Amp C酶检测方法的探讨

目的 建立简便检测肠杆菌科细菌中Amp C酶的方法。方法 分别采用双纸片确证法和多剂量协同法检测35株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,并用三维试验和Amp C酶酶量直接测定法进行对比,同时检测这些菌产ESBL的情况。结果 双纸片确证法检测出12株Amp C酶,不受ESBL的干扰,与直接酶量检测法完全一致,敏感性高于三维试验,多刑量协同法敏感性较差。结论 双纸片确证法可作为临床检测Amp C酶的方法。     

实时荧光定量PCR检测人类EZH2基因方法的建立

目的:建立SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR定量检测人类EZH2基因的方法.方法:将EZH2 RT-PCR扩增片段克隆入载体pGEM-T后,经测序鉴定正确后,进行纯化和定量及系列稀释,应用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测EZH2,建立标准曲线,熔解曲线分析产物的特异性.结果:该法检测的最低拷贝数为10,线性范围为101～108拷贝,相关系数r为-1.00,104copies/μl标本的批内变异系数(CV)和日间CV分别为1.0%和2.7%.熔解曲线分析显示单一的峰,熔解温度(Tm)为(83.42±0.13)℃.结论:实时荧光定量PCR方法检测EZH2基因,具有高敏感性、高特异性和高精确性等优点,可作为进一步研究EZH2的方法.     

碳青霉烯酶3种检测方法间的比较

目的:探讨3种碳青霉烯酶检测方法——改良hodge试验、Carba NP试验、碳青霉烯类失活法(mCIM)筛选碳青霉烯类抗生素耐药肠杆菌科细菌的差异。方法:对23例待测菌株分别用3种方法进行检测并记录,然后进行比较分析。结果:改良hodge试验17株阳性,阳性率为73.9%;Carba NP试验19株阳性,阳性率为82.7%;mCIM试验20株阳性,阳性率为87.0%。结论:改良hodge试验步骤简单易行,结果稳定,阳性率高,但用时较长,可用于试验结果的再次验证,也可用于大量临床住院标本。Carba NP试验前期准备及步骤复杂,对操作者技术要求高,但它最短30min内出现结果,颜色对比显著,可用于实验初期的快速检验。mCIM试验操作简单,符合率和特异性高,结果易于观察,可用于常规实验室碳青霉烯类的检测。     

男性系统性红斑狼疮患者性激素变化的分析研究

目的:探讨男性系统性红斑狼疮(SLE)患者性激素指标睾酮(T)、泌乳素(PRL)、雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、孕酮(Pro)及其相关比值与病情的关系。方法:采用美国ARCHITECT i2000SR化学发光分析仪测定69例男性SLE患者(检测组)和41例健康者(对照组)的性激素6项指标。结果:与对照组比较,SLE组T水平显著降低(P0.05),PRL、E2、LH水平显著升高(P0.05),FSH、Pro差异无统计学意义(P0.05);T正常、PRL、E2、LH升高及PRL、E2、LH正常、T降低2组结果相关比值T/PRL、T/E2、T/LH均显著降低(P0.05)。SLE活动期PRL水平明显高于稳定期,差异有统计学意义(P0.05);活动期T、E2、LH、FSH、Pro水平与稳定期差异无统计学意义(P0.05)。结论:T、PRL、E2、LH水平及其相关比值与男性SLE病情密切相关,对评估SLE活动性评价有一定意义。     

A抗原表位模拟多肽融合表达载体的构建及鉴定

目的:构建血型A抗原模拟多肽融合表达载体,初步鉴定融合表达蛋白结合抗A抗体的能力.方法:PCR扩增血型A抗原模拟多肽(P17)和谷胱苷肽S-转移酶(GST)编码基因,并连接成P17-GST.双酶切后克隆入原核表达质粒pET 28 b,酶切、测序鉴定.以BL21(DE3)为表达菌,在IPTG诱导下表达P17-GST融合蛋白,Ni-NTA柱纯化蛋白.红细胞凝集抑制实验分析融合蛋白模拟血型A抗原的能力.结果:成功构建P17基因和GST基因融合的原核表达质粒pET28b-P17-GST,目的基因可以高效表达,纯化的融合蛋白以浓度依赖的方式抑制A型红细胞的凝集作用.结论:血型A抗原的模拟多肽序列与GST的融合表达蛋白可特异性结合抗A抗体,具有替代血型A多糖抗原潜能,为发展新型的抗A抗体滤除材料提供了依据.     

