miR-146b在高糖环境下对肾小球系膜细胞的作用研究

目的探讨miR-146b在高糖环境下对肾小球系膜细胞的作用。方法构建高糖培养环境,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-146b在大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)、足细胞(podocyte)及肾小球系膜细胞(HBZY-1)中的表达水平;western blot分析过表达/敲减miR-146b前后,HBZY-1细胞中YAP及磷酸化YAP(p-YAP)蛋白的表达水平;细胞免疫荧光法检测YAP蛋白的表达情况。结果体外经高糖刺激后,HBZY-1细胞中miR-146b的表达水平(2.197±0.166)明显升高(t=7.215,P0.01)。western blot结果显示,高糖组YAP蛋白(0.753±0.008)的表达水平升高(t=32.17,P0.001),p-YAP蛋白(0.372±0.005)的表达水平降低(t=39.56,P0.001);免疫荧光结果显示,高糖组YAP蛋白荧光强度(53.620±4.229)明显升高(t=5.410,P0.01)。过表达miR-146b后,western blot结果显示,YAP蛋白(0.883±0.005)表达上调(t=10.71,P0.001),而p-YAP蛋白(0.606±0.006)表达下调(t=44.16,P0.001);免疫荧光结果显示,YAP荧光强度(25.70±1.589)增强(t=10.45,P0.001)。敲减miR-146b后,western blot结果显示,YAP蛋白(0.706±0.002)表达下调(t=22.15,P0.001),p-YAP蛋白(0.774±0.003)表达上调(t=25.61,P0.001);免疫荧光结果显示,YAP荧光强度(8.900±1.022)减弱(t=11.56,P0.001)。结论 miR-146b在高糖刺激的HBZY-1细胞中表达上调,可能通过调控YAP信号参与肾细胞损伤。     

胃癌患者血清外泌体中DANCR表达及其临床意义

目的检测胃癌患者血清外泌体(exosome)中抗分化非编码RNA(DANCR)的表达水平并分析其临床应用价值。方法采用实时荧光定量RT-PCR检测胃癌细胞培养上清和胃癌患者血清exosome中DANCR表达水平,分析其与临床病理资料的相关性,绘制ROC曲线评价其诊断效能。结果 DANCR在人胃癌细胞系HGC-27中表达水平(4.43±0.37)明显高于胃黏膜上皮细胞(1.01±0.01),差异有统计学意义(P0.05)。HGC-27细胞培养上清exosome中DANCR表达水平(3.06±0.14)明显高于GES-1细胞(1.01±0.20),差异有统计学意义(P0.05)。DANCR在胃癌患者血清exosome中的平均含量[5.060(1.380,22.785)]较胃良性疾病患者[0.535(0.340,1.380)]和体检健康者[1.200(0.605,1.655)]明显升高(Z分别为-3.409,-4.229,P均0.01),且与肿瘤大小、TNM分期以及淋巴结转移相关。胃良性疾病患者与体检健康者相比,血清exosome中DANCR含量差异无统计学意义(Z=-1.308,P0.05)。胃癌患者血清exosome中DANCR的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.777,95%可信区间(CI)为0.678~0.876,cut-off值2.50,敏感性为68.6%,特异性为84.4%。结论胃癌患者血清exosome中DANCR表达水平升高,有望成为胃癌诊断的新指标。     

SALL4在肿瘤中的作用及临床应用价值

婆罗双树样基因-4(sal-like 4,SALL4)是维持胚胎干细胞自我更新和多能性的重要转录因子。近年来,研究发现SALL4在肿瘤发生、发展中发挥重要作用。SALL4通过调控下游基因表达和信号通路转导,参与肿瘤生长、转移、耐药和复发。SALL4在多种肿瘤组织中存在过表达,且其表达水平与肿瘤进展和患者预后相关。靶向抑制SALL4的表达及其生物学功能具有明显抗肿瘤效果。本文就SALL4在肿瘤中的作用机制及其临床应用价值作一综述。     

间质干细胞培养上清对日本血吸虫SEA诱导活化的巨噬细胞株RAW264.7的抑制作用

目的观察大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)培养上清对日本血吸虫可溶性虫卵抗原(soluble egg antigen,SEA)诱导活化的巨噬细胞的抑制作用。方法用5、10、20和40μg/ml SEA分别诱导巨噬细胞株RAW264.7 12 h,或用20μg/ml SEA分别诱导小鼠巨噬细胞株(RAW264.7)4、8、12和24 h后,用实时荧光定量PCR检测α肿瘤坏死因子(TNF-α)的mRNA水平,选择SEA的最佳作用浓度和作用时间。将巨噬细胞分成5组,分别为阴性对照组、SEA组、SEA+MSC上清组(MSC组)、SEA+大鼠肾小管上皮细胞株(NRK-52E)上清组(NRK-52E组)和SEA+DMEM细胞培养基组(DMEM组)。除阴性对照组外,其他各组给予20μg/ml SEA诱导巨噬细胞活化12 h后,MSC组、NRK-52E组和DMEM组换液撤SEA,分别给予MSC培养上清、NRK-52E细胞培养上清和DMEM培养液,继续培养。显微镜观察细胞上清培养12 h后各组细胞形态。实时荧光定量PCR检测细胞上清培养12 h和24 h后TNF-αmRNA水平。蛋白质印迹...     

