冲击波对成肌细胞增殖分化的影响

目的:探讨体外冲击波对成肌细胞增殖分化的影响,为进一步开展冲击波在体内骨骼肌损伤中的作用研究奠定基础,为临床应用冲击波治疗提供理论依据。方法:将原代分离培养好的成肌细胞,利用冲击波进行刺激,将实验对象分为空白组、实验组(冲击波刺激)、阳性对照组(成肌诱导剂)。形态学检测肌管形成情况;MTT法检测成肌细胞增殖;流式细胞仪检测成肌细胞凋亡;Western Blot检测肌调节标志物Pax7、MyoD、Myf5、Myf6和Myogenin蛋白;免疫荧光检测Desmin、Pax7、MyoD的表达。结果:(1)结果显示成肌细胞的活力对冲击波刺激呈现剂量依赖性,能流密度高于0.16 mJ/mm~2时细胞的存活率降低,凋亡率高于空白组(P0.05),能流密度为0.08 mJ/mm~2时,冲击次数为500时细胞最高活力。(2)免疫荧光结果显示冲击波可促进MyoD蛋白表达升高,降低Pax7的表达。(3)Western Blot结果显示冲击波可促进MyoD、Myf5、Myogenin、Myf6蛋白表达水平显著增高(P0.05),Pax7蛋白表达随着时间的延长呈递减趋势(P0.05)。MyoD蛋白在实验组和对照组随着时间延长蛋白表达水平都逐渐升高,且实验组的表达水平均高于对照组(P0.05)。(4)细胞形态学观察肌管融合结果显示,成肌细胞在冲击波刺激下呈现多核,实验组、对照组与空白组相比差异具有显著性意义(P0.05)。结论:本实验证实了体外冲击波对成肌细胞的生物学功能有影响,可提高成肌细胞的活力,促进其向肌分化。