何为血细胞分析的参考方法?

红细胞／白细胞计数的参考方法采用电阻抗原理的半自动血细胞计数仪进行检测，标本的稀释过程使用精密吸管进行手工操作；血红蛋白测定的参考方法使用分光光度计，用氰化高铁血红蛋白法进行检测；红细胞压积的参考方法为微量离心方法；血小板的参考方法用CD41和CD61通过流式细胞法检测血小板和红细胞的比率。     

临床实验室淋巴细胞亚群检测现状的调查与分析

目的 调查临床实验室淋巴细胞亚群的检测现状,结合全国室间质量评价数据进行分析,为质量改进提供依据.方法 以参加全国淋巴细胞亚群检测室间质量评价的200家为调查对象,通过问卷调查,收集相关检测信息,并将2011～2013年的全国室间质评数据与同期美国Wadsworth Center质评数据进行比较,分析检测现状.结果 调查问卷回报率为87.5％;三级医院的实验室占88.6％;使用光路流路校准品、PMT电压校准品和荧光补偿样品的实验室各占97.7％、88.6％和88.6％;实验室均采用包括CD3抗体在内的至少2种抗体进行T细胞亚群和NK细胞检测;26.3％的实验室曾使用全血质控物开展室内质控;38.5％的实验室使用CD45/SSC设门;30.3％的实验室报告绝对计数值,其中采用单平台方法的占62.3％.2011～2013年全国淋巴细胞亚群检测质评CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-(CD16+56)+和CD3-CD19+五类细胞的相对计数的变异系数分布范围为(3.0～9.8)％,绝对计数的变异系数分布范围为(15.8～30.4)％,而美国质评相对计数和绝对计数的变异系数分布范围分别为(2.0～10.0)％和(7.0～13.0)％.结论 参加淋巴细胞亚群检测质评的实验室主要来自各地的三级医院,其检测能力代表了我国淋巴细胞亚群检测的较高水平;流式细胞仪检测状态的质量监控已在开展,但样本检测过程的质量控制(如全血质控品应用、设门方案等)未有效开展;我国质评计划结果中相对计数的变异系数略高于美国,而绝对计数的变异系数差距更明显.应进一步制订相关标准并实施标准化.     

造血干细胞计数全血质控物的研制与评价

目的评价自制造血干细胞计数全血质控物的均匀性及稳定性。方法依据CNAS-GL03及ISO Guide 35的要求,对两个批号自制质控物的均匀性、稳定性进行评价,同时检测进口质控物作为对照。结果均匀性评价结果显示两批号自制质控物样品间差异均无统计学意义（P〉0.05）;稳定性评价结果显示20111101、2011111批号自制质控物随保存时间的延长均无线性趋势变化（P〉0.05）;各批号自制质控物及进口质控物长期稳定性的不确定度分别为0.023%、0.015%和0.012%。结论自制造血干细胞计数质控物的均匀性及稳定性良好。     

高雪病伴尼曼-匹克细胞增多一例

高雪病患者通常仅表现为骨髓中发现一种细胞胞浆呈"皱纹纸"样改变的高雪细胞增多[1],合并尼曼-匹克细胞增多的病例较为少见.我院收治1例高雪病伴尼曼-匹克细胞增多的病例,现报告如下. 患者女,32岁,山东人.2个月前,患者无诱因出现双下肢散在小出血点,在当地医院查血常规:PLT(50～70)×109/L,偏低;Hb 87～93g/L,WBC(3.3～6.8)×109/L.腹部B超示脾大.骨髓穿刺:骨髓增生活跃,粒、红两系正常,淋巴细胞占0.07,巨核细胞全片可见416个,PLT散在,较少见,类似尼曼-匹克细胞占0.06;考虑类脂质沉积病(尼曼-匹克病).患者于2008年12月来北京医院门诊就诊.     

