6-巯基嘌呤减量治疗3例急性白血病患儿基因突变分析及临床表现

目的：分析6-巯基嘌呤（6-MP）减量化疗的急性白血病（AL）患儿维持治疗阶段临床资料及其巯嘌呤甲基转移酶（TPMT）、次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）基因突变情况,探讨其基因型和临床表型的相关性。方法分别提取3例AL患儿骨髓液及77例对照组儿童外周血总RNA并逆转录成cDNA,PCR特异性扩增TPMT和HGPRT基因蛋白质编码区序列并测序。采用美国国立癌症研究所第3版常规毒性判定标准（NCI CTC 3．0）对维持治疗阶段药物不良反应进行评价和分级,应用国家食品药品监督管理局（SFDA）推荐的药物不良反应关联性评价标准评价6-MP与不良反应发生的相关性。结果1例AL患儿为TPMT＊3C（Try240Cys）纯合突变基因型,减少6-MP剂量至常规剂量1/3～2/3可使骨髓抑制及肝脏毒性等重度不良反应转为轻度。对照组发现2例TPMT＊3 C杂合突变,该位点在人群中的等位基因频率为1.3％。以上两组均未发现HGPRT基因突变。结论 TPMT＊3 C纯合突变患儿可出现与6-MP剂量相关的不耐受现象,中断或减量治疗能够减少维持期间严重药物不良反应的发生。提示TPMT＊3 C基因型的检出可能有利于提高6-MP用药的安全性。     

深圳地区汉族急性白血病儿童GSTP1全编码区基因多态性分析

目的研究深圳地区汉族急性白血病(AL)患儿谷胱甘肽转移酶P1(GSTP1)基因全编码区内的单核苷酸多态性(SNPs)基因型和等位基因频率分布特征。方法用RT-PCR和变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术对108例AL患儿和121例对照儿童的GSTP1全编码区内的SNPs进行筛查分析。结果在GSTP1全编码区内共筛查到3个SNPs位点,包括1个热点突变位点A313G(Ile105Val,rs1695)、1个错义突变位点G439T(Asp147Tyr,rs4986949)和1个同义突变位点T555C(Ser185Ser,rs4891),其在汉族儿童分布等位基因总频率分别为16.4%、1.3%和16.4%,且具有明显的种族差异性。GSTP1 A313G、G439T和T555C多态性各基因型和等位基因频率分布在AL患儿和对照组儿童中差异均无统计学意义(P分别为0.691和0.359;0.898和0.581、0.691和0.359)。结论对深圳地区汉族儿童GSTP1基因全编码区多态性进行筛查分析,确定了GSTP1 A313G,G439T和T555C 3个SNPs位点,其具有种族差异性且与儿童AL发病风险均无关。     

6-巯基嘌呤致急性淋巴细胞白血病患儿不良反应及其与TPMT基因多态性的关系

目的 分析6-巯基嘌呤（6-MP）维持治疗急性淋巴细胞白血病（ALL）患儿不良反应的发生情况,探讨巯嘌呤甲基转移酶（TPMT）基因多态性与6-MP毒副作用的关系。方法 提取46例ALL患儿骨髓细胞总RNA并逆转录成cDNA。应用变性梯度凝胶电泳（DGGE）结合DNA测序,对ALL患儿TPMT*S和*3C基因型进行检测。采用美国国立癌症研究所第3版常规毒性判定标准（NCI CTC 3.0）行药物毒性分级,分析TPMT基因多态性与6-MP不良反应发生的关系。结果 在维持治疗阶段,22%（10/46）患儿因6-MP所致严重不良反应停药,不良反应主要表现为骨髓抑制、肝脏毒性和胃肠道反应。2例TPMT*3C突变基因型（AG+GG）患儿均出现重度不良反应,其中1例纯和突变患儿出现与6-MP剂量相关的骨髓抑制和肝脏毒性。TPMT*1S各基因型与6-MP所致的重度骨髓抑制及肝脏毒性无明显相关性（P>0.05）。结论 TPMT*3C多态性可能与6-MP所致严重不良反应发生有关。     

