细粒棘球绦虫Eg95抗原基因疫苗体外瞬时表达及对小鼠诱导的免疫应答

目的　检测细粒棘球绦虫Eg95抗原基因疫苗(pcDNA3 Eg95)体外瞬时表达,探讨其诱导小鼠的体液和细胞免疫效果。　方法　pcDNA3 Eg95经脂质体转染HeLa细胞瞬时表达。逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测Eg95抗原信使RNA(mRNA)在HeLa细胞中的表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)和蛋白质印迹法(Westernblot ting)检测Eg95蛋白的瞬时表达情况。pcDNA3 Eg95基因疫苗肌肉注射免疫BALB/c小鼠,ELISA检测IgG和IgG2a水平,四甲基偶氮唑盐试验(MTT法)检测免疫小鼠T淋巴细胞增殖反应。　结果　RTPCR检测结果显示,pcD NA3 Eg95瞬时表达组有Eg95抗原基因mRNA表达,ELISA和Westernblotting检测结果表明,可在HeLa细胞中特异性表达Eg95蛋白。用pcDNA3 Eg95基因疫苗免疫BALB/c小鼠,第3周出现特异性IgG免疫应答,持续升高至第10周,显著高于对照组。从第2周开始,小鼠血清IgG2a应答即为阳性,且长时间(至第10周 )维持较高水平,与pcD NA3空质粒组比较,其差异具有非常显著性意义(P<0.01)。用原核表达的Eg95重组蛋白刺激免疫小鼠脾细胞,有明显的T细胞增殖反应。pcDNA3 Eg95基因疫苗免疫组刺激指数明显高于pcDNA3空质粒组(P<0.01)。结论　pcDNA3 Eg95基因疫苗可诱发小鼠产生特异的体液免疫和细     

第333例--腹痛、呕吐、消瘦

病历摘要患者男,48岁,因上腹痛7个月,于2005年5月27日入院。患者7个月前开始无明显诱因出现上腹痛,位于脐上偏右,为持续隐痛或钝痛,饥饿时明显,伴有反酸、烧心,疼痛不向肩背部放散,无恶心、呕吐。行全消化道钡餐造影见十二指肠球部变形,食管、胃和各组小肠未见异常,行胶囊内镜检查亦未见小肠病变,结肠镜检查未见异常,诊断为十二指肠球部溃疡。此后多次门诊复诊,一直服用奥美拉唑,症状可暂时减轻,但无根本好转,并逐渐出现腹胀、进食后呕吐、消瘦。此次入院前行胃镜检查见幽门、十二指肠球部变形,水平部见1个病变的局部,未能窥视全貌,呈形态不…     

HPLC法测定醋酸地塞米松搽剂中醋酸地塞米松的含量

目的建立高效液相色谱法测定醋酸地塞米松搽剂中醋酸地塞米松的含量.方法采用Agilent高效液相色谱仪,流动相为乙腈-水(40∶60),流速1.5mL·min-1,检测波长240 nm,柱温:35℃.结果醋酸地塞米松在7.812～85.932μg·mL-1范围内,线性关系良好,r=0.999 9,回收率为99.3%.结论本法可准确测定醋酸地塞米松搽剂中醋酸地塞米松的含量,适用于产品的质量控制.     

细胞分裂周期蛋白42mRNA和蛋白在食管鳞癌中的表达及其病理生物学意义

目的 探讨细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达及其与临床病理参数间的关系.方法 应用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹和免疫组织化学方法,从mRNA和蛋白两个水平检测ESCC中Cdc42的表达,并分析其与临床病理参数的关系.结果 22对新鲜ESCC与癌旁正常组织中,Cdc42 mRNA在ESCC中的表达量(0.21±0.14)显著高于其在癌旁正常组织中(0.16±0.12)的表达(P＜0.05);Cdc42蛋白在ESCC中的表达量(0.83±0.35)高于其在癌旁正常组织中(0.75±0.24)的表达;在175对ESCC中,Cdc42蛋白的阳性表达率为73.7%(129/175),高于其在配对的癌旁正常组织中的表达62.9%(110/175,P＜0.05).此外,Cdc42的表达与ESCC患者的年龄、淋巴结转移及分化程度明显相关(P＜0.05).结论 Cdc42可能参与ESCC发生及转移的过程.

