重型病毒性肝炎并发心肌损伤的临床观察

重型病毒性肝炎（重型肝炎）并发心肌损伤临床虽非少见,但以临床表现、心肌酶谱、心电图及心脏彩色多普勒综合系统分析文献甚少.我们将本院收治的105例各类重型肝炎的心肌损伤情况作一回顾性总结.     

迈进快速传播感染病研究新成果与新思想的新阶段

2019年,《中华传染病杂志》记录了广大传染与感染学界关心的重要临床事件与关键科学问题,刊发了一系列共识与指南,并第一时间着重报道了我国某地区输入性登革热的临床防控经过.2020年将更为关注可以体现中国感染与传染学界成就和贡献的学术成果.     

结核病诊断技术研发现状与未能满足的临床需求

自2000年中国开始加大发现新结核病患者力度,并实施免费的直接督导下短程治疗(DOTS)方案.经过十余年的努力,结核病的发病率与现患率出现下降趋势,但与期望值仍有差距.据世界卫生组织(WHO)2010年发布的统计数据显示,全球新发结核患者880万,现患病例1100万,中国分别为100万和150万病例,无论是新发还是现患病比例均超过10％.     

不分型流感嗜血杆菌上调人类MUC5AC黏液素的基因表达

目的 探索不分型流感嗜血杆菌(NTHi)上调人类MUC5AC黏液素基因表达的细胞分子机制.方法 通过反转录套式-PCR及实时荧光定量PCR分析NTHi所诱导的MUC5AC mRNA的表达,免疫沉淀及Western印迹法检测NTHi对表皮生长因子受体(EGFR)及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的激活,采用p38 MAPK或EGFR特异性抑制剂,共转染EGFR显性失活质粒,判断在转录水平对NTHi所诱导的MUC5AC表达的影响,并研究EGFR特异性抑制剂对NTHi所诱导p38MAPK激活的影响.结果 在人结肠上皮细胞株(HM3)细胞中,NTHi在mRNA及转录水平上调人类MUC5AC黏液素基因的表达,NTHi能使EGFR或p38MAPK磷酸化.p38MAPK、EGFR特异性抑制剂或共转染EGFR显性失活质粒,可显著抑制NTHi所诱导的MUC5AC的表达,EGFR特异性抑制剂对NTHi所诱导p38MAPK磷酸化有抑制作用.结论 不分型流感嗜血杆菌可通过EGFR-p38MAPK信号通路,上调人类MUC5AC黏液素基因表达.     

吡嗪酰胺耐药性结核分枝杆菌的噬菌体检测技术研究

目的 建立噬菌体生物扩增法（PhaB）快速测定吡嗪酰胺耐药性，并探讨其在结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药性测定中的应用价值。方法 应用建立的PhaB测定108株结核分枝杆菌临床分离株的吡嗪酰胺耐药性，并与绝对浓度法的药敏结果进行比较，对不符合的菌株进行最低抑菌浓度（MIC）测定和序列测定分析。结果 PhaB检测吡嗪酰胺耐药性的最佳测定条件为pH值5．5、药物浓度200μg／ml、37℃作用48h。用绝对浓度法检测108株结核分枝杆菌临床分离株，其中吡嗪酰胺敏感33株、耐药75株；用PhaB检测该108株结核分枝杆菌临床分离株，若以噬菌斑减少95％为判断标准。则吡嗪酰胺敏感32株，耐药76株。2种方法检测均为敏感的为28株，均为耐药的为71株，符合率为91．7％；2种方法检测结果不符的为9株，其中5株的PhaB结果与MIC结果相符，4株的结果不符，测序结果表明9株中有7株的PhaB结果与测序结果相符。如以绝对浓度法药敏结果为判断标准，PhaB检测吡嗪酰胺耐药性的敏感性为94．7％，特异性为84．8％，阳性预测值为93．4％，阴性预测值为87．5％，准确性为91．7％。结论 PhaB测定吡嗪酰胺耐药性简便、快速，3d即可获得药敏结果，可作为吡嗪酰胺耐药性的快速筛选方法。     

结核分枝杆菌北京基因型菌株新型分子遗传标志的鉴定

目的分析结核分枝杆菌北京基因型菌株与非北京基因型菌株间差异表达的蛋白质，寻找可用于快速区分北京基因型的分型标志。方法应用间隔寡核苷酸分型法对56株结核分枝杆菌进行基因分型，经双向电泳技术比较北京基因型菌株与非北京基因型菌株的全菌蛋白表达图谱差异，差异表达的蛋白质通过基质辅助激光解吸-电离飞行时间质谱仪进行质谱分析，蛋白质数据库进行检索。进而对差异表达的蛋白质相应基因及上游进行序列分析。结果56株结核分枝杆菌中有49株为北京型菌株，7株为非北京型菌株。两个基因型菌株中差异明显表达的蛋白质为Rv0927c，该蛋白质斑点在49株北京基因型菌株中均缺失，而在7株非北京菌株和H37Rv中均有出现。北京基冈型菌株Rv0927c基因有两个特征性突变：在421位核苷酸位点的AGC3个碱基缺失，以及该基因上游127位点G—A的突变；而非北京基因型菌株该基因及其上游序列与H37Rv完全相同。结论 Rv0927c基因在北京基因型菌株中的特征性突变，对开发新型区分北京基因型和非北京基因型结核分枝杆菌的方法奠定了基础。     

