西藏小型猪胰岛细胞体外分离和纯化方法

的确定成体西藏小型猪胰岛细胞体外分离、纯化的理想条件,为异种移植治疗糖尿病提供高质量的胰岛细胞。方法对比不同质量浓度的胶原酶（1mg／ml,2mg／ml,3mg／ml,4mg／m1）和同一质量浓度不同时间点（0min,15min,30min,45min,60min,75min,90min）分离获得胰岛细胞的数量和效果;使用Ficoll400密度梯度离心、淋巴分离液分离、离心和静置4种方法纯化胰岛细胞悬液,比较最终收集到的胰岛细胞数量和效果;用DTZ染色计算胰岛细胞的纯度;用AO／PI染色计算胰岛细胞存活率。结果确定了不同质量浓度的胶原酶获取胰岛细胞的最佳时间,胶原酶lmg／ml和2mg／ml组为45min,3mg／ml和4mg／ml组为30min,各组在最佳时间点获得胰岛细胞的数量最多的为1mg／ml组,胰岛细胞形态完整;4种纯化方法中,收集的胰岛细胞数量由多到少依次为静置组〉Ficoll400密度梯度离心组〉离心组〉淋巴分离液离心组。经AO／PI染色后检测胰岛细胞的存活率为95．00％以上。结论在组织块剪碎消化的情况下,胶原酶质量浓度lmg／ml、消化时间45min的分离条件可获得数量较多的胰岛细胞,Ficoll400密度梯度离心的纯化手段收集到的胰岛细胞效果最好。     

低频重复经颅磁刺激对卒中后抑郁大鼠行为学及海马c-fos、c-jun蛋白表达的影响

目的:探讨重复经颅磁刺激(rTMS)对卒中后抑郁(PSD)模型大鼠行为学及海马c-fos、c-jun蛋白表达的影响。方法:筛选40只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、假手术组、模型组和治疗组(n=10)。对照组不给予任何干预处理;模型组和治疗组采用大脑中动脉栓塞法(MCAO)和慢性不可预见温和应激法(CUMS)建立PSD模型;假手术组和治疗组给予rTMS治疗;通过蔗糖水消耗实验、旷野实验和水迷宫实验对各组大鼠行为学进行评估;应用免疫组化实验检测各组大鼠海马c-fos、c-jun的阳性细胞灰度值。结果:(1)蔗糖水消耗实验:与模型组比较,治疗组蔗糖水消耗量明显增多(P0.05);(2)旷野实验:治疗组大鼠水平及垂直得分较模型组有显著提高(P0.05);(3)水迷宫实验:治疗组大鼠较模型组学习和记忆能力都有所改善(P0.05);(4)免疫组化实验:治疗组大鼠c-fos阳性细胞灰度值高于模型组(P0.05),各组间c-jun阳性细胞灰度值差异不显著(P0.05)。结论:rTMS能够有效改善PSD模型大鼠的抑郁样行为,其机制可能与海马c-fos、c-jun蛋白的表达有关。