急性淋巴细胞白血病患儿MTHFR基因多态性与大剂量甲氨蝶呤毒副反应的关系

目的：探讨亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因单核苷酸多态性对急性淋巴细胞白血病（ALL）患儿使用大剂量甲氨蝶呤（HD-MTX）化疗后毒副反应的影响。方法：应用RT-PCR-变性梯度凝胶电泳结合DNA测序技术,对52例ALL患儿MTHFR C677T、A1298C和G1793A基因型进行检测。按照国立癌症研究所常规毒性判定标准（NCI-CTC）对患儿HD-MTX化疗后的不良反应统一评价。结果：MTHFR 1298AC基因型患儿发生血小板减少的风险较AA型提高了13.7倍（OR=13.7,95%CI=1.18～159.36,P=0.036）。MTHFR C677T和G1793A各基因型发生各类HD-MTX化疗不良反应的差异无统计学意义（P>0.05）。结论：MTHFR A1298C多态性可能与ALL患儿HD-MTX化疗后的毒副反应相关。     

MTHFR基因多态性与急性白血病易感性的研究

目的 研究汉族儿童亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)基因多态性与急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)以及急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)发病风险的相关性.方法 对87例ALL患儿、22例AML患儿和120名对照儿童用逆转录-聚合酶链反应-变性梯度凝胶电泳结合DNA测序技术进行MTHFR 677C/T和1298A/C基因的多态性筛查.结果 MTHFR 677CT基因型的个体AML易感性降低(OR=0.23,95％CI:0.07～0.79).未发现MTHFR 1298A/C各基因型与ALL和AML发病风险间存在显著关联.MTHFR 677TT/1298AA和677CC/1298AC基因型ALL发病风险增高(OR=3.78,95％ CI:1.38～10.40;OR=3.17,95％CI:1.18～8.53),677CT/1298AA基因型者AML风险降低(OR=0.23,95％ CI∶0.06～0.97).结论 MTHFR基因677位碱基变异可能是儿童AML遗传易感因素.     

SHMT1多态性与ALL儿童HD-MTX不良反应的关系

  目的  研究丝氨酸羟甲基转移酶1(serine hydroxymethyltransferase 1, SHMT1)基因多态性与急性淋巴细胞白血病(acute lymphocytic leukemia, ALL)儿童大剂量甲氨蝶呤(high-dose methotrexate, HD-MTX)不良反应的相关性。  方法  本研究以51例接受HD-MTX化疗的ALL患儿为研究对象, 统计分析其应用HD-MTX后产生的临床表现; 提取mRNA后逆转录为cDNA, 利用变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE)结合DNA测序检测SHMT1多态性(rs1979277、rs3783、rs1979276、rs12952556), 并分析其与HD-MTX不良反应的关系。  结果  接受HD-MTX化疗的ALL患儿产生的严重不良反应主要表现为中性粒细胞减少和肝功能损害。rs3783(C>G)、rs1979276(C>T)、rs12952556(A>G)及rs1979277(C>T)的基因型分布情况相同, rs1979277多态性与中性粒细胞减少的发生风险无关(P>0.05), 但其CT及TT基因型可以降低肝功能损害的发生风险(CT: OR=0.129, 95% CI:0.020~0.817, P=0.03;TT:OR=0.103, 95% CI:0.017~0.620, P=0.013)。  结论  rs1979277、rs3783、rs1979276及rs12952556的联合作用与中性粒细胞减少的发生无关, 但它们之中一个或多个位点可能降低肝功能损害的发生。      

汉族儿童TPMT基因全蛋白编码区SNP检测与分析

摘要：目的：分析汉族儿童巯嘌呤甲基转移酶（TPMT）基因的蛋白质编码区（CDS）突变,探讨其在急性白血病（AL）患儿中的单核苷酸多态性（SNP）。 方法：变性梯度凝胶电泳结合DNA测序检测103例AL患儿及111例对照组儿童的TPMT基因CDS碱基位点突变情况。 结果：汉族儿童TPMT基因筛查出2个蛋白编码区单核苷酸多态性（cSNPs）,分别为TPMT*3C（A719G）和*1S（C474T）。TPMT*3C AA、AG、GG基因型频率在AL患儿组中分别为95.1%、3.9%和1.0%,在对照组中分别为97.3%、2.7%和0,其G等位基因频率分别为2.9%和1.4%;TPMT*1S CC、CT、TT基因型频率在AL患儿组分别为5.8%、24.3%和69.9%,在对照组中分别为8.1%、28.8%和63.1%,其C等位基因频率分别为18.0%和22.5%。2个cSNPs基因型及等位基因频率在两组中分布差异无统计学意义（P＞0.05）。对照组筛查出C210T和TPMT*26（T622C）基因突变。 结论：汉族儿童存在TPMT*26突变基因型,且TPMT*3C、TPMT*1S可能均与儿童AL易感性无关。     