酶联免疫斑点法在快速诊断活动性肺结核中的应用

目的探讨酶联免疫斑点法（ELISPOT）在临床快速诊断活动性肺结核病中的应用价值。方法：采用T—SPOT．TB试剂盒对36例明确诊断为活动性肺结核的初治患者、30例健康体检者的外周血中结核分枝杆菌特异性T淋巴细胞进行检测,同时对26例活动性肺结核患者做结核菌素（PPD）试验。结果在36例活动性肺结核初治患者和30例健康对照者中,T-SPOT检测的阳性率分别为80．6％与6．7％,此技术用于诊断初治活动性肺结核患者的敏感性为80．6％,特异性为93．3％,阳性预测值为93．5％,阴性预测值为80．0％。在26例同时做PPD试验的活动性肺结核患者中,T-SPOT检测的阳性率略高于PPD试验（80．6％vs61．5％）,但差异无明显统计学意义（P〉0．05）。结论酶联免疫斑点法是一种具有较高敏感性和特异性的检测结核感染的技术,在活动性肺结核病的快速诊断中有较大应用价值。     

不同毒力结核杆菌的纯化蛋白质衍生物对人巨噬细胞凋亡的诱导及其与Toll样受体-2的相关性

目的 了解两种不同毒力结核杆菌的纯化蛋白衍生物刺激下人单核-巨噬细胞(THP-1)凋亡的差异及其与Toll样受体-2(TLR-2)的相关性.方法 分别用等浓度的高毒力结核杆菌衍生蛋白(H37Rv-PPD)和低毒力结核杆菌衍生蛋白(BCG-PPD)在3、8、15和24 h刺激分化成熟的THP-1细胞;Hochest染色后观察细胞凋亡及坏死情况.流式细胞仪检测细胞Annexin V蛋白以判定凋亡及TLR-2表达情况;加入TLR-2阻断剂后,再用流式细胞仪测定细胞表面TLR-2的阻断效果及凋亡情况.结果 BCG-PPD刺激下细胞以凋亡多见,而H37Rv-PPD刺激下细胞核则多呈坏死状.凋亡率随时间升高,第24小时凋亡比例高达30.2%,而同时间点TLR-2的比例为8.8%;应用TLR-2阻断剂后,每个时间点TLR-2表达比例均在3%以下,对应时间点凋亡比例下降,第24小时凋亡比例仅为10.5%.H37Rv-PPD可引起TLR-2高表达,第24小时TLR-2表达率为17.2%,该时间点凋亡率仅为7.7%;TLR-2阻断后,其表达率在对照波动范围内,但凋亡率与TLR-2未阻断前相比变化不大.结论 BCG-PPD主要诱导THP-1的凋亡,且与TLR-2有一定的相关性;而H37Rv-PPD主要诱导THP-1的坏死.

Abstract：

Objective To study the cell death in macrophages (THP-1) stimulated with different agonists (H37Rv-PPD or BCG-PPD) and to investigate the relationship between Toll like receptor (TLR)-2 and THP-1 apoptosis. Methods H37Rv-PPD and BCG-PPD were used to stimulate THP-1 cells for 3 h, 8 h, 15 h and 24 h, respectively with or without TLR-2 blockade. Cells were analyzed by flow cytometry to detect the TLR-2 expression. Annexin V staining and Hochest staining were performed to evaluate apoptosis. Results The apoptosis cells were increased when stimulated with BCG-PPD and the percentage was 30.2% at 24 h, which were confirmed by Hochest staining.However, the expression of TLR-2 did not increase simultaneously with percentage of 8.8% at 24 h.Nevertheless, most cells presented with necrosis form when stimulated with H37Rv-PPD and the expression of TLR-2 remained at high level with the percentage of 17.2% at 24 h, while the percent of apoptosis rate was only 7.7%. Under treatment of TLR-2 antibodies, the percentage of apoptosis decreased to 10.5% at 24 h of BCG-PPD stimulation and TLR-2 expressions were down-regulated to less than 3% at all time points; but after H37Rv-PPD stimulation, the percentage of apoptosis and TLR-2 expression did not changed obviously. Conclusions The attenuated BCG-PPD induces THP-1 apoptosis predominately, which is partially correlated with TLR-2 expression. While virulent H37Rv-PPD induces THP-1 necrosis predominately.     

噬菌体生物扩增法检测涂片阳性痰标本中结核分枝杆菌对利福平的耐药性

世界卫生组织/结核和肺病(WHO/IUATLD)抗结核药物耐药监测报告中所提及的国家都发现有结核病耐药.WHO估计全球约5000万人感染耐多药结核分枝杆菌(MDR-TB).每年MDR-TB患者约40多万,其中50%是新发病例.2003年WHO在直接督导下的短程化疗(DOTS)策略的基础上,提出DOTS-plus控制耐多药结核病的策略.然而,如何早期诊断耐多药结核病,一直是结核病研究的热点.目前,临床药物敏感试验主要为培养法,如比例法、绝对浓度法、Bactec960等.