胃癌组织来源MSC以旁分泌方式促进胃癌细胞系HGC-27增殖、迁移及上皮-间质转化

目的研究胃癌组织来源的间充质干细胞(GC-MSC)培养上清液对胃癌细胞系HGC-27的作用。方法以GC-MSC培养的上清液和HGC-27常规培养基等体积混合配制后培养的HGC-27作为处理组;GC-MSC培养基与高糖DMEM培养基等体积混合配制后培养的HGC-27作为对照组。收集处理组与对照组中HGC-27细胞,用平板克隆形成和MTT增殖试验检测细胞增殖能力;Transwell法检测细胞迁移能力;western blot检测细胞中上皮-间质转化(EMT)相关蛋白质的表达。结果处理组HGC-27细胞的克隆形成能力、细胞增殖活力和迁移能力均明显强于对照组(P均0.01)。EMT相关蛋白检测分析显示,处理组HGC-27细胞中vimentin、N-cadherin和α-SMA蛋白表达水平显著增高,E-cadherin蛋白表达显著降低(P均0.01)。结论GC-MSC可通过旁分泌的作用方式促进胃癌细胞的增殖、迁移及EMT。     

流式细胞仪分选侧群细胞条件的探索与优化

目的探讨不同浓度的荧光染料(Hoechst 33342)和抑制剂维拉帕米(verapamil)对流式细胞仪分选侧群(SP)细胞的影响。方法实验分为Hoechst 33342组(Hoechst 33342浓度分别为2.5、5.0和7.5μg/mL)和抑制组(Hoechst 33342+verapamil,verapamil浓度分别为50、100和150μmol/L),用流式细胞仪分选人肺腺癌细胞系A549中SP细胞,摸索Hoechst 33342和verapamil的最佳浓度,并用本实验室构建的一株肿瘤细胞系K1进行验证。结果在verapamil和Hoechst 33342浓度分别为150μmol/L和7.5μg/mL时,A549细胞染色充分,SP细胞亚群与非SP(non-SP)细胞亚群分群明显,SP细胞约为2.2%。K1细胞在verapamil为50μmol/L和Hoechst 33342为5μg/mL时,SP细胞亚群与non-SP细胞亚群分群明显,SP细胞亚群可被verapamil抑制,其比例约为1.3%。分选后的SP细胞和non-SP细胞可进一步扩增培养。结论 Hoechst 33342和verapamil可影响肿瘤细胞中SP细胞分选效率。     

分子诊断学课程实践教育创新模式的探讨

分子诊断学课程是一门在医学分子生物学基础上发展起来的新课程，是医学院校对医学检验本科专业开设的主干课程。分子诊断技术基于他的前瞻性、高特异性、高灵敏度，在临床上广泛应用于遗传性疾病、传染性疾病、肿瘤、法医学等领域，其临床意义在于不仅能够对疾病作出早期诊断、确切诊断，而且还能确定个体归于疾病的易感性以及疾病的分期分型、疗效监测、预后判断等，因此分子诊断学基本技术与技能的训练直接决定培养医学检验学生能否胜任未来的工作，并能创新应用。为顺应时代潮流，分子诊断学课程实践环节也逐步从理论课中游离出来，成为一门独立的课程。课程的性质和当前的发展趋势决定了教育工作者进行课程体系的调整与改革，尤其是实践环节改革的必要性。     

角膜异物686例临床分析

角膜异物在农村发病率较高，我院于1991年5月至1997年10月共收治686例，现分析如下：临床资料：本组角膜异物686例，男382例，女304例。右眼419例，左眼280例，双眼13例，余为单眼。职业：农民424例，工人（包括农民工）198例，干部职112例，学生38例，学龄前儿童、幼儿14例。异物种类：谷粒及其亮芒刺、铁屑、玻璃、砂、石子、各种叶子、小虫、石灰、灰尘。异物数量：1个561例，2－5个71例，6－10个36例，11个以上18例，最多1例双眼角膜上及结膜囊内均是砂子。年龄：最小1岁，最大75岁，大多在20－50岁之间。就诊时间：伤后1天内560例，2－…     

电针对大白鼠脊神经节组织中乙酰胆硷含量和乙酰胆硷酯酶活性的影响

本将以生他的方珐研究电针和切断后根后脊神经节和脊髓后角内AChE活性的变化，旨在探讨外周乙酰胆碱(ACh)与针感一级传入的关系；结果表明：