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1.
目的 基于重叠延伸PCR(SOE PCR)技术构建转录因子EB(TFEB)丝氨酸114位点突变体原核表达质粒,并进行体外诱导表达和纯化。 方法 根据SOE PCR技术原理设计突变引物,以pGEX-6p-1-TFEB质粒为模板,分别采用外侧引物F和R及突变引物Fn和Rn进行第1步PCR扩增,获得含突变位点的产物1和产物2。经第2步PCR退火延伸对产物1和产物2进行重叠拼接,以拼接后DNA片段为模板,采用外侧引物F和R进行第3步PCR扩增获得含突变位点的目的DNA;将其克隆至pGEX-6p-1载体,采用BamH Ⅰ和Sal Ⅰ进行酶切鉴定,DNA测序验证突变结果。于大肠杆菌(E.coli)中分别采用不同浓度异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在不同条件下诱导TFEB及其突变体重组蛋白表达。Glutathione-Sepharose 4B琼脂糖凝珠分离纯化蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳检测纯化产物蛋白浓度和相对分子质量。 结果 第1步PCR扩增获得均含有突变位点的2条DNA片段,经第2步PCR退火延伸和第3步PCR扩增后获得大量含有突变位点的完整DNA片段。双酶切鉴定,连接的DNA片段与目的片段大小一致。DNA测序显示TFEB的114位丝氨酸(TCT)成功突变为丙氨酸(GCT)。在0.5?mmol·L-1 IPTG、16?℃诱导过夜条件下获得TFEB及其突变体的可溶性蛋白表达。SDS-PAGE凝胶电泳,纯化后蛋白浓度较高,分子大小正确。 结论 利用SOE PCR技术成功实现了TFEB丝氨酸114位点的定点突变,并且TFEB及其突变体基因在E.coli中成功表达。  相似文献   
2.
3.
目的 探讨影响山东省发热伴血小板减少综合征(SFTS)发病的危险因素,为科学防制该病提供依据。方法 应用1∶2匹配的病例对照研究方法,调查收集病例、对照的基本情况、可疑暴露因素等信息,采用单因素和多因素的配对条件logistic回归分析发病危险因素。结果 本研究共纳入374例SFTS确诊病例和748例对照。分析结果显示,有病例接触史(OR = 5.84,95%CI:1.11~30.88)、有家养动物(OR = 1.74,95%CI: 1.02~2.96)、近1个月见过蜱(OR = 5.85,95%CI: 2.73~12.53)、近2周有蜱叮咬史(OR = 29.58,95%CI: 6.70~130.60)、从事田间作业(OR = 2.63,95%CI:1.41~4.91)、住宅周围环境有杂草/农作物/菜地(OR = 3.24,95%CI:1.74~6.05)和住宅卫生条件差(OR = 2.20,95%CI:1.32~3.66)是SFTS发病的危险因素(P<0.05),近1个月有亲邻发病(OR = 0.01,95%CI:0~0.03)、采取防护措施(OR = 0.21,95%CI:0.10~0.46)是SFTS发病的保护因素(P<0.05)。结论 接触病例、饲养家养动物、蜱叮咬、无防护措施的野外作业及住宅周围环境卫生较差等是影响山东省SFTS发病的危险因素。应加强重点人群SFTS健康教育和行为干预,减少危险因素暴露,以控制SFTS传播。  相似文献   
4.
目的 探讨奥希替尼靶向药联合培美曲塞、顺铂方案化疗对晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者无进展生存期及总生存期的影响。方法 选取收治的82例晚期NSCLC患者作为研究对象,采用随机数字表法将患者分为观察组和对照组,每组各41例。对照组予以培美曲塞联合顺铂化疗,观察组在对照组基础上联合奥希替尼化疗。比较两组临床疗效、毒副反应,治疗前、治疗后评估两组患者血清肿瘤标志物[糖类抗原50(CA50)、癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)]、免疫功能,随访观察患者预后状况。结果 观察组治疗总有效率更高(P<0.05)。治疗9周后,两组CA50、CEA、CYFRA21-1均低于治疗前(P<0.05),观察组治疗后各指标水平更低(P<0.05)。治疗9周后,观察组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均高于治疗前(P<0.05),对照组CD3+低于治疗前(P<0.05),观察组治疗后各指标水平高于同期对照组(P<0.05)。...  相似文献   
5.
目的探讨屈肌腱滑动训练配合中药熏洗在促进手外伤患者手功能康复中的应用效果。方法选取2017年8月—2020年8月本院收治的110例手外伤患者作为研究对象,按照双色球法将其随机分为研究组及对照组,每组各55例;两组均予以常规康复训练,对照组在此基础上予以中药熏洗治疗,研究组予以中药熏洗治疗联合屈肌腱滑动训练,比较两组干预前后手部肌力、活动度、整体功能、疼痛情况、生活自理能力及手部遗留症状。结果干预后研究组手部各肌力、手部TAM评分、Carroll评分及Barthel指数均较干预前升高,高于对照组;干预后研究组VAS评分降低,低于对照组,手部遗留症状总不适率为20%,低于对照组(40%),P<0.05。结论屈肌腱滑动训练配合中药熏洗可有效缓解手外伤患者的疼痛,减少肌腱粘连,改善手部遗留症状,促进手功能恢复,具有临床应用与推广价值。  相似文献   
6.
目的:探讨公立医院医疗新技术临床应用管理体系及实践效果。方法:以某公立医疗机构为研究对象,通过文献理论研究和实践验证法探索建立新技术临床应用管理体系,并分析其在实践过程中的效果。结果:提高了医务人员申报新技术的积极性,医院专科综合实力得到显著增强,患者满意度大大提高。结论:公立医院医疗新技术临床应用管理体系有助于规范临床新技术应用的全过程管理,可促进新技术的良性发展,提高医疗服务水平。  相似文献   
7.