TIM-1外显子4基因多态性与类风湿关节炎关系的研究

目的探讨湖北地区汉族人群T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白-1(TIM-1)外显子4基因多态性与类风湿关节炎(RA)之间的关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)法检测86例RA患者和1130名正常对照的TIM-1外显子4插入,缺失多态性,同时检测类风湿因子(RF)、抗CCP抗体和抗角蛋白抗体(AKA)三种自身抗体。结果正常对照组TIM-1外显子4 del/del、ins/del和ins/ins基因型频率分别为0．650、0．280、0．070；RA组TIM-1外显子4 del/del、ins/del和ins/ins基因型频率分别为0．616、0．302、0．082,与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0．05)。RA组RF、抗CCP抗体和AKA检测阳性率分别为79．08%、73．26%和53．49%,与对照组比较均有统计学意义(P＜0．01)。通过统计分析发现RA组中RF、抗CCP抗体检测阳性率与TIM-1外显子4基因分型均无相关性(P＞0．05)；AKA检测阳性率与TIM-1外显子4基因分型显著相关(P＜0．01)。结论湖北地区汉族人群TIM-1外显子4插入/缺失多态性与RA无相关性,TIM-1外显子4基因分型可能影响RA患者抗角蛋白抗体的表达。     

三种自身抗体联合检测在老年起病类风湿关节炎诊断中的作用

目的 研究抗环瓜氨酸肽(cyclic citrulinated peptid,CCP)抗体、抗角蛋白抗体(anti-keratin antibody,AKA)和抗RA33抗体在老年起病的类风湿关节炎(EORA)中的临床意义,探讨3种自身抗体联合检测在EORA诊断中的作用. 方法 检测69例EORA、73例风湿性多肌痛(PMR)和65例老年骨关节炎(0A)患者体内3种抗体水平,抗CCP抗体和抗RA33抗体采用酶联免疫吸附试验法(ELISA),AKA采用间接免疫荧光法(IIF)检测. 结果 EORA患者3种抗体的敏感性和特异性分别为55.1%和94.3 0A、31.3%和91.5%、36.2%和95.4%,显著高于其他两组(P<0.05).3种抗体串联检测,EORA组的阳性率显著高于PMR组和OA组(均为P<0.05),3种抗体串联检测敏感性降低,但其特异性提高至100.0%,且有更高的阳性预测值. 结论 抗CCP抗体、AKA和抗RA33抗体在EORA患者中均可检出,抗CCP抗体有较高的敏感性和特异性,3种抗体联合检测有更高的特异性和阳性预测值;结合临床症状、影像学改变,3种抗体联合检测对EORA的诊断具有较高的临床应用价值.     

抗-Ce致新生儿溶血病1例

孕妇，28岁，孕3产1，无输血史。曾行人工流产术二胎，此为第三胎，患儿产后24h出现黄疸，全身黄染呈进行性加重。经血清学检测证实，患儿系属抗-Ce引起的Rh-新生儿溶血病。     

湖北汉族人群T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白-3基因单体型与变应性支气管哮喘的相关性

目的 分析湖北汉族人群T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(TIM-3)启动子区-1516G/T和外显子3区4259G/T单核苷酸多态性及其连锁不平衡关系,探讨其构成的单体型与支气管哮喘(简称哮喘)易感性之间的关系.方法 2004年6月至2007年10月采用等位基因特异性聚合酶链反应检测湖北汉族175例哮喘患者(哮喘组)和202名健康者(健康对照组)TIM-3-1516G/T和4259G/T的单核苷酸多态性,计算基因型和等位基因频率、两位点间的连锁不平衡系数(D')值及单体型频率.结果 TIM-3基因-1516G/T基因型GG、GT和TT在健康对照组中分布频率分别为82.7%(167/202)、17.3%(35/202)、0(0/202),哮喘组分布频率分别为82.9%(145/175)、17.1%(30/175)、0(0/175);TIM-3基因4259G/T基因型GG、GT和,TT在健康对照组中分布频率分别为0.5%(1/202)、2.5%(5/202)、97.0%(196/202),哮喘组分布频率分别为0.6%(1/175)、5.7%(10/175)、93.7%(164/175).对照组D'值为1.0,哮喘组D'值为0.9.湖北汉族人群中存在3种单体型(G-G、G-T、T-T),这3种单体型频率在健康对照组分别为1.7%(7/404)、89.6%(362/404)、8.7%(35/404),哮喘组分别为3.4%(12/350)、88.0%(308/350)、8.6%(30/350);3种单体型(G-G、G-T、T-T)与哮喘易感性无相关性(x2值分别为2.15、0.47、0.003,P均＞0.05).结论 TIM-3基因-1516G/T与4259G/T之间存在紧密连锁不平衡关系,G-G、G-T、T-T与哮喘易感性无相关性.但不排除是否与其他种族人群中哮喘易感性相关或与其他过敏性疾病和自身免疫性疾病的易感性相关.