耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec基因分型与耐药性分析

目的 了解本地区MRSA菌株SCCmec基因型分布和各种基因型的耐药特征.方法 用PCR扩增SCCmec分型的特征性基因,对MRSA菌株分型;采用Vitek 32微生物分析仪检测MRSA对抗菌药物敏感性.结果 84株MRSA菌株中包括SCCmecⅡ型9株（10.7%）,SCCmecⅢ型70株（83.3%）,SCCmecⅣ型5株（6.0%）.所有菌株对利福平的耐药率均较低,对万古霉素和利奈唑烷完全敏感,各型别间无显著差异（P＞0.05）,对其他非β-内酰胺类抗菌药物的耐药率由高到低分别为SCCmecⅢ型、SCCmecⅡ型和SCCmecⅣ型,SCCmecⅡ型和Ⅲ型MRSA菌株表现为多重耐药,其耐药率显著高于SCCmecⅣ型（P＜0.05）.结论 SCCmecⅢ型菌株为本地区MRSA主要流行菌株,该型菌株对抗生素呈多重耐药.     

2356株革兰阳性球菌的分布与耐药性分析

目的了解医院近3年革兰阳性球菌分布和耐药性变迁,指导临床合理使用抗菌药物。方法 2007年1月-2009年12月从医院临床标本分离出革兰阳性球菌,对其进行细菌分布和耐药性回顾性分析。结果 3年共分离革兰阳性球菌2356株,凝固酶阴性葡萄球菌居首位,占34.0%;标本来源以痰、血、分泌物标本最多见;分离出472株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),MRSA中未发现耐利奈唑胺和万古霉素菌株,MRSA对氯霉素和喹奴普汀/达福普汀的耐药率较低,分别为12.1%和0.6%;对利福平的耐药率逐年增加,从11.5%增加至73.6%;粪肠球菌对青霉素G、氨苄西林的耐药率分别为17.7%和5.2%,显著低于屎肠球菌;未发现耐利奈唑胺肠球菌和耐万古霉素肠球菌(VRE)。结论革兰阳性球菌引起的耐药现象严重,加强耐药性监测,合理使用抗菌药物非常重要。     

Tumstatin-EGFP真核表达载体构建及稳定转染CHO细胞系的建立

目的 构建重组tumstatin-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的分泌型真核表达载体质粒,建立稳定转染的中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-K1).方法 利用重叠多聚酶链反应(PCR)技术从pGEM-T/STL质粒和pEGFP-C2质粒中扩增出STL-EGFP,用DNA重组技术将片段定向插入pIRESneo3质粒中,经酶切和序列验证正确后,用lipofectamine 2000转染CHO-K1细胞,通过G418筛选建立稳定转染的CHO细胞系,用逆转录-PCR、Western blot检测tumstatin-EGFP的表达,用倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达.结果 重组真核表达载体正确构建并在CHO细胞获得稳定表达,tumstatin-EGFP基因整合入细胞基因组DNA,培养液上清有融合蛋白tumstatin-EGFP的分泌,绿色荧光蛋白的表达高达95%以上.结论 成功构建了质粒PIRESneo3-STL-EGFP,获得稳定表达tumstatin-EGFP的细胞系.     

多形核粒细胞在金黄色葡萄球菌杀白细胞素相关肺炎性损伤中的作用

目的 探讨多形核粒细胞(PMN)在金黄色葡萄球菌Panton Valentine杀白细胞素(PVL)介导的肺炎性损伤中的作用.方法 取15只新西兰大白兔均分为3组,构建肺炎性损伤模型.对照组使用PBS灌肺,粒细胞正常兔直接用重组PVL灌肺(rPVL组),粒细胞减少症兔先用长春新碱(VCR)处理,再用rPVL灌肺(VCR+rPVL组).造模后9h,计数外周血和支气管肺泡灌洗液(BALF)中PMN,同时检测BALF上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量、肺通透指数(LPI),BALF中PMN凋亡率、坏死率、活性氧自由基(ROS)释放量.取肺组织检测肺湿干比,并进行病理学检查.组间比较采用t检验.结果 rPVL组外周血PMN为(2.69±0.34)×106/mL,显著低于对照组的(3.63±0.38)×106/mL(t=4.12,P＜0.05).对照组、rPVL组和VCR+rPVL组BALF中PMN分别为(0.57±0.01)×106/mL、(3.01±0.02)×106/mL和(0.10±0.02)×106/mL,rPVL组显著高于对照组(t=254.39,P＜0.05).rPVL组兔LDH、LPI和肺湿重/干重比均显著高于对照组,但后者与VCR+rPVL组比较,差异无统计学意义.rPVL组BALF中PMN晚期凋亡率和坏死率分别为( 18.98±1.04)％、(63.56±3.53)％,对照组分别为(1.03±0.17)％、(0.95± 0.33)％(t=38.24,39.48;均P＜0.05),VCR+rPVL组凋亡率和坏死率分别为(1.17=0.24)％、(1.1 3±0.17)％.rPVL组、对照组和VCR+rPVL组ROS分别为1.56±0.39、0.41±0.03和0.39±0.02,rPVL组明显升高(t=6.58,P＜0.05).rPVL组肺组织有弥漫性炎性细胞浸润、出血、水肿,VCR+rPVL组仅见支气管周围与肺泡间隔极少量炎性细胞浸润.结论 rPVL可引起粒细胞正常兔肺炎性损伤,但对粒细胞减少症兔肺损伤极小.PVL引起肺炎性损伤可能是依赖PMN的招募和聚集,继而坏死和(或)激活,释放细胞毒素颗粒内容物和(或)活性氧代谢产物等.     

