小檗碱对高糖诱导心肌细胞AMPK-AS160-GLUT4通路的调节及保护作用

目的探讨小檗碱对高糖诱导心肌细胞AMPK-AS160-GLUT4通路调节及保护作用。方法体外培养大鼠H9c2心肌细胞系,设置组别为健康对照组、高糖模型组、不同浓度小檗碱组(25、50、100μmol/L)并分别处理。CCK-8法检测细胞增殖与毒性; Annexin V-FITC/PI双染实验观察小檗碱对高糖诱导心肌细胞凋亡的影响;鬼笔环肽染色观察心肌细胞骨架; Western blot法检测小檗碱对高糖诱导心肌细胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化糖代谢调节蛋白(P-AS160)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、丙酮酸脱氢酶(PDH)蛋白表达的影响。结果 CCK-8检测结果可见高糖诱导心肌细胞的细胞活力100μmol/L小檗碱组显著高于模型组(P 0. 05); Annexin V-FITC/PI双染实验结果显示心肌细胞凋亡率100μmol/L小檗碱组显著低于模型组(P 0. 01);心肌细胞骨架观察结果显示,小檗碱可改善心肌细胞肥大情况。Western blot结果显示AMPK与AS160的磷酸化程度小檗碱组明显高于模型组(P 0. 01),丙酮酸脱氢酶(PDH)含量100μmol/L小檗碱组明显高于模型组(P 0. 01),心肌细胞膜上GLUT4含量50、100μmol/L小檗碱组明显高于模型组(P 0. 01)。结论小檗碱可改善高糖诱导心肌细胞损伤,提高心肌细胞葡萄糖代谢效率,其作用机制可能与调控AMPK-AS160-GLUT4信号通路有关。     

Nrf2/HO-1/GPX4对高糖诱导足细胞铁死亡的影响及小檗碱的干预机制研究

目的探究小檗碱对高糖诱导下足细胞铁死亡的作用机制。方法Western blot法和RT-qPCR法检测desmin、podocin、GPX4、PTGS2、ACSL4在高糖刺激0 h、6 h、12 h、24 h、36 h的变化情况以及小檗碱对高糖情况下Nrf2、HO-1、GPX4和podocin的影响;EdU观察高糖刺激不同时间足细胞的增殖情况;CCK-8法测定足细胞的活力;荧光倒置显微镜,GSH和GSSG试剂盒检测小檗碱对高糖诱导下足细胞氧化应激水平的影响;激光共聚焦显微镜观察desmin的表达;透射电子显微镜观察足细胞的超微形态特征。结果Podocin和GPX4蛋白表达量在24 h明显降低,ACSL4和PTGS2的mRNA水平显著上调。小檗碱明显改善ROS和GSH的水平,上调Nrf2、HO-1、GPX4和podocin的表达,降低PTGS2和ACSL4的水平,从而缓解高糖情况下足细胞质膜起泡、线粒体皱缩等变化。结论在高糖环境下,足细胞会发生不同于自噬、凋亡的另一种数量减少的现象,即铁死亡。小檗碱可以缓解此现象的发生,其机制可能与Nrf2/HO-1/GPX4通路有关。     

小檗碱对高糖高脂饲料联合链脲佐菌素诱导的糖尿病心肌病大鼠的保护作用

目的观察小檗碱(BBR)干预对糖尿病心肌病大鼠心肌以及心脏功能的影响。方法建立高糖高脂饲料联合链脲佐菌素(STZ)诱导的2型糖尿病心肌病大鼠模型,另设健康对照组(NC),模型大鼠按照随机数字表法分为糖尿病心肌病组(DCM),小檗碱组(BBR 100 mg/kg、200 mg/kg),二甲双胍组(二甲双胍200mg/kg),曲美他嗪组(曲美他嗪10 mg/kg)。NC组和DCM组灌胃等量的溶媒,其他组灌胃相应剂量的该药物,持续12周,超声检测大鼠的左心室射血分数(LVEF),短轴收缩率(FS),E/A比值,全自动生化分析仪检测大鼠血清中的空腹血糖(FBG),三酰甘油(TG),胆固醇(TC),肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量,计算心脏质量/体质量值(HW/BW),HE染色和Masson染色观察大鼠心肌的组织形态变化。结果与NC组相比,DCM组大鼠血清FBG,TG,TC,CK,LDH,AST含量明显增加(P 0. 05),心脏质量与体质量比增加(P 0. 05),心脏FS和E/A(P 0. 05)值明显下降,LVEF降低(P 0. 05),HE染色可观察到DCM组心肌纤维断裂,排列紊乱,Masson染色则显示出DCM组胶原纤维含量增加;与DCM组比较,BBR高剂量组FBG,TG,CK,LDH,AST含量均下降(P 0. 05),TC含量和心脏质量与体质量比降低(P 0. 05),心脏的LVEF和FS值(P 0. 05)增加,E/A也增加(P 0. 05),心肌损伤即纤维化程度较DCM组轻。结论小檗碱对2型糖尿病心肌病大鼠心肌结构和心脏功能的损伤具有保护作用。