目的 探讨人胶质母细胞瘤(GBM)组织微小核糖核酸-4516(miR-4516)的表达情况及其与病人预后的关系。方法选取 2015年 1月~2019年 5月手术切除的 GBM组织 89例和颅脑损伤内减压术切除的非肿瘤脑组织 35例为对照组,采用 qRT-PCR检测 miR-4516的表达水平,根据 miR-4516表达水平的中位数分为高表达和低表达。GBM病人术后随访 2年,记录生存情况。结果 GBM组织 miR-4516表达水平([ 5.32±1.75)]明显高于对照组([ 1.13±0.45);P<0.01]。术后 2年随访,42例(47.19%)生存,47例 47(52.81%)死亡。多因素 Cox回归分析显示,miR-4516高表达是 GBM生存预后病例的独立危险因素(P<0.05)。生存曲线分析显示 miR-4516高表达组 2年累积生存率(27.45%)明显低于低表达组(73.68%;P<0.001)。结论 GBM组织 miR-4516表达增高,其高表达是病人预后不良的危险因素。  相似文献   
8.
目的探讨肾周脂肪梅奥粘连概率评分系统(MAP)在肾癌后腹腔镜肾部分切除术中的临床应用价值。 方法回顾性分析2015年1月至2020年6月徐州医科大学附属淮安医院泌尿外科收治的行后腹腔镜肾部分切除术的153例肾癌患者的临床病例资料。依据MAP评分系统将其分为低度复杂组、中度复杂组和高度复杂组三组。比较各组间的手术时间、术中出血量、术中及术后并发症、术中热缺血时间、术后住院时间及术后血肌酐变化情况。 结果在153例患者中,低度复杂组68例,中度复杂组58例和高度复杂组27例。三组患者在年龄、性别、术前血肌酐水平、肿瘤最大径、肿瘤位置、BMI、RENAL评分等方面差异无统计学意义(P>0.05)。随着复杂程度的提高,手术时间、术中出血量也在不断增加(P<0.05);而术中热缺血时间、术后住院时间及术后血肌酐水平无明显变化(P>0.05)。在术中并发症方面,随着复杂程度的提高,术中并发症的发生率也在增加(P<0.05),且高度复杂组的术后并发症发生风险是低度复杂组的13.895倍(P=0.002),MAP评分系统预测术中并发症发生的精度较高(AUC=0.757,P=0.002)。但是术后并发症各组比较差异无统计学意义(P>0.05)。 结论MAP评分系统在肾癌后腹腔镜肾部分切除术中,对预估手术难度及术中并发症发生风险有较好的临床应用价值。  相似文献   
9.
儿童早期发展是从受精卵到8岁儿童体格、心理和社会能力的生长和发育,其发展过程受到遗传、环境等多方面影响。其中,新生儿的优质营养是儿童早期发展的重要物质基础,新生儿期的母乳喂养、新生儿疾病的筛查、早产儿和低出生体重儿的合理喂养都是促进儿童早期发展的关键之一。本文将从新生儿营养的角度,全面总结其对儿童早期发展的作用,为更好地优化母婴营养,促进儿童早期发展提供新的方向与参考。  相似文献   
10.
目的 采取前瞻性设计、多中心随机对照临床研究方法,探讨国产内镜新光学染色技术——聚谱成像(spectral focused imaging,SFI)及光电复合染色成像(variable intelligent staining technology,VIST)对于胃癌前病变的诊断价值。方法 2020年8月—2021年5月,采用同一技术方案在河北医科大学第一医院、上海市第十人民医院、苏州大学附属第二医院,将拟行胃镜检查的患者随机分成白光组和新光学染色组,采取序贯检查方式(白光→新光学染色或新光学染色→白光),分别记录两组先行白光或先行新光学染色检查时的内镜诊断结果和幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, HP)感染的判断结果;同时对两组的胃黏膜萎缩、肠上皮化生、皱襞肿大、结节性胃炎和弥漫性发红5个方面进行内镜胃癌风险评分。结果 共入组病例合计419例,白光组208例,新光学染色组211例。结合内镜及病理学结果,对胃内炎症、萎缩、肠上皮化生、低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变、进展期癌病变,白光组检出率分别为:28.9%、40.4%、64.9%、17.8%、0.5%、0.5%,新光学染色组检出率为:30.8%、42.7%、62.6%、15.2%、2.8%、0.5%,检出率组间差异无统计学意义(P>0.05);以病理结果为金标准,计算国产内镜诊断各类病变的灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值,对胃黏膜萎缩的诊断白光组分别为92.9%、61.3%、74.0%、61.9%、92.7%,新光学染色组(SFI模式)为94.4%、64.5%、77.3%、66.4%、94.0%;对胃黏膜肠上皮化生的诊断,白光组为68.1%、72.6%、69.7%、82.1%、55.2%,新光学染色组(VIST模式)为87.1%、89.9%、88.2%、93.5%、80.7%,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05);以13C尿素呼气试验(13C?urea breath test, 13C?UBT)结果为金标准,对HP感染判断,白光组为90.2%、84.3%、87.4%、86.8%、88.2%,新光学染色组为92.6%、77.1%、85.4%、82.2%、90.1%;胃癌风险评分≥4分的病例,新光学染色组高危病变的占比更高(P<0.05)。结论 国产内镜新光学染色技术对胃黏膜肠上皮化生有较高的诊断价值,优于白光内镜;以胃癌风险评分为工具进行精查胃镜有助于胃癌前病变的检出;国产内镜新光学染色技术对胃癌前病变及HP感染诊断效能与进口内镜相近,是发现胃黏膜癌前病变的有效手段。  相似文献   
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