新型甲型N1H1流感病毒分子生物学特征与防治

当前新型甲型H1N1流感病毒的暴发,引起全世界医学界和微生物学界的广泛关注。本文主要阐述新型甲型H1N1流感病毒分子生物学特征的改变,并介绍临床预防和治疗新型甲型H1N1流感病毒的策略。     

临床泌尿系统感染病原菌分布及耐药性分析

<正>泌尿系统感染是常见的感染性疾病,为了解本院泌尿系统感染病原菌的菌群分布及耐药情况,指导临床合理应用抗生素。现对428例病原菌进行回顾分析,报道如下。     

TNFα-Tumstatin45-132分子构建、生物学特征预测和活性验证

目的 构建人重组TNFα-Tumstatin45-132融合蛋白的表达载体，预测接头的合理性和可行性．并对融合蛋白活性进行验证。方法 采用基因融合序列重叠延伸（s0E）策略，构建新型TNFα-Tumstatin45-132表达载体；应用核酸和蛋白质序列软件Antheprot和PepTool对融合基因及接头部位翻译后在二级结构水平上的柔性、抗原性、亲水性等生物特性加以预测；用细胞毒试验和内皮细胞增殖试验测定表达的融合蛋白活性。结果 构建新型重组TNFα-Tumstatin45-132融合基因．经DNA测序证实与设计完全一致；TNFa-Tumstatinml32融合基因的氨基酸序列经软件分析，并与TNFα和Tumstatin45-132单独分析的结果比较，未出现新的抗原性，亲水性没有改变，接头部位具有很低的抗原性，接头部位呈中性；表达的融合蛋白经证实具有杀伤L929细胞和抑制ECV304细胞增殖的作用。结论 通过计算机软件对TNFα-Tumstatin45-132融合蛋白的预测，并与TNFα和Tumstatin45-132分别对比分析，有利于合理设计融合蛋白，最大程度地保留TNFα和Tumstatin45-132各自的生物活性和功能；生物活性分析证实设计具有一定的科学性和合理性。     

合肥地区耐多药结核分枝杆菌异烟肼、链霉素及 乙胺丁醇耐药相关基因位点表达研究

目的研究耐多药结核分枝杆菌异烟肼(INH)、链霉素(SM)及乙胺丁醇(EMB)耐药相关基因位点的表达情况。方法选取该院2013年1月至2017年12月临床分离的101株耐多药结核分枝杆菌,利用测序法和基因芯片法分别检测INH、SM和EMB耐药相关基因及突变位点。结果 101株耐多药结核分枝杆菌中对SM耐药率69.3%;对EMB耐药率51.4%;对SM和EMB二者均耐药的耐药率44.5%。基因芯片法检出95例INH耐药相关基因突变,其中katG基因315M位点突变率为77.8%;inhA基因-15M位点突变率为89.4%。检出64例rpsL SM耐药相关基因,其中43M位点突变率为89.0%;88M位点突变率为11.0%。检出47例embB EMB耐药相关基因,以306M2位点突变为主,突变率为68.0%。测序法检出98例INH耐药相关基因突变,katG基因突变以315位点为主突变率为73.4%;inhA基因突变以-15位点为主突变率为87.7%;oxyR-ahpC基因-12和-10位点突变率分别为10.2%和8.2%。检出68例SM耐药相关基因突变,rpsL基因以43位点为主突变率为86.8%;rrs基因512、513、516位点突变率分别为5.9%、8.8%、8.8%。检出50例EMB耐药相关基因embB以306位点为主突变率为88.0%。结论耐多药结核分枝杆菌INH、SM及EMB耐药基因位点表达可作为结核分枝杆菌临床检测耐药性的有效依据,为提高耐多药结核分枝杆菌耐药性检测的敏感度,应将INH耐药相关oxyR-ahpC基因和SM耐药相关rrs基因纳入我国快速分子诊断产品中。     

不同感染部位分离的金黄色葡萄球菌一般特征和耐药性分析

目的：了解不同感染部位分离的金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,SA）一般特征及耐药性,指导临床合理用药。方法：从不同感染部位的病原菌均采用Vitek-32微生物分析系统进行鉴定和药物敏感性检测。结果：分离出SA共116株,其中住院患者的年龄显著大于门诊患者（P〈0.05）;住院患者呼吸道感染分离的SA对14种抗菌药物的药敏结果显示,耐药率〉60%的抗菌药物分别为青霉素G、氨苄西林、红霉素、头孢唑啉、苯唑西林、左氧氟沙星、庆大霉素、四环素、复方磺胺甲口恶唑、氯洁霉素;住院患者呼吸道感染分离的SA对多种抗菌药物的耐药率、耐甲氧西林SA（MRSA）及多重耐药菌株的分离率均显著高于其它感染部位分离株（P〈0.05）;门诊患者皮肤软组织感染分离的SA对多种抗菌药物的耐药率、MRSA及多重耐药菌株的分离率均显著低于住院患者不同感染部位分离株（P〈0.05）。结论：门诊患者皮肤软组织感染和住院患者呼吸道感染分离的SA不同于住院患者其它感染部位分离株,临床用药应区别对待;住院患者呼吸道感染分离株对多种抗菌药物的耐药率、MRSA及多重耐药菌株的分离率较高,临床应加强耐药性监测,并防治多重耐药菌株的传播流行。