血细胞分析参考区间的合理应用

正血细胞分析是临床最常用、实验室检测标本量最多的检验项目之一。血细胞分析结果的解释离不开参考区间。长期以来,我国缺乏基于多中心、大样本研究数据建立的参考区间。2012年,在"中国人群重要常规临床检验项目参考区间的建立"基础上,发布了行业标准《血细胞分析参考区间》(WS/T 405-2012)[1]。本文就建立血细胞分析参考区间项目研究的特点和参考区间应用的注意事项等内容进行探讨。1 WS/T 405-2012行业标准发布前血细胞分析参     

2004～2006年全国凝血试验室间质量评价数据分析

目的 分析全国凝血试验室间质量评价的结果，了解凝血试验室间质评的状况，提出改进措施。方法 定期向参加凝血试验室间质评的实验室发放质评物，参评实验室对质评物进行检测，并回报结果，按照不同检测水平和仪器试剂分组后，计算加权均值、变异系数和及格率，并对及格率进行统计分析。结果 2004～2006年各项目（包括PT、INR、APTT和Fbg）在正常水平内的及格率较高（89．O％～99．oN），在高度异常水平（除Fbg外）及格率较低（74．3％～84．0％）。各水平组不同年度间及格率经x^2检验差异均无显著性（P〉0.05）；每年每个项目3种水平（除Fbg外）的及格率经x^2检验，差异有显著性；仪器试剂分组后，各项目变异系数较大组的及格率较低。结论 异常水平样本的PT和APTT质评结果变异较大，非配套系统的PT、INR、APTT和Fbg的质评结果变异较大，建议选择配套系统，定期校准仪器，并开展异常水平的室内质控，使用非配套系统的实验室应与配套系统进行结果比对。     

凝血活酶参考制品的标定与推广应用

近年来，随着抗凝治疗的广泛应用及抗凝治疗监测的广泛开展，对凝血酶原时间（ＰＴ）测定及其试剂———凝血活酶的标准化提出了很高的要求。我国虽有一些生产凝血活酶的厂家，但均未标明国际敏感度指数（ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＳｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙＩｎｄｅｘ，简...     

靶基因调控的脐血干/祖细胞体外长期扩增与调控

背景:脐血干细胞是基因治疗最理想的靶细胞之一,但基因转移率低下是目前面临的主要障碍.酪氨酸激酶JAK2在造血干/祖细胞自我更新中扮演着重要的作用,为了克服脐血基因转移率低下的障碍,根据基因调控表达技术原理,是否可开发一个可以靶向扩增JAK2基因修饰的脐血CD34 细胞体系.目的:探讨转基因JAK2介导的脐血干祖细胞长期扩增调控的可行性和安全性. 单位:卫生部北京医院血液科.材料:实验于2003-06/2006-04在卫生部北京医院血液科实验室完成.脐血取自健康、足月、自然分娩后立即断脐的脐血.脐血由北京医院妇产科提供,产妇及家属均知情同意,实验经医学伦理委员会批准.MiniMACS磁性分离仪、免疫磁珠吸附CD34单抗购自德国Miltenyi Biotec公司, 流式细胞仪购自美国FACScalibur,人重组干细胞因子、Flt3配体、人白介素-6、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、粒细胞集落刺激因子、血小板生成素为PeproTec产品,SPF级裸鼠购自北京医科大学动物中心.方法:构建逆转录病毒载体MGI-F2JAK2,内含有JAK2基因的功能催化区和两个与小分子靶向基因合成药物(AP20187)结合的位点蛋白(2xF36v,F2)组成.AP20187可与F36v特异结合引起JAK2二聚化而激活细胞内信号传导.该载体同时含有绿色荧光蛋白报告基因,用作检测细胞增殖的标记.应用MiniMACS免疫磁珠分选系统纯化分离脐血CD34 细胞,用含JAK2的逆转录病毒上清转染脐血CD34 细胞.转导后的CD34 细胞在集落刺激因子、Flt3配体、血小板生成素、白介素-6细胞因子的联合培养条件下,以不加或加入AP20187分别作为对照组和实验组.主要观察指标:①应用流式细胞仪测定两组CD34 细胞中所含绿色荧光蛋白细胞的百分率,确定基因转移率.②扩增后的脐血祖细胞集落培养结果.③取培养10周的脐血CD34 细胞于裸鼠的胁部皮下注射,30 d后观察成瘤情况.结果:①实验组与对照组均可获得CD34 细胞大量扩增.随着培养时间的延长,实验组扩增的CD34 细胞GFP阳性率由基线水平逐渐上升于第11周时达到95%以上,而对照组绿色荧光蛋白报告基因阳性率逐渐下降到基线水平以下并逐渐消失.②实验组转基因CD34 细胞于12周后仍可产生造血祖细胞集落红系祖细胞、粒单系祖细胞、脐血多向造血祖细胞,所形成的造血祖细胞集落以粒单系祖细胞为主.③裸鼠实验无致瘤特性.结论:转染JAK2 基因的人脐血CD34 细胞协同其他细胞因子可以体外长期扩增脐血干祖细胞,对今后开展干细胞治疗某些遗传性血液病有潜在的应用价值.     