Abstract：

Objective To explore the expression of cell division cycle 42 (Cdc42) in human esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) and investigate the association between Cdc42 and clinicopathological parameters. Methods The expression levels of Cdc42 mRNA and protein in ESCC and corresponding adjacent normal tissues were detected by real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction ( qRT-PCR), Western blotting and immunohistochemistry, respectively. The correlations between Cdc42 expression and clinicopathological parameters were analyzed. Results The expression of Cdc42 mRNA was significantly higher in ESCC tissues (0. 21 ± 0. 14 ) than that in corresponding controls (0. 16 ±0. 12) (t test,P ＜0. 05). The protein expression of Cdc42 was significantly higher in ESCC tissues (0. 83 ± 0. 35 ) than that in corresponding controls ( 0. 75 ± 0. 24). Immunohistochemistry revealed that 73.7% (129/175) of the ESCC samples had higher expression of Cdc42 protein than the corresponding controls[62. 9% (110/175) (χ2 test, P ＜ 0. 05 )]. Cdc42 expression level was correlated with age,lymphoid node metastasis and differentiation ( P all ＜ 0. 05 ), but not with the clinicopathological features,such as gender, ethnicity and macroscopical types (P ＞ 0. 05 ). Conclusion The higher expression of Cdc42 played a certain role in the carcinogenesis and metastasis of ESCC.     

Fas及Caspase家族在泡球蚴感染宿主肝脏中的表达及其意义

目的 探讨细胞凋亡信号分子Fas及Caspase家族在肝泡球蚴病宿主中的表达及意义.方法 16例配对泡型包虫患者(AE)肝脏标本,16只雌性BALB/C小鼠.分析肝脏标本中肝细胞病理变化、凋亡及Fas、Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达.结果 AE患者病灶周围肝细胞水肿,汇管区周围纤维化,肝细胞造型坏死;病灶周围肝细胞发生显著凋亡[(74.0±15.0)％比(4.2±3.3)％],Fas[ (71.3±19.0)％比(5.2±1.6)％]、Caspase-3[ (39.4±18.3)％比(3.3±2.9)％]、Caspase-8[ (37.6±3.5)％比(4.0±1.8)％]和Caspase-9[ (24.7±13.8)％比(2.0±1.4)％]高表达(P＜0.05).泡球蚴感染小鼠病灶处可见囊泡,肝组织纤维化严重;肝细胞发生显著凋亡[(37.5±5.2)％比(13.9±2.7)％],Fas[ (48.3±6.2)％比(4.6±1.2)％]、Caspase-3[(29.7±6.3)％比(5.2±1.9)％]、Caspase-8[ (23.1±2.9)％比(3.5±1.4)％]和Caspase-9[( 16.7±3.2)％比(2.3±1.1)％]高表达(P＜0.05).结论 泡球蚴感染引起宿主肝细胞凋亡,提示Fas及Caspase家族介导的细胞凋亡信号通路可能参与了泡球蚴所致肝损伤进程.     

建构主义理论对病理生理学教学的启示

建构主义是一种认知学习理论,体现“以学生为主体,教师为主导”的教学思想,强调学生学习的主动性和情境性,对当前的教育改革具有重要的指导意义。开展基于建构主义学习理论的教学实践,有利于培养富有创新能力和实践能力的高等医学人才。文章阐述了建构主义学习理论及其在病理生理学教学中的应用。     

ERK1/2MAPK通路在Eca109细胞体外增殖和迁移中的作用及其机制

目的观察ERK1/2 MAPK通路在食管鳞状细胞癌(ESCC)Eca109细胞系增殖和迁移中的作用并探讨其作用机制。方法使用MAPK(ERK1/2)抑制剂U0126处理Eca109细胞;细胞计数检测细胞增殖;倒置显微镜下观察细胞形态;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ERK1/2 mRNA;Western blot检测总ERK1/2(t-ERK1/2)和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2);MTT和细胞划痕实验检测细胞增殖和迁移能力;qRT-PCR检测MicroRNA-21(miR-21)。结果20μmol/L浓度的U0126可抑制Eca109细胞生长(P<0.05),破坏细胞正常形态,ERK1/2 MAPK通路的活化在蛋白质水平被抑制(P<0.05),Eca109细胞增殖和迁移明显减弱(P<0.05),显著下调miR-21的表达(P<0.05)。结论ERK1/2 MAPK信号通路抑制可减弱Eca109细胞增殖和迁移,其可能的作用机制之一与其抑制miR-21表达有关。     

