木瓜提取物的抗炎活性研究

目的 研究不同部位木瓜提取物在细胞水平上的抗炎作用及机制.方法 依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取已用65％乙醇抽提的木瓜粉末,得到乙酸乙酯、正丁醇及水溶性部位提取物;建立THP-1及L929细胞炎症模型,用MTr法检测3个部位提取物的抗炎活性.利用核转录因子(NF-κB)报告基因系统检测NF-κB的活性,并用半定量PCR检测药物处理后细胞内炎症反应相关基因的表达.结果 与对照组比较,用乙酸乙酯部位处理后的THP-1细胞内Toll样受体及其下游炎症因子的表达水平明显下降,且用该组上清液处理后的L929细胞的活细胞数明显高于其他组.结论 木瓜的乙酸乙酯部位提取物具较好的抗炎效果.     

蛋白酶激活受体-2对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响

Objective To investigate the effect of protease-activated receptor2 (PAR-2) on rat apoptotic cardiomyocytes underwent iachemia reperfusion (I/R) injury. Methods Healthy male Sprague-Dawley rats were randomly divided into five groups (n = 8 each): sham-operation group, I/R (ligating the left coronary artery for 30 minutes and followed by 120 minutes reperfusion) group and three SLIGRL-NH2 groups treated with intravenous PAR-2 agonist SLIGRL-NH2 at different doses (0.5,1,3 mg/kg) 5 minutes before reperfusion. Apoptic cardiomyocytes was detected by TUNEL staining and by DNA ladder on agarose gel electrophoresis. Bax and Bcl-2 expression in myocardium was analyzed by immunohistochemical technique. The mRNA expression of PAR-2 was determined by Real-time quantitative polymerase chain reaction(RT-PCR). Results (1) The apoptosis index and the expression of Bcl-2 and Bax were significantly increased in IR group and SLIGRL-NH2 groups than those in sham group (P<0. 05～0.01). (2) Compared with I/R group, the apoptosis index and the expression of Bax were significantly reduced while the expression of Bcl-2 and PAR-2 mRNA were significantly upregnlated by SLIGRL-NH2 in a dose-dependent manner. (3) DNA Agarose gel electrophoresis demonstrated that DNA ladder existed in I/R and 0.5 mg/kg SLIGRL-NH2 group, but not in 1,3 mg/kg SLIGRL-NH2 groups. Conclusions PAR-2 agonist SLIGRL-NH2 could reduce myocardial apoptosis by upregulating the Bcl-2 and PAR-2 mRNA level and downregnlating Bax expression in a dose-dependent manner in this rat I/R model.     

循环miRNA在胃癌早期诊断及预后中的研究进展

胃癌（ Gastric Cancer ）是最常见的恶性肿瘤之一,全球每年共有951000人被诊断为胃癌,其中723000人死亡,其发病率在所有恶性肿瘤中排第5位［1－2］。由于缺乏有效的临床早期诊断和治疗的肿瘤分子标志物,大多数胃癌患者确诊时已是中晚期,故而导致疗效不佳,死亡率依旧高居不下,患者的5年生存率仅有25％左右［3］。 MicroRNA是一类长度约为18～22 nt的非编码小RNA,它是生物体内重要的转录后调控子,参与细胞的多种生命过程,在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。 miRNA可以调控胃癌相关癌基因和抑癌基因的表达来影响胃癌的细胞增殖、凋亡、侵袭、转移和血管生成等过程［4］。 miRNA在组织、血清、血浆和其他各类体液中均能够稳定存在,被认为是潜在的肿瘤生物标记物［5］,对肿瘤的早期诊断和预后评估具有重要意义,本文介绍了循环miRNA在胃癌的早期诊断及预后判断的最新研究现状。     

木瓜发酵工艺及其抗氧化活性研究

目的:研究湖北长阳县皱皮木瓜的发酵工艺,以抗氧化活性作为活性评价标准优化发酵参数。方法:通过比色法建立双氧水诱导红细胞溶解的氧化损伤模型。应用单因素实验测定不同条件对木瓜发酵的抗氧化活性影响。结果:通过调整实验条件建立了稳定的H2O2诱导红细胞溶解的氧化模型。通过木瓜发酵提取液体外抗氧化活性试验,建立最佳发酵模型,得到了木瓜发酵影响因素的最佳条件:糖浓度2.0g/100ml、发酵温度37.0℃、发酵时间2天、发酵初始pH 4.0。结论:应用体外抗氧化活性模型,获得具有较好的抗氧化生物学活性的木瓜发酵条件。     

天花粉蛋白突变体的构建及其与重组天花粉在原核系统中的表达和纯化

目的:对天花粉蛋白(TCS)的第120-123位氨基酸进行缺失突变,并在原核系统中对其进行表达和纯化。方法:利用重叠延伸PCR的方法得到TCS突变体cDNA,并克隆入原核表达载体pET-28(a+)。酶切和测序鉴定后,将突变体质粒pET-28(a+)-mTCS转化BL21(DE3)表达菌,经IPTG诱导表达后,对表达产物用Ni2+-NTA亲和层析柱进行纯化和Western-blot鉴定。结果:利用重叠延伸PCR成功获得突变天花粉蛋白的编码序列,并构建pET-28(a+)-mTCS原核表达质粒。在BL21(DE3)菌中,突变体蛋白(mTCS)可被IPTG诱导性表达,并被Ni2+-NTA树脂有效纯化。结论:本实验成功获得一种突变体TCS,并建立该突变TCS的原核表达和纯化的实验方法。     

超声微泡介导微RNA治疗肝细胞癌的研究进展

基因治疗正逐渐成为肝细胞癌（HCC）、尤其晚期HCC的治疗方案。足够剂量的特定微RNA（miRNA）可抑制HCC细胞生长,超声微泡介导基因和药物递送治疗策略可促使miRNA于肿瘤区域靶向释放,从而达到治疗效果。本文对超声微泡介导miRNA治疗HCC研究进展进行综述。     

顺铂联合米托蒽醌调节脑胶质瘤U87细胞Sonic Hedgehog信号通路的研究

目的：观察米托蒽醌（Mitoxantrone,MXT）联合顺铂（Cisplatin,CDDP）对脑胶质瘤U87细胞杀伤活性及对Sonic Hedgehog信号通路的影响。方法：应用MTT法检测不同浓度米托蒽醌、顺铂以及两药物联合对U87细胞成活率的影响。显微镜观察细胞的形态变化DiOC6荧光染料对细胞线粒体染色检测其膜电位变化来反映细胞凋亡。RT-PCR法检测顺铂、米托蒽醌及两药联合对U87细胞Gli1和Ptch基因表达的影响。结果：MTT结果显示顺铂、米托蒽醌均可以有效抑制U87细胞的增殖,当米托蒽醌和顺铂浓度≤0.625μg/ml时,两药联合对U87细胞增殖具有协同抑制作用;细胞形态变化及线粒体膜电位结果显示,单药处理可促进U87细胞凋亡,而联合用药可以协同促进U87细胞的凋亡;RT-PCR法检测显示顺铂对Gli1基因的表达有上调作用,而米托蒽醌、米托蒽醌联合顺铂能下调Ptch和Gli1基因的表达。结论：胶质瘤U87细胞在化疗药物米托蒽醌以及两药物联合作用下可影响Sonic Hedgehog信号通路,协同发挥其促凋亡作用,进而增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。