靶基因调控的脐血干/祖细胞体外长期扩增与调控的实验研究

目的探讨转基因JAK2介导的脐血干祖细胞长期扩增调控的可行性和安全性。方法构建逆转录病毒载体MGI-F2JAK2,内含有JAK2基因的功能催化区和两个与小分子靶向基因合成药物(AP20187)结合的位点蛋白(2xF36v,F2)组成。AP20187可与F36v特异结合引起JAK2二聚化而激活细胞内信号传导。该载体同时含有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因,用作检测细胞增殖的标记。应用MiniMACS免疫磁珠分选系统纯化分离脐血CD34 细胞,用含JAK2的逆转录病毒上清转染脐血CD34 细胞。转导后的CD34 细胞在SCF、FL、TPO、IL-6细胞因子的联合培养条件下,以不加或加入AP20187分别作为对照组和实验组。定期检测CD34 细胞基因转移后GFP动态变化、细胞免疫标记、造血祖细胞集落培养和裸鼠致瘤试验。结果分选的CD34 细胞纯度为91%以上,基因转移率为49．3%±6．2%；实验组AP20187 SCF FL TPO IL-6(ASFTI)与对照组SCF FL TPO IL-6(SFTI)组均可获得CD34 细胞大量扩增。随着培养时间的延长,实验组扩增的CD34 细胞GFP阳性率由基线水平逐渐上升于第11周时达到95%以上,而对照组GFP阳性率逐渐下降到基线水平以下并逐渐消失。在培养6周左右,实验组CD34 CD38-、CD34 CD38 细胞亚群扩增倍数分别为(228．26±32．31)、(321．48±40．52),分别与对照组相比,差异有显著性。ASFTI组转基因CD34 细胞于12周后仍可产生造血祖细胞集落(BFU-E、CFU-GM、CFU-Mix)。扩增后CD34 细胞检测染色体核型正常,裸鼠实验无致瘤特性。结论转染JAK2基因的人脐血CD34 细胞协同其他细胞因子可以体外长期扩增脐血干祖细胞,对今后开展干细胞治疗某些遗传性血液病有潜在的应用价值。     

凝血活酶参考品国际敏感度指数的标定

目的标定出凝血活酶参考品（ＷＲＰ），为国内凝血活酶产品国际敏感度指数（ＩＳＩ）的标定提供依据。方法以凝血活酶国际参考品为标准（ＩＲＰ），按照世界卫生组织（ＷＨＯ）推荐的凝血活酶国际参考品的使用方法进行测定，计算出被标定凝血活酶参考品的ＩＳＩ值和标定ＩＳＩ值的变异系数（ＣＶ）。结果标出的凝血活酶参考品的ＩＳＩ值为１．３５，标定ＩＳＩ值的ＣＶ为４．３％。符合ＷＨＯ的要求（ＣＶ≤５％）。结论用ＩＲＰ标定的凝血活酶参考品可作为国内凝血活酶试剂ＩＳＩ值标定的标准。