原花青素对脑缺血再灌注小鼠脑组织细胞因子、一氧化氮合酶和血脑屏障的影响

目的探讨葡萄籽原花青素对缺血再灌注小鼠脑组织细胞因子、一氧化氮合酶和血脑屏障通透性的影响。方法采用夹闭小鼠双侧颈总动脉30 min再灌注72 h的脑缺血再灌注模型,并于双侧颈总动脉夹闭时及再灌注后每隔24 h分别腹腔注射蒸馏水、葡萄籽原花青素(10、20及40 mg/kg)和尼莫地平(2 mg/kg)。在处死动物前1 h经尾静脉注射2%伊文思蓝,采用ABC-ELISA法检测脑组织中白细胞介素1β和白细胞介素10含量,采用分光光度法检测脑组织中一氧化氮合酶活性及伊文思蓝含量。同时光镜观察小鼠海马CA1区脑组织的病理变化。结果与假手术组相比,缺血再灌注组脑组织中白细胞介素1β含量、一氧化氮合酶活性及伊文思蓝含量明显增高(P<0.01),而白细胞介素10含量降低,但无统计学意义。与缺血再灌注组相比,葡萄籽原花青素及尼莫地平治疗组脑组织中白细胞介素1β含量、一氧化氮合酶活性及伊文思蓝含量有不同程度的降低,而白细胞介素10含量有不同程度的升高。病理学组织检查发现,葡萄籽原花青素能改善脑缺血再灌注所造成的神经细胞损伤,减少神经细胞坏死。结论葡萄籽原花青素可能通过降低小鼠脑缺血再灌注时一氧化氮合酶活性和促炎因子白细胞介素1β含量,提高抗炎因子白细胞介素10含量进而降低血脑屏障的通透性而发挥脑保护作用。     

抗细粒棘球绦虫成虫单克隆抗体的制备及鉴定

目的 建立能分泌与细粒棘球绦虫(简称包虫)成虫特异结合的抗包虫成虫单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法 用包虫成虫抗原免疫BALB／c小鼠后，获取免疫的脾细胞，与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0融合。结果 ELISA方法筛选出1株能持续稳定分泌抗包虫成虫单克隆抗体的杂交瘤细胞株，1F5E3C9E9D5杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体可以与包虫成虫、棘球蚴结合，与囊液抗原呈边缘性阳性反应，而与泡球蚴EM2抗原呈阴性反应。冻存1个月后复苏，仍能稳定分泌。经免疫组织化学检测发现，该单克隆抗体与棘球蚴的生发层，棘球蚴原头节虫体呈阳性反应。结论 1F5E3C9E9D5是一株稳定的杂交瘤细胞株，所分泌的抗细粒棘球绦虫成虫单克隆抗体在粪抗原的检测方面有应用前景。     

O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因多态性与新疆哈萨克族食管癌易感性关系的研究

目的 为探讨O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)基因多态性与新疆哈萨克族食管癌易感性的关系. 方法 运用病例-对照研究的方法,PCR-RFLP技术检测新疆哈萨克族食管癌51例及非癌对照109例的MGMT 84C>T和MGMT 135G>T单核苷酸多态(SNPs)的基因型. 结果 MGMT 84C>T位点的三种基因型CC,CT,TT,在哈萨克族食管癌中所占比例分别为76.5%(39/51) 、17.6%(9/51) 、5.9%(3/51),对照组分别为77.0%(84/109)、18.3%(20/109)、4.6%(5/109),两组间分布差异不显著(P=0.938,P>0.05);MGMT 135G>T位点的三种基因型GG,GT,TT,在哈萨克族食管癌中所占比例分别为90.2%(46/51)、7.8%(4/51)、2.0%(1/51),对照组分别为82.6%(90/109)、16.5%(18/109)、0.9%(1/109),两组间分布差异不显著(P=0.295,P>0.05);MGMT 84C>T位点和MGMT 135G>T位点联合分析,在食管癌组0突变等位基因与1-4突变等位基因所占比例分别为68.6%(35/51)、31.4%(16/51);对照组分别为:63.3%(69/109)、36.7%(40/109),两组间分布差异也不显著(P=0.511,P>0.05). 结论 MGMT 84C>T和MGMT 135G>T SNPs与哈萨克族食管癌易感性可能无关联.