急性白血病儿童γ-谷氨酰水解酶基因452C/T单核苷酸多态性研究

目的 研究γ-谷氨酰水解酶( γ-glutamyl hydrolase,GGH)基因452C/T单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)在急性白血病(acute leukemia,AL)患儿和正常儿童中的频率及分布特征.方法 应用逆转录-PCR-变性梯度凝胶电泳结合DNA直接测序技术,对92例AL患儿和124名正常儿童的cDNAs进行GGH基因第452位点SNP筛查.结果 AL组中GGH 452 TT、CT及CC基因型频率分别为2.2％、13.0％和84.8％;对照组中相应3种基因型频率分别为1.6％、l6.9％和81.5％;两组T等位基因频率分别为8.7％和10.1％;两组间的基因型频率及等位基因频率差异无统计学意义(P＞0.05),但中国儿童与日本、非裔-美洲及墨西哥人群的T等位基因频率差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 确定了中国汉族儿童GGH 452C/T的等位基因频率,并初步确认GGH 452C/T基因多态性存在种、族差异.     

急性白血病患儿MTHFR基因G1793A多态性的相关研究

目的 研究亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因G1793A多态性在AL患儿中的等位基因频率和基因型分布特征,及其与儿童AL发病风险的相关性.方法 应用反转录-PCR-变性梯度凝胶电泳结合DNA测序技术,对109例AL患儿和120例对照儿童的cDNA MTHFR G1793A基因型进行检测.结果 在AL组、ALL组、急性髓细胞白血病(AML)组和对照组中MTHFR 1793 GG、GA、AA基因型频率分别为83.5％、15.6％、0.9％;82.8％、16.1％、1.1％;86.4％、13.6％、0和89.2％、7.5％、3.3％;而MTHFR 1793A等位基因频率分别为8.7％、9.2％、6.8％和7.1％;分别将各病例组人群A等位基因频率及基因型分布与对照组进行比较,发现差异均无统计学意义(P均＞0.05);MTHFR 1793 GA+ AA增加了AL、ALL和AML发病风险(AL:OR=1.71,95％ CI:0.77～3.80,P=0.19;ALL:OR =2.00,95％ CI:0.85 ～4.49,P=0.12;AML:OR=1.36,95％ CI:0.33～5.62,P=0.67),但差异均无统计学意义(P均＞0.05);全部标本中A等位基因总频率为7.9％,与德国犹太人、巴西人、奥地利人、伊朗人及中国哈尔滨人群的差异均具有统计学意义(P均＜0.05).结论 MTHFRG1793A基因多态性与汉族儿童AL的发病无相关性,但该位点多态性分布具有种族差异性.     

儿童急性白血病易感性与GS TPi基因多态性关系的研究

目的探讨谷胱甘肽硫转移酶Pi（GSTPi）基因A313G、C341 T多态性在深圳地区汉族健康儿童和急性白血病（AL）儿童中的突变情况,并分析GSTPi基因多态性与儿童AL易感性的关系。方法采用逆转录聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳（RT-PCR-DGGE ）结合DNA测序技术,对108例AL患儿和121名正常对照儿童进行基因多态性筛查。结果 GSTPi313G等位基因总样本频率为16.4％;未检测到GSTPi C341 T位点突变。GSTPi 313 G等位基因在AL组、急性淋巴细胞白血病（ALL）组、急性髓细胞白血病（AML）组和急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）组中分布频率分别为18.1％、17.9％、20.0％和19.9％,均高于对照组的14.9％（P ＞0.05）。男性患儿 GSTPi 313AG基因型及AG＋GG显性模型可显著增加B-ALL发病风险（OR＝2.26,95％CI：1.07～6.42, P＝0.04;OR＝2.49,95％CI：1.07～5.81,P＝0.04）;女性患儿GSTPi 313GG基因型似可增加AML发病风险（OR＝2.33,95％CI：0.18～30.10）,但差异无显著性（P＞0.05）。结论男性患儿GSTPi 313 AG基因型和AG＋GG显性模型可增加B-ALL发病风险。另外,GSTPi 多态性在降低女性AL患儿发病风险中的作用仍需做进一步探讨。