瘤伴高钙血症患者的临床诊治特点以及预后情况。方法：回顾性分析我科2004年1月-2008年6月收治的22例晚期恶性肿瘤合并高钙血症患者的临床资料，并随访观察其生存情况，分析其临床特点、诊治规律及影响预后的主要因素。结果：22例患者血钙浓度为2．78～4．37mmol／L，经双膦酸盐治疗后血钙均降至正常；发现高钙血症后生存时间为3～153天，中位生存时间仅为36天。单因素分析显示，血钙浓度〉3．0mmol／L及远处转移部位／〉3处的患者预后差（P=0．02和P=0．008）；多因素分析提示血钙最高值与远处转移部位的数目均可视为独立的危险因素（P=0．017和P=0．007），血钙值的升高和远处转移部位数目的增加均将增加死亡的风险。结论：高钙血症多见于恶性肿瘤晚期，预后差，应早期诊断，积极予双膦酸盐类药物降血钙治疗。血钙最高值与远处转移部位的数目是独立的预后因素。     

外周血淋巴细胞体外扩增后不同保存条件下存活率的变化

目的:应用流式细胞术初步研究人外周血淋巴细胞在体外经扩增培养后所得的CIK细胞在不同保存条件下存活率的变化.方法:按CIK细胞培养方法体外扩增培养3例恶性肿瘤患者外周血淋巴细胞,收获细胞后计算效应细胞浓度,然后将效应细胞分别放置于4℃和25℃下保存,于细胞收获后的不同时间点应用碘化丙啶(PI)对两种存放条件下的细胞进行染色并应用流式细胞仪器检测计算细胞存活率.结果:3名患者效应细胞初始存活率分别为98.8%、95.5%和97.1%,细胞浓度分别为7.4×107/ml、5.8×107/ml和10.4×107/ml,在4℃保存条件下存活率明显降低的时间点分别为102h、60h和84h,25℃保存条件存活率明显降低的时间点则分别为48h、24h和24h.结论:4℃条件比25℃条件更适合于保存效应细胞,效应细胞初始存活率低者以及细胞浓度较高者其细胞存活率下降的比较明显.     

Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌术后胸壁复发25例

目的探讨乳腺癌术后胸壁复发的原因，寻找降低乳腺癌术后胸壁复发的有效措施。方法对25例乳腺癌（Ⅰ、Ⅱ期）术后胸壁复发的患者进行回顾性分析。结果Ⅰ、Ⅱ期的复发者分别占总复发人数的32％和68％，T1、T2的复发者分别占32％和68％，Her-2表达阳性与Her-2表达阴性的复发者分别占71％和29％，术后接受放疗的患者胸壁复发者为24％，低于未接受放疗者。结论原发灶大、分期晚以及Her-2过表达，可能是乳腺癌术后胸壁复发的主要原因。术后放射治疗可能是预防和治疗胸壁复发的有效措施。     

血清肿瘤标志物的合理应用

在最初的肿瘤筛查中，肿瘤标志物的诊断价值确实有限。但对于已确诊恶性肿瘤的患者而言，其在随访中的价值却很重要。     

侵犯浆膜层合并淋巴结转移胃癌术后辅助腹腔联合全身静脉化疗的生存分析

目的针对侵犯浆膜层合并淋巴结转移的胃癌术后患者辅助全身静脉化疗比较加用与不加用腹腔化疗的长期疗效。方法将66位患者随机分为腹腔联合静脉化疗组（治疗组）和单纯静脉化疗组（对照组）,进行6周期的辅助治疗。治疗组前2周期为腹腔联合全身静脉化疗,对照组为静脉化疗。观察无病生存期（DFS）和总生存期（OS）和不良反应。结果治疗组比对照组的DFS明显延长,中位DFS分别为18．2个月和15．4个月,两组OS分别为24．7个月和25个月,无差异。结论加强局部治疗有助于延长患者的无病生存时间。总生存期的改善可能还有赖于全程疗效的提高。     

康莱特增加肺癌细胞化疗敏感性的实验研究

目的寻找康莱特联合化疗药物（多西他赛,DDP）序贯治疗或同步治疗的最佳时机。方法MTT比色法。结果康莱特单药对人肺腺癌95D的生长有抑制和化疗增敏作用;康莱特先于化疗药物（多西他赛,DDP）加入对95D的抑制最强。结论康莱特体外对肺癌细胞有抗肿瘤和化疗增敏作用;康莱特先于化疗药加入优于二者同时加入。